自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放

目的 通过研究肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法 利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生自噬的水平,通过测定染毒细胞培养上清中EV71病毒CCID50来观察抑制自噬后细胞释放EV71感染性病毒颗粒的变化.结果 EV71的感染促进了细胞LC3的型别转换和F62的降解,诱导了细胞发生自噬;3-MA抑制细胞自噬后,EV71染毒细胞产生的感染性EV71病毒颗粒数量减少.结论 EV71可以诱导细胞发生自噬,细胞自噬可能促进EV71感染性病毒颗粒的产生和释放.

Abstract：

Objective To determine whether or not enterovirus 71 ( enteroviurs 71, EV71) may induce autophagy and affect the production and release of EV71 after the treatment of autophagy inhibitor. Methods Western blots were performed to examine the conversion of LC3- Ⅰ to LC3-Ⅱ and the degradation of P62 after the RD-A cells were infected with EV71. CCID50 was determined by checking the virus titer in the supernatant of cells that treated with autophagy inhibitor 3-MA. Results EV71 infection enhances the type conversion of LC3 and degradation of P62. The infectious virus particles were decreased after the treatment of 3-MA. Conclusion EV71 infection could induce cell autophagy and the autophagy might contribute to the production and release of infectious EV71 particles.     

机会性筛查人群中高危型人乳头瘤病毒与宫颈病变相关性的分析

目的 研究第二代杂交捕获法(HC2)高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)检测阳性样品中HPV与宫颈病变的相关性.方法 随机抽取HC2阳性患者602名(344名行细胞学检查),采用PCR-反向点杂交(RDB)法对HPV分型并分析HPV型别与细胞学的相关性.结果 602例患者PCR阳性率94.5%;HPV分型检出率依次为HPV16、52、58、56、39等;HC2检测谱外单独感染24例;HPV16、HPV16/18与ASCUS、LSIL、HSIL有明显相关性.结论 机会性筛查人群中最常见HPV型别依次为HPV16、52、58;HC2检测的假阳性率为4.0%;HPV16与宫颈病变程度相关.     

肠道腺病毒的研究进展

肠道腺病毒（enteric adenovirus,EAdv）是导致儿童腹泻的重要病原体,发病率仅次于轮状病毒、诺如病毒.研究表明在免疫缺陷患者中EAdv易引起并发症的发生,甚至导致死亡.国内外有EAdv暴发或流行的报道[1].虽然近年来的研究发现A、C、D、G等其他亚型的腺病毒均可引起婴幼儿急性腹泻[2],但EAdv仍以F亚群的40型和41型最为常见,其代表株分别为原型株Dugan-Hovix病毒和Tak病毒.自1995年程绪杰等在我国从儿童粪便中分离到EAdv以来,我国对EAdv的研究越来越重视.本文就肠道腺病毒及其相关研究进展进行综述.     

反向遗传学在登革病毒研究中的应用

关于登革病毒及其感染的研究迄今还有很多尚未解决的问题,利用反向遗传学技术(reverse genetic8 approache8)对登革病毒进行研究是目前的热点.本文将就近年来反向遗传技术在登革病毒研究中的研究进展进行综述.     

登革Ⅰ型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达

目的 分泌表达登革Ⅰ型病毒prM/E基因,为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础.方法 用RT-PCR法获得登革Ⅰ型病毒广州分离株全长prM/E基因,在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20%为乙脑病毒E基因相应的部分,分别将其克隆入真核表达载体pcDNAS/FRT中,获得三种重组质粒DlprME-pc5,D1JsprME-pc5,D1JsprM80E20JE-pc5.用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞,通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达.结果 用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革Ⅰ型病毒蛋白的表达.Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带,转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革Ⅰ型病毒的特异蛋白条带.结论 转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革Ⅰ型病毒prM/E蛋白,只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达.     

宫颈透明细胞癌中人乳头瘤病毒的检测

目的 探讨宫颈透明细胞癌中高危型HPV感染情况.方法 提取1例37岁宫颈透明细胞癌患者手术切除组织蜡块中的DNA,通过巢式PCR方法检测其中HPV感染情况.结果 该患者肿瘤切除组织高危型HPV18型阳性.结论 利用巢式PCR方法分型检测宫颈透明细胞癌中的高危型HPV型别,其准确性及敏感性均较高.     

人乳头瘤病毒与食管癌病原学关系的Meta分析

目的 探讨人乳头瘤病毒(Human papiuomavirus,HPV)与我国食管癌发生的相关性.方法 汇总了国内有关HPV与食管癌相关的论文,选择采用PCR方法检测的论文对发表的数据进行Meta分析.结果 我们以检测方法为PCR、标本为石蜡包埋标本、论文中列出或提示了引物序列的15篇论文作为入选论文.15篇文献涉及蜡块标本共980份,按照只要检出一个HPV型别即为HPV阳性进行计算,检出阳性例数为460例,各地HPV检出率为8.3%～69.8%,HPV平均检出率为46.9%(95%CI:43.8%～50.0%).在以上980份样品中,检测范围包括了HPV16型的样品有556份,阳性份数为139份,各地检出率为4.4%～63.4%,平均检出率为25.0%(95%CI:21.4%～28.6%);检测范围包括HPV18型的样本有485份,阳性份数为33份,各地检出率为0%～19.0%,HPV18型的平均检出率为6.8%(95%CI:4.6%～9.0%).以上15篇论文中,使用同一引物的文献只有4篇,共检测406份石蜡包埋标本,HPV阳性率为20.3%～67.6%,平均检出率为40.2%(95%17 CI:36.0%～45.4%).结论 我国食管癌组织中有HPV存在,并且HPV感染可能食管癌发生的重要病因.     

登革3型病毒义乌流行株免疫原性研究

目的对2009年浙江省义乌市暴发流行的登革3型病毒进行系统进化分析并初步研究其E蛋白的免疫原性。方法 RT-PCR扩增义乌分离株全基因组,利用MEGA 4分别构建E及NS1区域核苷酸及氨基酸系统发生树,进行系统进化分析。构建重组质粒JESS-ywD3prM/E397JEV-pcDNA5,IFA及Western Blot检测E蛋白在293T细胞中的表达及分泌情况。将纯化后的分泌性E蛋白免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、中和试验等方法对体液免疫进行测定。结果登革3型病毒义乌分离株与广州GZ1D3株及印度GWL-25株核苷酸及氨基酸序列同源性均达到99%以上;其分泌性E蛋白可以刺激小鼠产生登革特异性IgG抗体及针对同型病毒的中和抗体。结论义乌分离株属于登革3型病毒亚型Ⅲ,其分泌性E蛋白具有一定的免疫原性。     

耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。     

223例健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌菌群的鉴定

目的检测健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要菌群种类及其产生过氧化氢的能力。方法采集223例健康育龄妇女阴道侧壁的分泌物，经过乳酸杆菌选择性培养基（Rogosa）与肉汤培养基（MRS）分离培养后，提取细菌染色体DNA，PCR扩增细菌的16SrRNA基因，测定16SrRNA核苷酸序列，然后与基因库（GenBank）中的数据进行比对，确定细菌的种类。并对乳酸杆菌产生过氧化氢的情况进行分析。结果从223例健康育龄妇女阴道中分离到8种乳酸杆菌种属，较常见的种属为卷曲乳杆菌（53．7％），詹氏乳杆菌（27．9％）与格氏乳杆菌（10．3％）。其他少见的细菌类型包括阴道乳杆菌（2．2％），L．coleohominis（1．5％），约氏乳杆菌（1．5％），嗜酸乳杆菌（1．5％）及发酵乳杆菌（1．5％）；大多数乳酸杆菌均能产生过氧化氢，其中卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌产生过氧化氢的能力较强。结论卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌和格氏乳杆菌是健康育龄妇女阴道内乳酸杆菌的主要种属。卷曲乳杆菌和詹氏乳杆菌有较强的产生过氧化氢的能力。