人FRNK重组腺病毒的构建

目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。     

抑癌基因PTEN在胃癌细胞中的表达及意义

目的探讨PTEN基因mRNA及蛋白在胃癌细胞中的表达规律及其生物学意义。方法分别采用RT-PCR技术和Western blot方法检测SGC-790l，BGC-823，MGC-803，HGC-27等4种胃癌细胞系的PTEN mRNA表达及蛋白表达水平。结果PTEN mRNA与蛋白质在4种胃癌细胞系中均有异常表达，且表达水平呈正相关（r=0．99，P〈0．01），表达顺序依次为：SGC-7901（中分化）表达最高（P〈0．01），BGC-823（低分化）、MGC-803（低分化）次之（两者差异无显著性，P〉0．05），HGC-27（未分化）表达水平最低（P〈0.01），其相关表达与细胞分化程度呈正比关系。结论PTEN基因的异常改变与胃癌的发生发展密切相关；PTEN基因mRNA及其蛋白表达可能是反映胃癌发生发展及预后的重要生物学指标之一。     

索拉非尼治疗肾癌肾移植术后肺转移一例报告

1病例报告 患者男,60岁.于2003-07出现肉眼血尿,肾脏CT示右肾占位,于2003-07-10在中国人民解放军总医院行右肾根治性切除术.术后病理:肾上极透明细胞癌,少部分为颗粒细胞癌.术后应用干扰素治疗3个月,此后发现肾功能异常,于2008-10-10因左肾功能衰竭在我院行肾移植术,术后肾功能恢复正常,并开始口服泼尼松、骁希、环孢素A等免疫抑制剂治疗.于2010-01-26肾脏CT发现左肾上腺占位,大小约6.2 cm×6.1cm,左肾萎缩.拟诊为右肾癌术后左肾上腺转移,在我院行左肾上腺及左侧萎缩肾切除术,术后病理示左肾及左肾上腺转移性透明细胞癌,结合病史,考虑来自右肾.于2010 04-22胸部CT发现双肺多发转移.     

结直肠癌组织SPARC和MMP-2及VEGF的表达临床意义分析

目的:检测结直肠癌(CRC)组织中富含半胱氨酸的分泌性酸性蛋白质(SPARC)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达状况,探讨其与CRC临床病理因素、预后的关系.方法:采用通用型二步法测定60例CRC中SPARC、MMP-2和VEGF的表达情况.结果:SPARC在CRC肿瘤细胞的表达低于肿瘤间质的表达,x2=14.545,P=0.000.SPARC在肿瘤细胞低表达者,无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)都短于高表达者,P=0.000.相反,MMP-2高表达者,PFS(P=0.024)和OS(P=0.022)都短于低表达者.VEGF高表达者,PFS短于低表达者,P=0.029,而OS差异无统计学意义,P=0.139.结论:SPARC在肿瘤细胞的低表达促进了CRC的侵袭转移,其可能促进了MMP-2和VEGF的表达,因此检测SPARC、MMP-2和VEGF的表达情况可预测CRC的预后.     

消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响

目的探讨消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞的影响。方法 71例Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组与对照组,治疗组36例采用化疗联合消癌平注射液;对照组35例单独采用化疗,两组化疗均采用GP方案。完成2周期后,通过流式细胞仪测定两组患者治疗前后外周血中CD4＋CD25＋FOXP3＋调节型T细胞比例。结果治疗后治疗组患者CD4＋FOXP3＋T细胞占CD4＋T细胞及CD4＋CD25＋T细胞的比例分别为（6.2±2.4）%和（27.6±6.0）%,而对照组分别为（8.2±0.5）%和（32.1±7.6）%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。CD4＋T细胞占总淋巴细胞的比例,治疗组较对照组明显提高（P〈0.05）。结论消癌平注射液是一种较为理想的免疫增强剂,联合化疗可明显改善非小细胞肺癌患者的细胞免疫功能。     

肿瘤转移抑制基因KISS-1蛋白、基质金属蛋白酶-2和血管内皮生长因子在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的 检测结肠癌组织中肿瘤转移抑制基因KISS-1蛋白(KISS-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,分析其与结肠癌病理特征的相关性。方法 收集2009年1月至2010年6月在潍坊市人民医院60例行结肠癌切除术患者的癌组织标本作为观察组,60例良性结肠疾病手术患者的切除组织作为对照组。采用免疫组织化学法检测KISS-1、MMP-2和VEGF的表达。结果 观察组KISS-1、MMP-2和VEGF阳性表达率分别为31.7%、58.3%和78.3%,对照组分别为73.3%、16.7%和33.3%;观察组KISS-1阳性表达率明显低于对照组,差异有统计学意义(χ²=23.489,P<0.001);观察组MMP-2和VEGF的阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(χ²=27.469,P<0.001; χ²=25.817,P<0.001)。KISS-1、MMP-2和VEGF的表达与结肠癌组织学分型和TNM分期均有明显关系,差异有统计学意义(χ²=8.997,P=0.011; χ²=6.163,P=0.013; χ²=8.519,P=0.014; χ²=9.160,P=0.002; χ²=16.577,P<0.001; χ²=10.523,P=0.001)。结论 KISS-1、MMP-2和VEGF检测有助于了解结肠癌分化程度和临床分期,并为判断预后和个体化治疗提供参考依据。     

胃癌细胞PTEN基因启动子区甲基化与蛋白表达的关系及意义

目的探讨胃癌细胞中抑癌基因PTEN5’启动子区CpG岛甲基化状态与其蛋白表达的关系。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法检测不同分化程度的胃癌细胞（HGC-27，MGC-803，BGC-823，SGC-7901）中PTEN基因启动子区域甲基化状态。并通过Western blot法检测该4种细胞中PTEN蛋白的表达。结果除SGC-7901外，其他三种胃癌细胞PTEN基因都有不同程度的甲基化，并随着胃癌细胞分化程度的降低。PTEN启动子区甲基化逐渐增强（P〈0．01）；PTEN蛋白表达逐渐减弱（P〈0．01）。PTEN蛋白表达与其启动子区高甲基化之间呈负相关。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因失活，使其蛋白表达减少甚至缺失，这可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一。     

恒动观下气一元论对中医整体观念的解读

恒动观是指在认识事物变化规律包括生老病死等医学问题时应持有的运动的、发展的、变化的观点,"动"是宇宙万物和人体生命最基本最重要的特征,是事物发展变化的原动力。气一元论是先秦重要的哲学思想,认为"气"为宇宙的本原、"气"为事物联系的中介、"气"具有"升降出入"的运动形式,正是由于气的不断运动,万物才有生机变化,即气一元论具有恒动观。中医学整体观念以气一元论为哲学基础,阐述人与自然一气统一、人体脏腑同源同构、人与社会统一和合,正是由于其具有恒动观。在恒动观基础上的"气一元论",唯系着中医学整体观念,使人与自然、社会成为有机整体。     

PTEN在胃癌细胞中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究

 目的检测抑癌基因PTEN在四种胃癌细胞中mRNA和蛋白表达水平及其5’启动子区CpG岛甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation-specific PCR,MSP)检测四种不同分化程度的胃癌细胞(HGC-27,MGC-803,BGC-823,SGC-7901)中PTEN基因启动子区域甲基化状态,RT-PCR和Westernblot法分别检测其mRNA和蛋白表达水平。结果除SGC-7901外,其他三种细胞可检测到PTEN基因启动子的甲基化。PTENmRNA和蛋白表达水平依次为:SGC-7901最高(P<0.01),BGC-823、MGC-803次之(两者间无显著性差异,P>0.05),HGC-27表达水平最低(P<0.01),其表达与细胞分化程度呈正相关趋势。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其蛋白表达减少甚至缺失,这可能是导致胃癌发生、发展的原因之一。     

消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4~+CD25~+FOXP3~+调节型T细胞的影响

目的探讨消癌平注射液联合化疗对中晚期肺癌患者CD4+CD25+FOXP3+调节型T细胞的影响。方法 71例Ⅲ～Ⅳ期非小细胞肺癌患者随机分为治疗组与对照组,治疗组36例采用化疗联合消癌平注射液;对照组35例单独采用化疗,两组化疗均采用GP方案。完成2周期后,通过流式细胞仪测定两组患者治疗前后外周血中CD4+CD25+FOXP3+调节型T细胞比例。结果治疗后治疗组患者CD4+FOXP3+T细胞占CD4+T细胞及CD4+CD25+T细胞的比例分别为(6.2±2.4)%和(27.6±6.0)%,而对照组分别为(8.2±0.5)%和(32.1±7.6)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CD4+T细胞占总淋巴细胞的比例,治疗组较对照组明显提高(P<0.05)。结论消癌平注射液是一种较为理想的免疫增强剂,联合化疗可明显改善非小细胞肺癌患者的细胞免疫功能。