变形链球菌黏附对铜铝合金、钴铬合金表面粗糙度影响的初步研究

目的研究变形链球菌黏附对铜铝合金、钴铬合金表面粗糙度的影响。方法用6JA型干涉显微镜测量金属试件的表面粗糙度,了解变形链球菌黏附铜铝合金、钴铬合金表面一段时间后,金属表面粗糙度的变化。结果钴铬合金试件空白组、实验组6周、10周3组金属试件表面粗糙度(Rz)均值总体之间差异无显著性(P>0.05)。铜铝合金试件空白组、实验组(8周)、对照组(8周)3组金属试件Rz均值总体之间差异有显著性(P<0.05),两两比较,各组间差异均有显著性(P<0.05)。结论变形链球菌黏附钴铬合金表面短时间内金属表面粗糙度无明显变化,黏附铜铝合金表面粗糙度变化明显。     

联合应用胰岛素样生长因子-I和骨形成蛋白-2促小鼠成骨样细胞及成纤维细胞增殖和分化的效应

目的探讨重组人胰岛素样生长因子-I(rhIGF-I)和重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)单独及联合应用对MC3T3-E1和NIH3T3细胞增殖和分化的影响。方法单独或联合应用不同浓度rhIGF-I和rhBMP-2作用于MC3T3-E1和NIH3T3细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞分化情况,放射免疫法检测细胞分泌的骨钙素(OC)水平。结果1～75ng/mlrhIGF-I与10～100ng/mlrhBMP-2作用于MC3T3-E1和NIH3T3细胞后,均能显示明显的促细胞增殖(P<0.01)及使ALP活性增高(P<0.05)的作用。各浓度rhIGF-I或rhBMP-2对MC3T3-E1及NIH3T3细胞作用8、24和48h的MTT检测结果相似。rhIGF-I和rhBMP-2联合作用后,对两种细胞的促增殖、增强ALP活性的作用均较各自单独作用更为明显(P<0.05)。单独或联合应用不同浓度rhIGF-I和rhBMP-2对细胞分泌的OC水平均无显著影响(P>0.05)。结论rhIGF-I和rhBMP-2具有明显的促细胞增殖及早期分化的协同作用,但对成骨末期细胞分化影响不大,其活性主要与使用剂量有关。     

福尔马林灭活RSV疫苗增强性疾病模型建立及特征研究

以福尔马林灭活呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗(兀-RSV)预防接种的婴儿或学龄前儿童,自然感染RSV后较之未接种疫苗感染者表现出更为严重的支气管痉挛性肺炎[1].此类因疫苗免疫接种使相应病原微生物感染时致病作用增强的疾病或现象,称为"疫苗增强性疾病"(vaccine enhanced disease.VED).目前关于VED免疫病理调控机制的研究多建立在动物模型基础上[2].本研究通过制备FI-RSV疫苗,建立BALB/c小鼠FI-RSV相关VED模型,定义其病毒滴度、抗体水平以及病理诊断特征,为进一步研究RSV相关VED的分子机制提供实验资料.     

丽蝇蛹集金小蜂雌蜂的寄主选择性

目的研究丽蝇蛹集金小蜂对寄主蛹的选择性。方法采用Y型管选择性实验。结果丽蝇蛹集金小蜂雌蜂对棕尾别麻蝇蛹的选择性显著高于丝光绿蝇蛹和家蝇蛹,而对丝光绿蝇蛹和家蝇蛹的选择性差异无统计学意义(P>0.05);就棕尾别麻蝇不同虫态而言,丽蝇蛹集金小蜂雌蜂对棕尾别麻蝇蛹和预蛹的选择性均显著高于3龄幼虫,对蛹的选择性显著高于预蛹;就棕尾别麻蝇蛹不同状态而言,丽蝇蛹集金小蜂雌蜂对未寄生蛹的选择性显著高于寄生蛹,而对滞育蛹和非滞育蛹的选择性则差异无统计学意义(P>0.05)。结论在本研究中,丽蝇蛹集金小蜂雌蜂对棕尾别麻蝇未寄生蛹选择性最好。     

二重PCR检测龈下菌斑中齿垢密螺旋体感染及其与牙周炎病变程度的关系

目的 建立龈下菌斑标本中齿垢密螺旋体二重PCR临床快速检测方法,了解齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎病变程度之间的关系。方法 采取158例不同病变程度的慢性牙周炎龈下菌斑标本,用终浓度为1％的Triton X-100 100℃水浴10 min处理标本以制备DNA模板。采用PCR检测标本中齿垢密螺旋体16S rDNA和特征性外膜蛋白基因tdpA。采用卡方检验分析齿垢密螺旋体感染与慢性牙周炎(CP)不同病变程度的关系。结果 85.4％(135/158)标本16S rDNA阳性,77.2％(122/158)tdpA阳性,14.6％(23/158)两者均阴性,未发现tdpA阳性而16S rDNA阴性的标本。重度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均高于中度cP(r2=4.03,5.71;P<0.05),中度CP龈下菌斑标本16S rDNA和tdpA检出率均明显高于轻度(X2=9.32,16.06,P<0.01)。结论 所建立的二重PCR可用于牙周炎龈下标本中齿垢密螺旋体的临床快速诊断,齿垢密螺旋体感染与牙周病变程度密切相关。     

幽门螺杆菌临床菌株2148 bp的cagA基因片段克隆、表达及免疫性鉴定

目的　克隆幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)临床菌株的cagA基因片段 ,构建原核表达系统 ,鉴定重组表达产物的免疫原性。方法　由于cagA基因核苷酸序列变异较大 ,选择序列相对稳定的 2 14 8bp为目的片段 (cagA1)。采用高保真PCR扩增幽门螺杆菌临床分离菌株Y0 6中的目的片段cagA1,T -A克隆后测序。构建 pET32a的cagA1片段表达载体 ,在E coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白 (rCagA1)。采用Hp全菌抗体的Westernblot鉴定rCagA1免疫反应性 ,免疫双扩散试验鉴定rCagA1免疫家兔的抗血清效价。 结果　PCR获得预期大小的目的扩增条带。与文献报道比较 ,克隆的cagA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 83%和93 30 %。所构建的原核表达系统 pET32a -cagA1-E coliBL2 1DE3目的重组蛋白 (rCagA1)表达量为细菌总蛋白的 30 %左右。Westernblot证实rCagA1能与Hp全菌抗体发生特异性免疫结合反应。兔抗rCagA1血清的免疫双扩散效价为 1∶4。结论　本文成功地构建了HpcagA基因片段cagA1的高效原核表达系统 ,所表达的rCagA1具有良好的免疫原性和免疫反应性 ,为进一步研制cagA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。     

问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因的构建及其表达产物免疫性的鉴定

目的构建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL32／1-lipL41／2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32／1-lipL41／2融合基因，常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白lipL32／1-lipL41／2表达情况。采用Westernblot鉴定lipL32／1-lipL41／2的免疫反应性。采用ELISA检测228例钩体病人血清中lipL32／1、lipL41／2基因和lipL32／1-lipL41／2融合基因表达产物的抗体。结果lipL32／1-lipL41／2融合基因核苷酸和氨基酸序列与报道的相关序列相似性分别为99．9％和99．8％。lipL32／1-lipL41／2表达量约为细菌总蛋白的1D％。rLipL32／1和rLipL41／2兔抗血清均能识别并与lipL32／1-lipL41／2结合。97．4％、78．5％和99．1％病人血清lipL32／1-lipL41／2和lipL32／1-lipL41／2抗体阳性。结论本研究成功地构建了问号钩体lipL32／1-lipL41／2融合基因及其原核表达系统，lipL32／1-lipL41／2不仅同时具有两个单一重组抗原的免疫反应性，且能提高钩体病人血清中抗体检测阳性率，可作为研制钩体属特异性基因工程疫苗或检测试剂盒的候选抗原。     

刚地弓形虫入侵细胞过程中细胞骨架和Ca2+ 浓度变化

目的 探讨弓形虫入侵不同类型细胞过程中胞内游离Ca²⁺ 浓度及细胞骨架的变化。 方法 常规方法制备刚地弓形虫RH株速殖子悬液，分别感染吞噬性细胞（小鼠单核巨噬样细胞J774A.1）和非吞噬性细胞（人脐静脉内皮细胞HUVEC）。光学显微镜观察弓形虫感染情况及细胞骨架抑制剂秋水仙素、松胞菌素D对感染率的影响。用荧光显微镜观察弓形虫速殖子入侵J774A.1、HUVEC过程中细胞微丝和微管变化。用激光共聚焦显微镜检测弓形虫速殖子入侵过程中宿主细胞游离Ca²⁺ 浓度变化。 结果 正常J774A.1胞内游离Ca²⁺ 浓度为102.0%±6.2%。弓形虫感染后 2 min游离Ca²⁺ 浓度升高，测得荧光强度为 305.2%±21.5%，感染后30～40 min最高荧光强度为1219.7%±58.4%，显著高于基础值（P<0.01）。而经磷脂酶C抑制剂U73122预处理的J774A.1，Ca²⁺ 浓度无明显变化(P>0.05）；虫体入侵过程中J774A.1微丝结构发生凝集。微丝结构抑制剂松胞菌素D（P<0.01）和微管结构抑制剂秋水仙素（P<0.05）均可明显降低弓形虫感染率。弓形虫入侵HUVEC过程中Ca²⁺ 浓度变化不明显（P>0.05），宿主细胞微丝、微管结构亦无明显变化。松胞菌素D和秋水仙素对弓形虫入侵HUVEC的能力影响均较小(P>0.05）。 结论 弓形虫入侵吞噬性细胞J774A.1过程中胞内游离Ca²⁺ 浓度显著升高，细胞骨架微丝结构发生凝聚，而入侵非吞噬性细胞HUVEC过程中胞内游离Ca²⁺ 浓度和细胞骨架均无明显变化。     

WASP、Arp2/3与细菌感染时的细胞骨架重排

细菌侵袭宿主细胞是许多感染性疾病发生的重要环节，该过程与细菌触发的肌动蛋白细胞骨架重排关系密切。细胞骨架是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，由主要的3类蛋白质纤丝构成，包括微管、微丝和中间纤维。微丝又称肌动蛋白纤维（actin filament），是由双股肌动蛋白丝以螺旋的形式组成的直径为7～9nm的纤维。其功能除了作为细胞形态和极性的结构框架外，还与细胞的运动、分裂、细菌的黏附以及吞噬等过程密切相关。近来的研究表明许多细菌在感染宿主细胞时能利用宿主细胞的肌动蛋白细胞骨架侵入细胞，甚至达到胞内运动的目的。细菌侵入细胞和胞内运动的过程涉及到两大类细胞蛋白：WASP蛋白家族和Arp2／3复合物，他们是引发肌动蛋白聚集的关键分子，与许多改变肌动蛋白细胞骨架状态的信号分子有关，最终导致肌动蛋白的聚集。     

γ干扰素与幽门螺杆菌感染

幽门螺杆菌是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因子,与胃癌的发生密切相关,被列为Ⅰ类致癌因子。研究表明,幽门螺杆菌感染机体后,胃粘膜的γ干扰素水平升高,并与胃粘膜炎症程度呈正相关,因此认为γ干扰素参与了幽门螺杆菌的致病机制。本文就近年有关幽门螺杆菌感染时胃粘膜γ干扰素增加的机制及其在感染中的作用进行了综述。