德国小蠊细胞色素P450 CYP4G19基因的原核表达及多克隆抗体制备

目的 构建细胞色素P450 CYP4G19基因部分片段的原核表达载体并诱导其表达,纯化表达的融合蛋白并制备CYP4G19多克隆抗体.方法 应用RT-PCR扩增CYP4G19基因部分片段,产物经T-A克隆、测序鉴定,亚克隆入原核表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,镍离子亲和层析法纯化重组蛋白后,免疫小鼠,获得多克隆抗体,ELISA及Western.blot检测多抗的效价及特异性.结果 从德国小蠊cDNA中克隆出一段771bp的亲水性基因片段,在大肠杆菌中诱导表达出约32000 Mr、以包涵体形式存在的P450重组蛋白.将纯化、复性的重组蛋白免疫 9,得到了滴度高于1:10<'6>的高效价多克隆抗体.Western-blot显示此多抗能与32000 Mr的重组蛋白特异结合.并能识别天然的德国小蠊微粒体P450蛋白.结论 利用原核表达的CYP4G19融合蛋白具有良好的免疫原性.制备出效价高、特异性强的抗德国小蠊CYP4G19多克隆抗体,为下一步关于德国小蠊CYP4G19蛋白表达特性及其抗药性功能的深入研究提供了重要的实验工具.     

支气管哮喘特异性免疫治疗与变应原疫苗的研究进展

特异性免疫治疗(SIT)被认为是目前唯一哮喘病因治疗方法，通过基因工程技术获得纯化和标准化重组变应原能取代传统的天然变应原浸液，具有较好的免疫原性，能增强治疗的疗效。本文就近几年哮喘特异性免疫治疗与变应原疫苗研究中新进展进行回顾总结。     

日本血吸虫Calpain疫苗候选分子抗感染的免疫机制

目的探讨日本血吸虫疫苗候选分子—钙离子激活的中性蛋白激酶(Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法用重组纯化的Calpain抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗Calpain血清,抗Calpain血清与机械转化的日本血吸虫童虫和来自于同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养,观察细胞对血吸虫童虫的粘附及对童虫的杀伤效果;RT-PCR分析Calpain抗原免疫BALB/c小鼠一氧化氮激酶(iNos.eNos.nNos)mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4。结果重组Calpain抗原免疫小鼠后,产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体,此抗体介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的粘附,37℃、5%CO2培养48h后,33.8%的日本血吸虫童虫被杀死,与控制组14.5%的自然死亡率相比有一个显著性的增高(P<0.01);RT-PCR测定重组Calpain抗原免疫1周小鼠iNosmRNA的表达显著性的增强,培养24h脾细胞上清中IFN-γ浓度高于对照组。结论Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用,Calpain抗原能够诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗日本血吸虫的感染。     

LC-ICP-MS联用测定海产品中有机锡

目的采用液相色谱与电感耦合等离子体质谱联用分析法(LC-ICP-MS),测定广东沿海海域海产品中三丁基锡、三苯基锡含量,探明广东沿海海产品有机锡的污染状况。方法有代表性地采集广东海域17个海区及部分市售海产品,样品冻干处理制成干粉,加入流动相经超声萃取、离心、过滤等处理后,用LC-ICP-MS法测定三丁基锡、三苯基锡含量。结果所检测的32种共112个海产品样品中,以湿重计算的三丁锡含量最高的为58.7ngSn/g,平均浓度是8.6ngSn/g,以湿重计算的三苯基锡含量最高的为324.1ngSn/g,平均浓度是44.9ngSn/g。结论广东沿海海域海产品已受到一定程度的有机锡污染,而其中三苯基锡的污染情况比三丁基锡严重。     

As2 O3对人胃癌BGC-823 细胞端粒酶的影响

 目的 观察三氧化二砷（As₂ O₃）对人胃癌BGC-823细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因转录的影响。方法 用不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC-823细胞，通过MTT法测定细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡变化；TRAP PCR ELIsA方法检测细胞端粒酶活性的变化；RT-PCR半定量方法检测细胞端粒酶hTEI汀基因mRNA的转录水平。结果 三氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，抑制作用随三氧化二砷浓度的升高及作用时间的延长而增强。细胞的端粒酶活性明显下降，细胞hTERT基因的转录表达显著抑制。BGC-823细胞端粒酶活性的下调与As₂ O₃作用时间和浓度有关，呈现明显的时间-剂量效应关系。结论 As₂ O₃能够抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖、促使细胞凋亡、抑制细胞的端粒酶活性。As₂ O₃是一种良好的端粒酶抑制剂，在肿瘤的治疗中具有一定应用价值。     

灯盏花素配合硝苯地平对肾性高血压大鼠肾细胞p53mRNA的影响

目的观察灯盏花素配合钙通道阻滞剂硝苯地平对双肾动脉狭窄性高血压大鼠肾损伤的保护作用,以及对大鼠肾脏细胞p53mRNA表达的影响。方法52只SD雄性大鼠随机分成五组:正常对照组、假手术组、高血压模型组、硝苯地平组、硝苯地平配合灯盏花素组。用双肾双夹法使大鼠两肾动脉狭窄,复制肾血管性高血压肾损坏模型,采用EIA法测定尿白蛋白,血清生化检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),荧光定量PCR测定p53mNRA含量。结果用药30天后,与模型组比较,硝苯地平组和灯盏花素 硝苯地平治疗组血压、血肌酐和24 h内蛋白排泄量明显下降(P<0.05),硝苯地平组和灯盏花素 硝苯地平治疗组肾脏细胞p53mRNA含量明显低于模型组(P<0.05),比正常对照组和假手术组高(P<0.05)。结论灯盏花素配合硝苯地平对肾血管性高血压模型有改善肾功能和降低肾脏细胞p53mRNA表达的作用。配合灯盏花素比单用硝苯地平效果好。     

肉桂提取物对粉尘螨杀灭的实验研究

目的研究肉桂(Cinnamomum cassia Presl)不同溶剂提取组分对室内粉尘螨(Dermatophagoides farinae)的杀灭活性。方法肉桂粉碎后以石油醚、乙酸乙酯、甲醇为提取剂,分别用索氏提取法、浸渍法提取肉桂的不同有效组分;以作用浓度和作用时间为变量,分别用直接接触法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取组分对粉尘螨的杀灭活性,用熏蒸法测试肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组份对粉尘螨的杀灭活性。结果直接接触法测试肉桂不同组分对粉尘螨杀灭活性的结果显示作用24h时肉桂石油醚提取组分和乙酸乙酯提取组分的LD50分别为4.64μg/cm2和1.44μg/cm2,甲醇提取组分对粉尘螨则不具有显著杀灭活性;从作用时间上看,石油醚组分作用时间最短,乙酸乙酯组分次之;熏蒸法测试结果显示肉桂石油醚、乙酸乙酯提取组分使用剂量为6.09μg/cm2和9.75μg/cm2时作用24h后对粉尘螨的致死率即达到100%。结论本文研究结果表明肉桂的石油醚和乙酸乙酯提取组分对粉尘螨具有良好的杀灭活性,呈剂量、时间依赖性,且与作用方式直接相关。     

定点突变法确定人体CYP2A6 和 CYP2A13香豆素 代谢的关键氨基酸

  【目的】 通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基, 提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据&#65377; 【方法】 运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6 和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析&#65377; 【结果】 与野生型CYP2A6相比较,其Ile300 → Phe突变体催化效率(Kcat = Vmax / Km)显著下降而Gly301 → Ala 突变体催化效率显著上升(1.64 和8.02 相对于野生型3.56, P < 0.01)&#65377;与之相对应,CYP2A13 的Phe300 → Ile 突变体催化效率则明显上升而Ala301 → Gly 突变体催化效率显著下降(1.03 和0.06 相对于野生型的0.27, P < 0.05)&#65377;这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax 的改变所致&#65377;369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响&#65377; 【结论】 300 和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性&#65377;     

德国小蠊抗药性及抗性机理的研究进展

德国小蠊的抗药性问题日渐突出，成为城市害虫防治的一大难点。德国小蠊抗性机理的研究可为抗性监测、治理以及新型杀虫剂的开发提供理论基础。本文主要就德国小蠊的抗药性产生情况及抗性机理的研究进展进行综述。