人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

目的:新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法.将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化.方法:实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成.①对象:神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定.清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×1011L-1,培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪.两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3 d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水.③实验评估:取未经PKH标记的细胞球, 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况.分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况.结果:在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%.①神经干细胞的鉴定及分化:80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞.②神经干细胞植入后存活及分布情况:植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布.植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似.植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少.结论:在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广.     

人神经干细胞移植治疗小儿脑性瘫痪手术前后的护理

总结人神经干细胞移植治疗小儿脑性瘫痪手术的护理经验。31例重症小儿脑性瘫痪患儿在B超定位引导下行人神经干细胞移植,根据手术要求制定了一系列护理计划,包括术前心理指导、术前宣教、术后特殊体位、术后康复指导等。31例患儿移植术全部顺利进行。认为患儿家长对该病及治疗方法知情充分,保持平和的心态,以有效、健康的方式参与对患儿的照顾,并积极配合是移植术顺利进行的重要保障。     

“和谐使命-2011”儿科医疗服务工作回顾

目的分析在加勒比地区进行海外医疗服务时儿童门诊就诊情况,为今后开展类似的医疗服务提供经验。方法根据此次前出执行任务所登记的内容进行分类统计分析。结果 4国门诊患儿以呼吸系统疾病、皮肤过敏性疾病、运动系统疾病及先天性畸形为主,疾病中以上呼吸道感染、湿疹、哮喘为主,使用药物中以抗生素和抗过敏药物为主。结论通过本次执行任务对当地的儿童卫生状况有了初步的了解,分析了相关问题。为今后开展此类工作提供了经验。     

自体外周血CD34^＋细胞移植治疗小儿重症自身免疫性疾病的护理

小儿自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）是一组发病率高、预后差、致残率高的疾病，需长期糖皮质激素和免疫抑制治疗，但有些患儿治疗效果差。我科于2005年5月至2006年12月对6例重症AID患儿进行了自体外周血CD34^＋细胞移植治疗，现将护理重点及体会报告如下。     

小儿支原体肺炎69例临床分析

目的探讨儿童支原体肺炎(MPP)的临床特点及治疗方法。方法对69例确诊为MPP患儿的临床特点和治疗进行回顾性分析。结果本组患儿以学龄期儿童为主。发热65例(94.20%),不发热4例(5.80%)。持续性咳嗽69例(100%)。双侧斑片状阴影34例(49.28%),单侧斑片状阴影25例(36.23%),表现为间质性肺炎10例(14.49%)。多数患儿(69.56%)外周血白细胞总数正常。血清肺炎支原体特异性IgM抗体(MP-IgM)均阳性。所有病例用大环内酯类抗生素治疗2~3周均痊愈或明显好转。结论儿童MPP好发于学龄期儿童,临床症状多于肺部体征,血清学MP-IgM检测是早期诊断的必要手段,大环内酯类抗生素是有效的治疗药物。     

超顺磁性氧化铁标记神经干细胞及对其生物学特性的影响

背景:细胞标记与核磁共振联合,可无创性活体标记移植的神经干细胞存在部位、存在方式及其一些生物学特性.目的:观察超顺磁性氧化铁体外标记人神经干细胞的效果.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-12/2007-06在解放军海军总医院儿科实验室完成.材料:流产人胚胎由解放军海军总医院提供.超顺磁性氧化铁,Lot number97060601,为Advanced magnetics,inc.American 产品.方法:取人胚胎脑海马组织,机械法分离单细胞悬液,加入含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的神经干细胞培养基体外培养.取11.2 g/L.超顺磁性氧化铁,用神经干细胞培养基稀释成28 mg/L.后,加入1.0 mg/L多聚赖氨酸8μL混匀,制成超顺磁性氧化铁一多聚赖氨酸复合物的标记培养基.取增殖活跃的神经干细胞球,机械吹散制成浓度为1×109 L-1的单细胞悬液,加入等体积的含超顺磁性氧化铁的无血清培养液.1周后撤除各种细胞因子,添加体积分数为5%的胎牛血清诱导神经干细胞分化24 h.主要观察指标:普鲁士蓝染色鉴定标记阳性率,免疫荧光染色检测分化细胞胶质纤维酸性蛋白和神经丝的表达. 结果:超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞球颜色微黄,与末标记细胞比较,其克降形成的速度并没有减慢.经超顺磁性氧化铁标记20 h后,神经干细胞胞浆中含有蓝色铁颗粒,阳性率达90%.诱导后超顺磁性氧化铁标记的神经干细胞胶质纤维酸性蛋白、神经丝均呈阳性表达.结论:在体外超顺磁性氧化铁能够高效标记神经干细胞,且标记后不影响其生物学特性,仍可以正常扩增和定向分化为神经元、星形胶质细胞.     

“和谐使命-2011”儿科医疗服务工作回顾

目的分析在加勒比地区进行海外医疗服务时儿童门诊就诊情况,为今后开展类似的医疗服务提供经验。方法根据此次前出执行任务所登记的内容进行分类统计分析。结果 4国门诊患儿以呼吸系统疾病、皮肤过敏性疾病、运动系统疾病及先天性畸形为主,疾病中以上呼吸道感染、湿疹、哮喘为主,使用药物中以抗生素和抗过敏药物为主。结论通过本次执行任务对当地的儿童卫生状况有了初步的了解,分析了相关问题。为今后开展此类工作提供了经验。     

临床护理路径在人神经干细胞移植中的应用

目的 探讨临床护理路径在人神经于细胞(NSCs)移植治疗小儿脑性瘫痪中的应用.方法 将62名入院行NSCs移植的患儿随机分为两组,对照组住院期间采用传统方法进行护理,观察组应用护理路径进行护理.以患儿的术后并发症、平均住院天数、陪护人对护士的满意度以及护理工作人员的自身工作体会进行评价.结果 观察组患儿的术后并发症发生率明显低于对照组,平均住院天数、陪护人对护士以及护理人员对自身的工作满意度均高于对照组(P<0.05).结论 应用护理路径对脑瘫患儿进行护理,对减少神经干细胞移植并发症、缩短患儿住院天数、提高病人满意率、提高护理人员的工作能动性、优化简明护理工作、完善护患关系有积极作用.     

慢性缺氧性肺动脉高压大鼠心,肺心房钠尿肽的含量变化

观察慢性缺氧性肺动脉高压（ＣＨＰＡＨ）大鼠心、肺心房钠尿肽（ＡＮＰ）含量变化。结果显示右心室、肺组织、肺灌流液及动脉血浆ＡＮＰ含量较对照组显著增加（Ｐ〈０．０５￣０．０１），但右房心肌组织ＡＮＰ含量与对照组相比相差不显著（Ｐ〉０．０５）。提示ＣＨＰＡＨ大鼠心、肺合心ＡＮＰ代谢代偿性增加，并以右心室尤为显著。     

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布★

目的：新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因，至今缺乏有效疗法。将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠，观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化。 方法：实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成。①对象：神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织，孕妇签署知情同意书，符合医院伦理委员会规定。清洁级SD新生鼠80只，随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组，40只/组，实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取人胚胎脑组织，机械分散法分离单个核细胞，接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中，获取生长旺盛的人神经干细胞球，制成单细胞悬液，浓度约为5.0×1011 L-1，培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪。两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型，造模后3 d，细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液，模型对照组于相同部位注入等量生理盐水。③实验评估：取未经PKH标记的细胞球， 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况。分别于细胞移植后1，2，4周及3个月，常规取脑组织，行免疫组织化学和荧光分析，观察植入后细胞存活及分布情况。 结果：在造模及细胞移植过程中，因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只，模型对照组死亡7只，存活率85%~90%。①神经干细胞的鉴定及分化：80％活细胞巢蛋白呈阳性表达，并可分化为神经元、星形胶质细胞。②神经干细胞植入后存活及分布情况：植入后1周，神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处，纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布。植入后2周，海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞，胞体伸出的神经微丝更长，细胞数量与1周时基本相似。植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少。 结论：在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球，具有良好的增殖能力，可分化为神经元，移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移，分布范围广。