燃煤污染型砷中毒患者外周血中丝裂酶原活化蛋白激酶信号通路相关基因mRNA转录表达情况

目的 检测燃煤污染型砷中毒患者外周血淋巴细胞中丝裂酶原活化蛋白激酶(MAPK)中ERK1、ERK2、JNK1、P38基因mRNA的转录表达情况.方法 2006年12月在贵州省燃煤型砷中毒病区兴仁县交乐村选择燃煤污染型砷中毒患者70例,其中轻、中、重度患者分别为31、25、14例,同时选取12 km以外有相似生活习惯、无燃用高砷煤史、经健康体检无异常、年龄性别匹配的大果朵村村民30名作为对照组.检测环境介质、粮食和观察对象尿、发中砷含量；采集外周血,Trizol法提取外周血淋巴细胞中总RNA,反转录获得cDNA.采用实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中相关基因(ERK1、ERK2、JNK1、P38)mRNA转录表达.结果 燃煤型砷中毒病区环境介质中室内空气、室外空气、煤、辣椒和玉米中砷含量[中位数(四分位数)]分别为0.079(0.053 ～0.117) mg/m3、0.007(0.002～0.015) mg/m3、93.010(39.460 ～ 211.740) mg/kg、3.460(0.550～ 16.760)mg/kg和1.500(0.300 ～4.140) mg/kg,均超出国家卫生标准.土壤、大米和饮用水中砷含量分别为12.130(4.230 ～24.820)、0.650 (0.300～0.980)和0.043 (0.012～0.089) mg/kg,砷含量均在国家卫生参考标准之内.与对照组[(26.97±9.71)μg/g肌酐]相比,燃煤污染型砷中毒患者尿砷含量[(71.48±22.74)μg/g肌酐]较高,差异有统计学意义(F=90.38,P＜0.01)；与对照组[(1.58±1.07) μg/g]相比,砷中毒患者发砷含量[(4.45±2.78) μg/g]增高,差异有统计学意义(F =48.22,P＜0.01)；砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2、JNKl mRNA相对表达量[中位数(四分位数)]分别为0.0667(0.0378 ～0.1371)、0.0013 (0.0009～0.0025),低于对照组[0.1744(0.1009 ～0.1985)和0.0022(0.0017 ～0.0030)],差异有统计学意义(x2值分别为15.10,14.25,P＜0.01).轻、中、重度砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2mRNA相对表达量分别为0.0818(0.0408 ～0.1509)、0.0582(0.0154～0.1699)、0.0588(0.0399～0.1034),低于对照组0.1744 (0.1099～0.1985),差异有统计学意义(Z值分别为-2.89,-3.19,-2.67,P＜0.01)；JNKl mRNA相对表达量分别为0.0012(0.0007～0.001 57)、0.0019 (0.0011 ～0.0035)、0.0013(0.0010 ～0.0026),与对照组0.0022(0.0017～0.0030)相比,轻度组表达量减少,差异有统计学意义(Z=-3.72,P＜0.01).结论 砷可致中毒患者外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中ERK2和JNK1 mRNA转录水平发生改变,表明MAPK信号通路参与了燃煤污染型砷中毒的发生和发展过程.     

Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中作用

目的 探讨Nrf2和Keapl mRNA表达在燃煤型砷中毒肝损伤中的作用.方法 选择贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者为砷暴露组(包括病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组),以非砷污染村34名健康居民为对照组;实时荧光定量PCR检测外周血Nrf2和Keapl mRNA表达,化学法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活力和丙二醛(MDA)含量.结果 对照组、病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达量分别为0.650 5、0.6904、0.877 8、1.283 4和1.393 5,Keapl mRNA表达量分别为1.569 1、1.451 0、1.395 4、1.0489和0.882 0;与对照组、病区非病人组和无明显肝病组比较,轻度和中重度肝病组Nrf2 mRNA表达上调,Keapl mRNA表达下调,SOD活力降低(P＜0.05);中重度肝病组GSH-Px和TrxR活力降低,MDA含量升高(P＜0.05).Nrf2 mRNA表达与酶活力呈负相关、与MDA含量呈正相关,Keapl mRNA表达与酶活力呈正相关(P＜0.05).结论 燃煤砷可能通过调控Nrf2和Keapl mRNA表达量,调节机体氧化应激水平,参与砷中毒肝损伤的发生发展.     

燃煤型砷污染所致肾脏损害的病理特征及意义

目的探讨慢性燃煤型砷污染对人体肾脏损害的病理学特征及意义。方法采用MDTECH肾脏活检针对14例慢性燃煤型砷中毒患者进行右肾下极穿刺，将所获肾组织进行病理学观察。结果燃煤型砷污染所导致的肾脏损害在光镜下表现为肾小球体积增大，毛细血管内皮细胞肿胀，间质水肿，系膜细胞增多，炎性细胞浸润，近曲小管肿胀、变性、脂肪样变。电镜下显示肾小球间隙扩大，内皮细胞肿胀，足突融合，足细胞内见较多脂肪滴及溶酶体并伴轻度肿胀、溶解改变；基底膜呈节段性增厚，伴系膜细胞插入和轻度肿胀。结论燃煤型砷中毒患者肾实质呈慢性弥漫性损害改变。微小病变型肾病是慢性燃煤型砷污染对肾脏损害的主要病理学特征，这种损害最终可能发展成局灶性节段性肾小球硬化，从而导致慢性肾功能衰竭。     

燃煤型砷中毒患者临床特征、多系统损害及其意义

目的 探讨燃煤型砷中毒的临床特征、多系统损害及其意义。方法 采用整群抽样与典型调查结合的方法进行现场调查，结合临床检查、生化分析和毒理学方法进行实验室检测。结果 砷进入人体的途径包括摄人富含砷食物和蔬菜以及吸入砷污染的空气；患者砷负荷、氧化损伤指标与正常人群比较差异均有统计学意义；砷中毒患者除慢性砷中毒的典型特征(皮肤角化过度、色素异常)外，肝脏、肾脏、神经系统、肺脏、心脏和球结膜微循环等损害亦很明显；多项特殊检查显示了砷的非临床早期损害。结论生活区煤砷含量高及敞灶燃煤致食物和空气砷污染是贵州省地砷病发生的主要原因；临床上以多系统损害为特点，肝硬化和皮肤癌是其主要死因；实验室特殊检查明确显示了病区非患者及中毒患者的临床前期损害，如肝、肾功能损害、氨基酸代谢异常、氧化损伤等；多指标、多检测方法的联合应用对于砷中毒的监测、诊断和防治具有重要实际意义。     

髓过氧化物酶和过氧化氢酶基因多态性及其酶活力与燃煤污染型地方性砷中毒关系的探讨

Objective To detect genetic polymorphism of myeloperoxidase (MPO) gene and catalase (CAT) gene and their activities, and to analyze their relationship with arsenic poisoning caused by coal-burning. Methods One hundred and thirty arsenic poisoning patients were chosen as case group in Jiaole Village, Xingren County, Guizhou Province(an endemic area). One hundred and forty healthy residents living in 13 km away were chosen as control group. Their blood was collected. Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism technique(PCR-RFLP) was used to detect polymorphism of MPO-463G/A and CAT-262C/T. Ultraviolet spectmphotometer method was used to detect myeloperoxidase activity. Chromatometry method was used to detect catalase activity. Results The genotype frequency of MPO-463G/A at GG, GA, AA site was 47.24%(60/127), 44.09%(56/127),8.67% (11/127) in case group and 42.34% (58/137),48.17% (66/137)1,9.49% (13/137) in control group, respectively. The difference between the two groups was not significant(χ2 = 0.642, P > 0.05). The genotype frequency of CAT-262C/T, at CC, CT, TT site was 65.60%(82/125),28.80%(36/125),5.60%(7/125) in case group and 76.51%(101/132), 18.94% (25/132) ,4.55% (6/132) in control group, respectively, without significant difference (χ2 =3.845, P>0.05). The relationship between polymorphism of MPO-463G/A and CAT-262C/T and the risk of arsenic poisoning was not found in this study(ORadj= 1.36, 95%CI: 0.74-2.50 for MPO; ORadj=1.35, 95%CI: 0.69-2.63 for CAT). The activities of MPO and CAT were (25.30±8.70)U/L and (2.80± 1.09)×103 U/L in case group, while (22.76±7.59)U/L and (3.90±1.01)×103U/L in control group with a significant difference(F=0.760 for MPO, F=0.855 for CAT, all P < 0.05). The genotype of MPO-463G/A and CAT-262C/T was not found to have relationship with the activities of MPO, CAT(F=1.312,2.822 for MPO; F= 0.151,0.036 for CAT, P>0.05). Conclusions Genetic polymorphism of MPO-463G/A and CAT-262C/T is not found to have relationship with arsenic poisoning. Arsenic can lead to the change of MPO and CAT activity, which, however, may not be affected by MPO-463G/A and CAT-262C/T polymorphism.     

砷接触人群氧化损伤的基准剂量

目的探讨砷接触人群氧化损伤的基准剂量和敏感生物指标.方法以贵州省地方病办公室确诊并经临床复查的167例砷中毒患者为调查对象,无砷污染区居民53例作为对照.以尿总砷(UTot-As)、尿无机砷(UIn-As)和发砷为接触指标,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-px)、巯基(-SH)和丙二醛(MDA)为效应指标.分别计算UTot-As、UIn-As和发砷的基准剂量(BMD)及其下限值(BMDL).结果砷接触组的接触指标和效应指标均明显高于对照组(P＜0.01),各接触指标与效应指标间均有明显的剂量-效应关系.UTot-As的BMD和BMDL值分别为40.19～70.51μg/gCr和33.14～55 30μg/gCr,氧化损伤指标的敏感顺序为GSH-px＞-SH＞SOD＞MDA;UIn-As的BMD和BMDL值分别为8.67～14.11μg/gCr和7.14～11.36μg/gCr,氧化损伤指标的敏感顺序为-SH＞GSH-px＞SOD＞MDA;发砷的BMD和BMDL值分别为2.86～5.35μg/kg和2.33～4.19 μg/kg,氧化损伤指标的敏感顺序为-SH＞GSH-px＞MDA＞SOD.结论本研究第1次运用BMD方法计算砷接触人群在氧化损伤情况下UTot-As、UIn-As和发砷的BMD和BMDL值;UTot-As、UIn-As和发砷的BMDL值分别为33.14,7.14,2.33μg/kg;-SH可作为评价机体氧化损伤改变的早期敏感生物指标.     

燃煤型污染砷中毒与肝损害关系

目的 探讨燃煤型污染砷中毒与肝损害的关系,为砷致肝损害的"三早预防"提供依据.方法 采用临床内科、影像学、病理学及生物化学方法 对燃煤型污染砷中毒病区砷暴露人群进行临床症状体征、肝脏B超、病理形态学检查及血清学肝损害指标检测.结果 砷暴露者有不同程度的消化系统主观症状;轻、中、重度组砷中毒患者的B超异常率分别为12%,34%和64%(P<0.01);砷中毒患者肝脏病理学改变以肝组织纤维增生改变最为明显.血清学检查发现:谷胱甘肽硫转移酶(GSTs)(20.42±11.10)U/L,羟脯氨酸(Hyp)(29.5±7.3)μg/mL,血清透明质酸(HA)(68.48±51.80)μg/L,轻、中、重度组皆明显高于对照组(P<0.01);总胆汁酸(6.84±4.45)μmol/L、γ-谷氨酰转肽酶(49.71±28.50)U/L,Ⅲ型前胶原(92.01±43.77)μg/L和Ⅳ型胶原(89.33±14.41)μg/L,在中、重度组明显高于对照组(P<0.01).结论 GSTs、Hyp、HA的联合检测对早期发现和诊断砷所致肝细胞损害及肝纤维化有重要参考价值;肝脏B超检查及选择性监测上述指标,对判断肝损害的发生发展及针对性治疗有实际意义.     

髓过氧化物酶和过氧化氢酶基因多态性及其酶活力与燃煤污染型地方性砷中毒关系的探讨

目的 了解燃煤污染型地方性砷中毒患者体内髓过氧化物酶(MPO)基因和过氧化氢酶(CAT)基因的多态性及其酶活力,分析其与砷中毒发生的关系.方法 以贵州省兴仁县交乐村燃煤污染型地方性砷中毒病区的130例砷中毒患者为病例(砷中毒)组,以居住在距病区约13 km非砷污染大果垛村的140例健康居民为对照组.采集两组人群静脉血,采用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测MPO基因-463 G/A位点和CAT基因-262C/T位点的多态性;采用紫外分光光度法检测MPO活力;采用比色法检测CAT活力.结果 砷中毒组MPO-463G/A位点GG、GA和AA基因型分布频率为47.24%(60/127)、44.09%(56/127)和8.67%(11/127),对照组为42.34%(58/137)、48.17%(66/137)和9.49%(13/137),两组比较差异无统计学意义(χ2=0.642,P>0.05).砷中毒组CAT-262C/T位点CC、CT和TT基因型分布频率为65.60%(82/125)、28.80%(36/125)和5.60%(7/125),对照组为76.51%(101/132)、18.94%(25/132)和4.55%(6/132),两组比较差异无统计学意义(χ2=3.845,P>0.05).未发现MPO-463G/A位点和CAT-262C/T位点多态性与砷中毒发病风险(比值比,OR)的关联度有统计学意义(MPO:Oradj=1.36,95%CI:0.74～2.50;CAT:Oradj=1.35,95%CI:0.69～2.63).砷中毒组MPO和CAT活力分别为(25.30±8.70)U/L和(2.80±1.09)×103U/L,对照组分别为(22.76±7.59)U/L和(3.90±1.01)×103U/L,两组比较差异有统计学意义(F值分别为0.760、0.855,P均<0.05).MPO-463G/A和CAT-262C/T不同基因型个体MPO和CAT酶活力比较,差异无统计学意义(F值分别为1.312、2.822,0.151、0.036,P均>0.05).结论 未发现MPO基因-463G/A位点和CAT基因-262C/T位点多态性与燃煤污染型地方性砷中毒的发病风险有关;砷可致MPO和CAT酶活力改变,此改变可能不受MPO-463G/A和CAT-262C/T多态性的影响.     

燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与Vit B12的RIA及其临床意义

燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与VitB12含量测定目前国内外尚未见报道.为此,我们于2001年4月,对贵州交乐病区45例燃煤污染型砷中毒患者血清叶酸与VitB12进行了RIA,拟探讨其体内水平及其临床意义. 资料和方法 一、临床资料: (一)中毒组:45例(男30,女15)中毒患者均为贵州兴仁县交乐病区,有长期含砷煤接触史,年龄23～58岁,平均35.6岁.所有患者肢体与躯干均有程度不同的角化疹疣(砷疔),临床症状典型. (二)对照组:30例(男20,女10).选取远离病区15Km以外,从未接触与使用过高砷煤,并经临床排除心、肝、肺、肾等器官病变的健康体检者,平均年龄21.5岁.