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目的通过体外实验探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对肠道上皮-间质转分化(EMT)的影响。方法以浓度为10 ng/ml的TGF-β1刺激肠道上皮细胞株DLD-1,分别在24、48或72 h时,提取细胞总RNA和总蛋白;分别用real-time PCR和Western-blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果TGF-β1刺激后各个时间点E-cadherin表达显著下降,而N-cadherin、vimentin、fibronectin、α-SMA的表达则明显上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TGF-β1可促进肠上皮细胞EMT过程,可能参与肠道纤维化发病机制。 相似文献
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目的利用重组复制缺陷型腺病毒AdIL 10将外源IL 10基因导入肝星状细胞 (HSC) ,并观察其对HSC增殖的影响。方法将本实验室自行构建的重组腺病毒质粒pAdIL 10用Lipofectamin包装转染HEK 2 93细胞 ,即可获得重组腺病毒AdIL 10。应用胶原酶原位灌注和密度梯度离心法分离大鼠HSC ,当HSC生长至 80 %密度时 ,以 5× 10 4细胞 /孔接种于 96孔板 ;HSC培养 2 4h后 ,取病毒AdIL 10以感染复数 (MOI) 5 0感染HSC ;用MTT法检测HSC增殖率。结果pAdIL 10经 2 93细胞包装 ,3d后可观察到绿色荧光蛋白 (GFP)表达 ;AdIL 10感染HSC 3d后可观察到GFP表达 ,且HSC增殖受到抑制。结论重组腺病毒AdIL 10感染HSC后可抑制其增殖 相似文献
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人卵泡抑素基因全长cDNA的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 克隆人卵泡抑素(FS)全长cDNA基因。方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中扩增FS cDNA。构建PMD18-T载体,采用BamHⅠ、HindⅢ双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果 RT-PCR扩增长度为968bp的基因片段,BamHⅠ、HindⅢ双酶切结果显示重组T载体中含有目的基因片段,测序结果显示编码区无基因突变。结论 人FS全长cDNA基因克隆成功,并构建了重组PMD18-T载体。 相似文献
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目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因修饰骨髓源性肝干细胞(BDLSC)移植对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的影响.方法 采用淤胆型肝损伤大鼠模型和含5%淤胆血清的培养液筛选和扩增BDLSC,使用RT-PCR方法检测培养2周时肝干细胞标志表达.体外将携带人uPA基因的腺病毒(AduPA)转染BDLSC并移植入CCl4诱导的肝纤维化大鼠体内,观察大鼠肝功能、胶原面积及病理组织学的变化.结果 病理条件培养液培养2周的骨髓细胞形成肝细胞样集落,并表达胚胎期肝干细胞特征性蛋白.体内研究显示,与模型组和BDLSC组相比,BDLSC-uPA组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)及总胆红素(TBIL)水平均有不同程度的降低,凝血酶原时间(PT)时间缩短,白蛋白(ALB)水平升高,肝组织细胞外基质(ECM)水平及羟脯氨酸(Hyp)含量明显降低;肝组织结缔组织增生程度减轻,假小叶形成不明显,胶原面积明显减少.结论 uPA基因修饰BDLSC移植能有效抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,改善纤维化大鼠的肝功能,从而为转基因BDLSC移植治疗肝纤维化的临床应用提供理论依据和实践基础. 相似文献
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目的探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)和甘露糖-6-磷酸(M6P)的复合体(RGD-M6P)对原代肝星状细胞(HSC)活化及细胞外基质分泌水平的影响.方法应用胶原酶原位灌注法分离原代HSC,接种培养48 h后,随机分成空白对照组、转化生长因子β1(TGFβ1)组、M6P组、RGD组和RGD-M6P组.培养5 d后,应用免疫组化方法检测各组HSC α-SMA表达水平变化,双抗体夹心ABC酶免测定法检测培养7 d细胞的上清液中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量.结果 RGD-M6P组原代HSC细胞上清液PCⅢ含量和α-SMA表达明显低于TGFβ1组和M6P组(P<0.05),而与RGD组比较无显著差异.结论 RGD-M6P显著减少原代HSC α-SMA的表达水平,明显降低培养上清中PCⅢ含量,为肝纤维化的预防和靶向治疗提供新的途径和思路. 相似文献
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粉防己碱上调Smad7表达抑制大鼠肝星状细胞活化 总被引:2,自引:2,他引:2
目的观察低浓度粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对培养的大鼠肝星状细胞(HSC)活化和转化生长因子β1(TGFβ1)促活化作用的影响,并探讨该作用与TGFβ1受体后信号通路的关系。方法HSC原代培养,给予Tet(0.4、0.8、1.6和3.2μmol·L-1)处理,免疫细胞化学法检测α平滑肌肌动蛋白(αSMA)表达,或给予TGFβ1(质量浓度5μg·L-1)和(或)Tet(1.6μmol·L-1)干预,分别以RTPCR和Westernblot法检测TGFβ1及其Ⅰ、Ⅱ型受体、Smad3、Smad7以及αSMAmRNA和(或)蛋白表达。结果Tet(0.4~3.2μmol·L-1)能抑制培养HSC表达αSMA。Tet(1.6μmol·L-1)抑制TGFβ1诱导的HSCαSMA表达,伴有Smad7表达上调及TGFβ1表达下降,但不影响TGFβⅠ、Ⅱ型受体和Smad3表达。结论低浓度Tet抑制培养HSC的活化和TGFβ1促活化作用,该作用与上调Smad7表达并抑制TGFβ1有关而不影响TGFβ受体表达。 相似文献
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目的 观察Smad7和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因共表达对体外培养肝星状细胞(HSC)活化,分泌胶原特性的影响.方法 采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离大鼠HSC,将AdSmad7/uPA或AdSmad7体外感染HSC后,Western blotting法检测细胞总蛋白中Smad7、抗人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α2链(Col Ⅰ A2)的表达;ELISA法检测培养上清中uPA蛋白的分泌量;放射免疫法测定HSC培养上清中Ⅲ型前胶原(PⅢP)和层黏连蛋白(LN)的分泌量.结果 AdSmad7/uPA感染体外培养HSC,3 d后观察到绿色荧光蛋白(GFP)表达,转染效率>90%,Smad7和uPA蛋白的表达量明显高于AdGFP对照;AdSmad7/uPA或AdSmad7转染HSC均可使α-SMA、Col Ⅰ A2、PⅢP和LN水平较AdGFP对照组显著下降(P<0.05).与转染AdSmad7相比,转染AdSmad7/uPA后的HSC中Col Ⅰ A2、PⅢP和LN表达降低更明显,分别较前者降低44.5%、30.4%和28.4%(P<0.05).结论 Smad7和uPA基因共表达可协同抑制体外培养的大鼠HSC分泌细胞外基质成分. 相似文献
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日的观察外源Smad7基因对L02肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒AdSmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L02肝细胞,以RT—PCR和Western—blot检测外源Smad7基因表达情况,MTT法检测L02肝细胞增殖活性,流式细胞仪检测其细胞周期变化。结果AdSmad7体外感染L02肝细胞后,Smad7 mRNA和蛋白水平均显著上调。转化生长因子B(TGFB)可抑制L02细胞增殖,诱导其凋亡。导入外源Smad7可拮抗TGFβ的作用。结论利用AdSmad7导入外源Smad7基因可间接促进肝细胞增殖,抑制其凋亡。 相似文献