mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制研究

目的：初步探讨mTOR抑制剂AZD2014对肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：先采用CCK-8法检测不同浓度的AZD2014（10、100、500、1 000 nmol/L）对肝癌细胞增殖的作用，再分别采用荧光定量PCR和Western blot法检测肝癌细胞中含植物同源结构和环指域泛素样蛋白1（UHRF1）mRNA和蛋白的表达水平。结果：细胞增殖实验结果显示，10、100、500、1 000 nmol/L的AZD2014均可显著抑制肝癌细胞的增殖能力，抑制程度与其浓度呈正相关（P < 0.05）；荧光定量PCR和Western blot检测结果显示，500和1 000 nmol/L的AZD2014可显著降低肝癌细胞内UHRF1 mRNA及蛋白的表达水平。结论：AZD2014可能通过抑制肝癌细胞内UHRF1的表达水平来抑制肝癌细胞的增殖能力。     

毛蕊异黄酮抑制肺腺癌细胞增殖和迁移的miR-21/PTEN信号通路机制研究

目的:探讨毛蕊异黄酮(CA)通过调控微RNA-21(miR-21)/人类第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用机制。方法:以人肺腺癌SPC-A1细胞为对象,采用MTT法检测不同剂量CA(5、15、25、50、75、100μg/mL)作用12、24、48、72 h后的细胞增殖情况,并计算细胞存活率、30%细胞生长抑制浓度(IC_(30))和半数抑制浓度(IC_(50));采用Transwell迁移试验检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/m L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录染色细胞数并计算细胞迁移抑制率;采用蛋白质印迹法和实时聚合酶链反应法检测低、中、高剂量CA(50、75、100μg/mL)作用24 h后细胞miR-21以及PTEN、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白及其mRNA的表达情况;检测细胞在分别转染miR-21模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)后,CA(75μg/mL)对其miR-21及PETN、VEGF、MMP-9蛋白表达的影响。结果:经50、75、100μg/mL CA作用12、24、48 h,25、50、75、100μg/m L CA作用72 h后,细胞存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);12～72 h各时间点CA的IC_(30)值分别为82.24、50.45、46.34、31.81μg/mL,IC_(50)值分别为108.06、73.35、70.08、49.89μg/mL。与正常对照组比较,CA各剂量组染色细胞数,低剂量组细胞中VEGF蛋白以及中、高剂量组细胞中miR-21,VEGF、MMP-9蛋白及其mRNA的相对表达量均显著减少或降低,且中、高剂量组显著少于或低于低剂量组,高剂量组显著少于或低于中剂量组(P<0.05或P<0.01);CA各剂量组细胞迁移率以及中、高剂量组细胞中PTEN蛋白及其mRNA的相对表达量均显著升高,且中、高剂量组显著高于低剂量组,高剂量组显著高于中剂量组(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 mimic后,miR-21 mimic组细胞miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著升高,PTEN蛋白的相对表达量显著降低(P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较miR-21 mimic组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。转染miR-21 inhibitor后,miR-21 inhibitor组细胞中miR-21及VEGF、MMP-9蛋白的相对表达量均较正常对照组显著降低,PTEN蛋白的相对表达量显著升高(P<0.05或P<0.01);加入CA干预后,细胞中miR-21及上述蛋白的表达较miR-21 inhibitor组均未见明显变化(P>0.05)。结论:CA可剂量依赖性地抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖和迁移,且这种作用可能与调控miR-21/PTEN信号通路有关。     

低浓度二氧化氯气体对黑曲霉生长抑制效果的研究

摘要 目的 观察低浓度二氧化氯气体对黑曲霉的生长是否具有抑制作用。方法 采用培养基平皿为染菌载体，观察低浓度 (0.28±0.02) mg/m3二氧化氯气体对黑曲霉生长的影响。结果 试验组空气中二氧化氯浓度保持在(0.28±0.02) mg/m3，作用48 h后对照组有霉菌菌落生长，试验组未长出菌落，仅有微量菌丝生长；作用72和96 h，对照组和试验组均有菌落生长，对照组菌落直径及生长面积是试验组的2倍以上；作用48、72和96 h，对照组霉菌生长等级均大于试验组霉菌生长等级。结论 在试验观察期内，低浓度二氧化氯气体对黑曲霉的生长有抑制作用。     

海莲叶提取物对胃癌细胞增殖的抑制作用及对小鼠急性毒性实验

目的:探究海莲叶提取物对胃癌细胞增殖的抑制作用及对小鼠急性毒性实验。方法:先通过实验证实海莲叶提取物可对患者的胃癌细胞SGC-7091、MGC80-3可起到促进作用,应对实验小鼠皮下建立移植瘤模型,随后对小鼠注射海莲叶提取物,观察对胃癌细胞增殖的抑制情况,随后对药物的毒性进行分析。结果:给药组与溶媒对照组急性毒性反应相比显著较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:海莲叶提取物可对胃癌细胞增殖的抑制作用,并均已经在实验中得到了证实,海莲叶提取物可明显降低小鼠的急性毒性反应。     

奥美拉唑“交友”很挑剔

奥美拉唑是一种新型的胃酸分泌抑制剂,对各种刺激因素引起的胃酸分泌都可产生强大的剂量依赖性抑制作用。由于其疗效显著、复发率低、应用方便等特点,故被广泛用于治疗消化道溃疡等疾病。因此,该药与其他药物联合用药的概率也增加了。由于该药可能会使其他药物的作用增强或减弱,因此,与其他药物合用时要注意配伍变化。     

嗜麦芽寡养单胞菌对念珠菌抑制作用观察

目的观察嗜麦芽寡养单胞菌(SMA)对常见念珠菌属,如白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌等的抑制作用。方法收集临床上20株SMA,通过革兰染色、氧化酶试验及API 20NE(法国梅里埃公司产品)进行鉴定;通过纸片法、十字交叉划线试验及共孵育试验检测SMA对念珠菌属的抑制作用。结果 20株SMA中部分菌株对常见念珠菌有显著抑制作用,但对质控菌株大肠埃希菌(ATCC 25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)、铜绿假单胞菌(ATCC 27953)没有抑制作用。结论 SMA对常见念珠菌具有抑制作用,推测可能是与分泌一些代谢产物抑制真菌的菌丝形成有关。     

大黄素对3T3-L1脂肪细胞PTEN的抑制作用

<正>胰岛素抵抗是2型糖尿病一个主要特征,在最初阶段胰岛素和自由基分泌不足引起葡萄糖和脂肪酸调节异常[1]。第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)是一种脂质磷酸酶,PTEN表达上调或活性增强是导致胰岛素抵抗的一个主要发生机制,有望作为改善胰岛素抵抗的一个新靶点[2-3]。大黄素化学名1'3'8-三羟基-6-甲基蒽醌,为蓼科植物虎杖的干燥根茎和根及掌叶大黄根茎     

白头翁皂苷B4对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制研究

目的:研究白头翁皂苷B4(AB4)对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制。方法:将Huh-7细胞分为AB4给药组、阴性对照组(等体积培养液)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50μmol/L),运用MTT法检测0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、1 600μmol/L AB4作用Huh-7细胞12、24、36、48 h的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);克隆形成试验评估50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)染色检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的细胞凋亡率;Western blot法检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h后B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)等凋亡蛋白的表达。将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50 mg/kg)和AB4低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg),每组3只,每天腹腔注射相应药物1次,连续19 d,观察裸鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞形态变化。结果:AB4对Huh-7细胞的增殖抑制率随给药浓度的增加而增加,但50μmol/L后增加不明显,随作用时间的延长而增加,但作用24 h后增加不明显,AB4的IC50为(56.76±1.756)μmol/L。与阴性对照组比较,50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数明显减少、Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达均明显增加(P<0.05或P<0.01),且与阳性对照组差异无统计学意义。与阴性对照组比较,AB4低、中、高剂量组和阳性对照组荷瘤裸鼠的瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤细胞轮廓逐渐模糊,出现核固缩、核质不清晰、核碎裂现象,其抑瘤率分别为25.93%、39.15%、46.26%、42.83%。结论:AB4对Huh-7细胞及其荷瘤裸鼠均有抑制作用,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比例、活化Caspase-3、裂解PARP、诱导细胞发生凋亡有关。     

脐带华氏胶来源间充质干细胞对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞免疫抑制作用

已证实间充质干细胞(mesenchymal stromal cell, MSC)具有免疫调节作用,骨髓来源的MSC具有显著的免疫抑制效果,但骨髓的采集对供者而言是创伤性操作。脐带为产科废弃物,采集容易且对产妇、婴儿无任何损伤。为了探索脐带华氏胶来源MSC(Wharton's jelly-derived MSC, WJ-MSC)的免疫抑制作用,采用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)评估WJ-MSC对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的免疫抑制作用。研究证实在MLR中,异基因来源的反应性T淋巴细胞可以有效地被来自供者、受者或第三方的WJ-MSC抑制;在Transwell分离培养中,WJ-MSC的免疫抑制作用较直接接触培养弱;随着吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2, 3-dioxygenase, IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan, 1-MT)剂量的增加, WJ-MSC对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的抑制作用逐渐减弱;长期培养传代后的第10代WJ-MSC也有较好的免疫抑制作用。这说明WJ-MSC的免疫抑制作用不受MHC的限制,其免疫抑制作用主要是通过与T淋巴细胞直接接触表达,而IDO是WJ-MSC有效的可溶性免疫抑制因子。