问号钩端螺旋体脂蛋白LipL32膜定位及其免疫应答

目的 确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性脂蛋白抗原LipL32膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型.方法 IPTG诱导目的 重组蛋白rLipL32-1和rLipL32-2表达,Ni-NTA亲和层析法提纯rLipL32.采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区钩体患者血清标本及rLipL32兔抗血清与我国问号钩体参考标准株的交叉凝集情况.采用胶体金免疫电镜技术对LipL32进行膜定位.建立基于rLipL32的ELISA,检测钩体患者血清中特异性抗体类型及其水平.结果 黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群.rLipL32兔抗血清均能与我国问号钩体参考标准株发生MAT效价为1∶80～1∶320的交叉凝集反应.LipL32是位于钩体外膜表面的蛋白质分子.156例MAT阳性钩体患者血清标本中,rLipL32-1和rLipL32-2特异性IgM阳性率分别为91.0%～92.9%和90.4%～92.3%,特异性IgG阳性率分别为99.4%和97.4%～98.1%.结论 LipL32是问号钩体属特异性表面蛋白抗原.自然感染钩体时,LipL32-1和LipL32-2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体.rLipL32-1和rLipL32-2可作为研制检测试剂盒的候选抗原.     

问号钩端螺旋体属特异性LipL41s抗原膜定位及其患者血清抗体检测

目的确定问号钩端螺旋体（钩体）属特异性脂蛋白抗原LipL41s膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型。方法采用显微镜凝集试验（MAT）检测四川地区钩体病患者血清标本。IPTG诱导重组原核系统表达目的蛋白rLipL41／1和rLipL41／2，Ni—NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物。采用Westernblot检测感染不同血清群问号钩体病患者血清与rLipL41s的免疫反应性。采用胶体金免疫电镜技术，对LipL41s进行膜定位。建立基于rLipL41s的ELISA，检测钩体病患者血清中特异性抗体水平及其类型。结果黄疸出血群是四川地区最主要的优势钩体血清群。不同血清群问号钩体病患者血清均能有效识别LipL41s。LipL41s是位于钩体外膜表面的蛋白分子。156例MAT阳性钩体病患者血清标本中，rLipL41／1和rLipL41／2特异性IgM阳性率分别为84．6％～87．8％和78．2％～83．3％，特异性IgG阳性率分别为69．2％～81．4％和75．0％～80．1％。结论LipL41s是钩体表面蛋白抗原。自然感染钩体时，LipL41／1和LipL41／2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体，且两者之间有广泛的抗原交叉反应。rLipL41／1和rLipL41／2可作为研制通用型钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原。