抗基因工程表达的HIV—env_1肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的获得性免疫缺陷症。目前,对HIV包膜蛋白基因分析,结构功能域和抗原表位分布等研究证实,HIV包膜蛋白-env1肽段(gp120蛋白NH_2端)具有极高的保守性。本文选用基因工程表达的HIV-env1肽作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与NS-1小鼠骨髓瘤细胞进行融合,融     

抗人白细胞间素-2多克隆及单克隆抗体的生物学特征

利用人工合成的白细胞间素2(IL-2)多肽片段,用中和试验、竞争ELISA和染色IL-2分泌细胞的碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标技术,对己制备的抗人IL-2多克隆抗体及单克隆抗体(McAb)的表位特异性、中和活性、亲和常数及杭天然IL-2的反应性进行了全面鉴定。结果表明:利用多种免疫方案、融合前强化加强免疫及多个脾脏混合融合制备策略所获得的McAb,在生物学特征上表现出多样化,即这些McAb的表位特异性、中和活性、亲和力及抗天然IL-2活性各不相同。其中抗IL-2 C末端的McAb为首次报道。这组McAb适用于对IL-2研究的不同目的。     

白介素-Ⅱ基因片段核苷酸顺序分析

本文采用~(35)S标记的脱氧三磷酸核苷酸,以双脱氧核苷酸链终止法,分析了克隆于M13噬菌体的白介素-Ⅱ(以下简称IL-Ⅱ)DNA AluI片段的序列。其中包括XbaⅠ、HaeⅢ、B_(st)NI、HinfI限制性核酸内切酶位点。对于研究IL-Ⅱ基因重组、探针制备以及基因表达具有一定的意义。     

核酸凝胶胶片计算机自动分析方法的研究

本文描述通过光学扫描装置把核酸电泳凝胶放射自显影胶片的核酸序列数据自动读入电子计算机的方法。为了在较长距离内得到较好空间分辨率,采用光导纤维作准直孔和导光。计算机对获取数据进行预处理后把初步的核酸序列送入计算机的编辑器,通过人的知识进行修改,最后得到序列存成计算机文件。     

人胚肾培养细胞poly(A)~ RNA在兔网织红细胞无细胞系统中的转译

建立了兔网织红细胞溶胞物(RRL)体外转译系统。此系统对兔珠蛋白mRNA有良好转译活性,合成的肽链完整。用此系统对人胚肾培养细胞poly(A)~ RNA进行转译,以~(14)C-亮氨酸进行掺入,50μl反应混合物的cpm值为1.5～3.6×10~3,对本底的转译倍数为5.1～7.6倍,用竞争性免疫沉淀鉴定转译产物,表明转译产物中含尿激酶。     

利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究

目的：研制ＨＩＶ－１整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩＮ）的重组噬菌体单链抗体。方法：采用噬菌体表面呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了库容为３．５×１０５的表达文库。利用包被在酶联板上的ＩＮ蛋白进行四轮亲和富集，筛选出７６株具有ＩＮ结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了ＤＮＡ序列分析，证明其符合小鼠抗体序列。结论：获得了抗ＨＩＶ－１ＩＮ的噬菌体单链抗体，为其进一步研究打下基础。     

应用大肠杆菌合成的HBcAg检测抗-HBc的结果

本文报告了应用大肠杆菌合成的乙型肝炎核心抗原(E Coli HBcAg)作血清学检测的初步结果。用ELISA对它与从肝脏提取的HBcAg同时作对比试验,结果这两种抗原制品的特异性是一致的。用这两种抗原以ELISA同时检测36份血清标本的乙型肝炎核心抗体(抗-HBc),二者的符合率为91.7％。表明E Coli HBcAg可代替从肝脏提取的HBcAg,作为检测抗-HBc的诊断试剂,具有实际应用价值。     

乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)在大肠杆菌中的合成及用于抗HBc和抗HBcIgM的检测

采用基因工程技术,使克隆到大肠杆菌质粒上的 HBV 基因,经过体外切割重组,使其中的 HBcAg基因能在大肠杆菌中表达。以这种工程菌裂解液作为抗原,建立了检测血清中抗-HBc 和抗-HBcIgM的 ELISA方法。在与用美国Abbott厂的同类试剂盒进行的对比测定中,38份标本的抗 HBc检测结果,除 1份外,22份阳性和 15份阴性全部符合。40价标本抗HBcIgM检测结果,20份阳性和20份阴性亦完全相符。     

抗rHIV—env1肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

用rHIV-env_1肽免疫BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合,经4次克隆化获5株杂交瘤细胞系,其分泌抗体类型均属IgM。经连续传代6个月及液氮冻存9个月,分泌抗体特性无明显变化。5株McAb对rHIV-env_1肽或HIV-1均能明显地识别。用ELISA间接法测定各株McAb的相对亲和力,有3株(F7、B10、D6)McAb的50％最大结合浓度介于0.9～5μg/ml之间,用已如HIV-gp120抗体阳性血清阻断4株McAb与相应抗原的结合试验,所获结果各异。其中McAb B10与rHIV-env_1肽抗原的结合均可被4份HIV-gp120抗体阳性血清明显阻断,故初步认为B10McAb与抗HIV-gp120抗体中的保守肽段具有共同成分,抗HIV-env_1肽高度保守肽段的McAb,对艾滋病(AIDS)患者和人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的诊断具有实际应用价值。     

利用6× His/ Ni-NTA 表达纯化系统一步纯化乙型肝炎前S抗原

目的：利用 ６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统表达并纯化带有 ６ 个 Ｈｉｓ 纯化标签的乙型肝炎前 Ｓ抗原。方法：利用 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ 亲和层析,比较了 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白分别在非变性和变性条件下的各种纯化条件和产率,并用三种方式对 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白进行了复性。结果： Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白均存在于 ２５０ ｍ ｍ ｏｌ／ Ｌ 咪唑洗脱峰中。从 １ Ｌ 诱导菌体中可以分别纯化 Ｐｒｅ Ｓ１／２ 与 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白 １０～１５ ｍ ｇ,纯度达到电泳纯。三种复性方式中,在 Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 柱上复性 Ｐｒｅ Ｓ２ 蛋白的复性率达 ６０．５％ 。结论：６× Ｈｉｓ／ Ｎｉ Ｎ Ｔ Ａ 表达纯化系统不仅可以使外源蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,而且可以通过简单的纯化步骤得到较高纯度的目的蛋白。该表达纯化系统为利用大肠杆菌制备重组蛋白提供了一种简便可行的方法。