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目的:建立原代培养的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞体系.方法:取新生24 ~48 h的SD大鼠,无菌操作取出大脑皮层,剪碎后用胰酶消化、机械吹打制成分散细胞悬液,网筛过滤,将细胞悬液接种培养7~9d;置于摇床(37℃、250 r/min振摇6h),弃掉含脱离细胞的细胞悬液,去除小胶质细胞及少突胶质细胞,细胞传代,进行GFAP细胞免疫荧光鉴定.结果:成功分离和培养原代星形胶质细胞,GFAP免疫荧光鉴定星形胶质细胞比例在95%以上.结论:采用该培养方法能够成功的建立原代SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞体系,为研究神经系统疾病及其相关疾病提供了可靠的细胞模型. 相似文献
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目的:帕金森病(Parkinson’s disease,PD)最主要的病理变化是中脑黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元的变性死亡,但其病理机制仍然不清楚。硫辛酸是丙酮酸脱氢酶的辅助因子,具有抗氧化性和线粒体保护功能,对PD 具有一定的治疗效果。本研究旨在探索硫辛酸是否通过抑制致凋亡因子(apoptosis inducing factor,AIF)介导的非Caspase 凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。方法:6-OHDA 诱导建立单侧损毁的PD 大鼠模型后,给予硫辛酸干预;通过行为学、NueN 和TH 免疫染色观察硫辛酸的保护作用;通过Western Blot、免疫组化、激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF 介导非Caspase 依赖性凋亡通路对DA 能神经元具有保护作用。6-OHDA 诱导PC-12 细胞损伤建立PD 细胞模型,给予LA 干预;通过CCK-8、流式和线粒体膜电位检测硫辛酸的保护作用;通过Western Blot 和激光共聚焦检测硫辛酸是否可以抑制AIF 介导非Caspase 依赖性凋亡通路对多巴胺能神经元具有保护作用。结果:在PD 模型大鼠上,硫辛酸能够显著缓解
PD 模型大鼠行为学的改变,显著减缓PD 模型大鼠黑质区神经元的丢失;同时,硫辛酸也显著抑制PD模型大鼠黑质区AIF 的线粒体释放和细胞核转移。在PD细胞模型上,硫辛酸能够抑制6-OHDA诱导的PC12 细胞凋亡,显著抑制6-OHDA 诱导的PC12 线粒体通透性转变;同时,硫辛酸也显著抑制PC12 细胞模型AIF 的线粒体释放和细胞核转移。结论:硫辛酸能够通过抑制AIF 介导的非Caspase 凋亡通路对多巴胺能神经元发挥神经保护功能。 相似文献
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nm23H1/NDPK的表达与人类多种恶性肿瘤转移潜能呈负相关,本组采用免疫组化SP法研究nm23H1/NDPK在原发性胆囊癌中的表达及其意义。1.材料与方法:收集原发性胆囊癌43例,胆囊腺瘤10例、慢性胆囊炎45例组织标本,均经10%甲醛固定,... 相似文献
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nm23—H1/NDPK的发性胆囊癌生物学行为的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
采用抗nm23-H1/NDPK单克隆抗体进行免疫组织化学SP法染色,检测原发性胆囊癌43例,胆囊腺瘤10例,慢性胆囊炎45例,其中nm23-H1/NDPK表达阳性率依序为48.8%、90.0%、77.8%,原发性胆囊癌表达阳性率低于胆囊良性病变(P〈0.05)。nm23-H1/NDPK的原发性胆囊癌的表达:按Nevin分期,早期高于晚期(P〈0.05),高分化癌高于低分化癌(P〈0.05),未发生 相似文献
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目的:研究史他汀类药物通过其非胆固醇依赖性作用对抗β- 淀粉样蛋白(Aβ)的 过程中β- 淀粉样肽前体蛋白(APP)代谢、尼古丁型乙酰胆碱受体(nAChRs)表达以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的相互作用关系,探讨史他汀类药物对阿尔茨海默氏病(AD)的可能性干预途径。方法:选择原代培养神经细胞及过表达APP670/671 的SHSY-5Y 细胞,用史他汀类药物(包括洛伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀)、Aβ、nAChR 拮抗剂或细胞外信号调节白白激酶(ERK)抑制剂分别或合并处理。用生化方法测定细胞存活率、胆固醇含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;用蛋白印迹法检测nAChR 多种亚单位蛋白表达水平,APP 代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白(αAPP)、β分泌型淀粉样前体蛋白(βAPP)、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、β淀粉样前体蛋白裂解酶2(BACE2)及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10 (ADAM10)等的蛋白表达水平,MAPK 通路中ERK、c-Jun 氨基末端激酶(JNK)及p38 磷酸化水平;实时荧光定量PCR 测定nAChR 亚单位mRNA 表达水平。结果:用Aβ或Aβ寡聚体处理体外培养神经细胞48 小时后见细胞存活率下降、SOD 的活性降低和MDA含量增高等毒性作用,用史他汀类药物预处理细胞24 小时,均能减轻Aβ引起的神经毒性作用。用洛伐他汀处理培养细胞24 小时后,发现α7 nAChR 蛋白及mRNA 表达水平均升高,而α4、α3 和bβ2 未见明显改变;洛伐他汀处理引起αAPP 分泌增加、βAPP减少、BACE1 蛋白表达水平降低、而BACE2 和ADAM10 增高。洛伐他汀处理亦导致phospho-ERK1/2 蛋白表达水平升高,而phospho-JNK 和phospho-p38 未见明显改变。联合应用洛伐他汀与MAPK/ERK1/2 抑制剂U0126 或α7 nAChR 拮抗剂MLA 处理培养细胞,结果显示U0126 可以抑制细胞phospho-ERK1/2 的磷酸化,降低α7 nAChR 蛋白表达水平,减少αAPP 的分泌,同时阻断洛伐他汀引起的MAPK/ERK1/2 信号转导通路活化、α7 nAChR 蛋白表达水平升高以及αAPP 分泌增加等作用;MLA 处理神经细胞仅能减少αAPP 的分泌,对其自身的蛋白表达及phospho-ERK1/2 的磷酸化均无明显影响,MLA 与洛伐他汀共同处理细胞后仅见洛伐他汀诱导的αAPP 分泌增加作用被减弱,而MAPK/ERK1/2 的活化以及α7 nAChR 蛋白表达水平的上调均未被减弱。结论:采用不引起细胞胆固醇水平改变的史他汀类药物剂量处理培养细胞,能减轻Aβ引起神经细胞毒性作用,引起MAPK/ERK1/2 信号转导通路活化、α7 nAChR 蛋白表达水平升高以及αAPP 分泌增加;其作用机制可能是首先活化phosphor-ERK1/2 信号转导通路,该通路的活化刺激α7 nAChR 的表达,最终增强APP 的非淀粉样代谢过程,活化α- 分泌酶,从而促进αAPP 的分泌,产生对抗Aβ的神经保护作用。 相似文献
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目的研究α-硫辛酸(LA)对PC12细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法传代培养PC12细胞,PC12细胞缺氧/复氧(氧糖剥夺4 h,复氧18 h)模拟缺血再灌注损伤模型。实验分为正常组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+α-LA、缺氧/复氧+自噬抑制剂巴弗洛霉素(Baf)A1组。CCK8筛选α-LA的有效作用浓度;流式细胞术检测细胞凋亡变化;Western印迹检测细胞促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、酶切caspase-3、自噬标志分子SQSTM-1/P62、LC3-Ⅱ/Ⅰ及mTOR通路的表达变化。结果缺氧/复氧显著降低PC12细胞的存活率(P<0.05),Western印迹结果显示Bax、酶切caspase-3、LC3-Ⅱ/Ⅰ的表达水平均显著升高(P<0.05),P62和p-mTOR的表达水平降低(P<0.05);与缺氧/复氧组比较,给予α-LA和Baf A1均能显著降低缺氧/复氧诱导的凋亡水平(P<0.05)。结论α-LA通过抑制缺氧/复氧诱导的过度自噬进而减少过度自噬诱导的细胞凋亡。 相似文献
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