弓形虫三磷酸核苷水解酶基因克隆、表达与鉴定

目的 对刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶基因（NTPase）进行克隆、表达和鉴定。 方法 采用PCR扩增刚地弓形虫RH株的NTPase基因，克隆入pGEM?-T Easy载体，经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB，并转入大肠埃希菌(E.coli)BL21（DE3）中进行诱导表达。用镍-次氮基三乙酸亲和层析柱纯化重组质粒pBAD-HisB-NTPase表达产生的含组氨酸的重组蛋白，用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）分析蛋白表达产物。 结果 PCR扩增得到特异的刚地弓形虫NTPase-Ⅱ基因序列，经测序鉴定无基因突变。SDS-PAGE结果表明NTPase-Ⅱ基因在E.coli BL21（DE3）中获得高效表达，其融合蛋白相对分子质量（Mr）约70 000，与理论值相近。Western blotting分析结果显示，纯化的重组蛋白可被弓形虫感染的鼠血清及鼠抗重组蛋白血清识别。 结论 所克隆表达的弓形虫NTPase-Ⅱ重组蛋白具有良好的抗原性。     

青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫童虫体内外杀虫效果观察

目的观察青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫童虫的杀虫效果。方法卫氏并殖吸虫囊蚴腹腔注射法感染大鼠,10d后按不同剂量服用青蒿琥酯,首次剂量加倍,连用6d。30d后剖解大鼠,观察青蒿琥酯减虫率;并与吡喹酮作比较;正常对照组童虫做体外培养,观察童虫在药液中的活动情况。结果服药后,青蒿琥酯低、中、高三个剂量组、吡喹酮组及对照组童虫检出率分别为26.1%、16.9%、15.9%、2.25%、83.6%,童虫重量减轻,体形减小(P<0.05);体外培养,病理组织切片表明:用药组童虫体棘都有改变。结论青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫童虫有一定的杀灭效果。     

浙江西南三平正并殖吸虫的分布及动物感染观察

三平正并殖吸虫由陈心陶氏(1962)发现于广东山区,以后相继在浙、闽、赣、皖四省发现,并证明在疫区内常与卫氏、扁囊或斯氏并殖吸虫囊蚴混合感染。作者等于1979～1984年在浙西南调查了12个县溪蟹,发现8个县有三平正并殖吸虫分布,现将     

被动凝集法和ELISA法检测成人肺炎支原体抗体的临床价值比较

目的比较被动凝集(PPA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测成人肺炎支原体(MP)感染的临床价值。方法分别采用PPA、ELISA法检测90例成人CAP患者的MP抗体及MP-IgA、MP-IgM、MP-IgG抗体并进行分析。结果 PPA法检测MP抗体阳性率为72.2%(65/90),ELISA法检测总抗体阳性率为50.00%(45/90),差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测MP-IgA阳性率为26.7%(24/90),MP-IgM的阳性率为22.2%(20/90),差异无统计学意义(P>0.05),且存在一致性(Kappa=0.520);MP-IgG阳性率为37.8%(34/90),与MP-IgM、MP-IgA阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。PPA滴度越高,ELISA法MP-IgA、MP-IgM阳性检出率越高。结论 ELISA检测MPIgA、IgM、IgG联合PPA检测MP抗体效价可以提高CAP诊断的准确性,对早期诊断成人MP感染有重要临床意义。     

弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用

目的 探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-Ⅱ重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法 通过PCR获得NTPase-Ⅱ基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-Ⅱ抗体的间接ELISA方法 。结果 PCR扩增得到特异的弓形虫NT-Pase-Ⅱ基因序列,经测序鉴定无基因突变。重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符。经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体。具有良好的抗原性和免疫原性。用表达的重组NTPase-Ⅱ蛋白初步建立了用于NTPase-Ⅱ抗体检测的间接ELISA方法 。结论 重组NTPase-Ⅱ蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发。     

蛋白质组学及其在寄生虫学中的应用

随着多种生物基因组测序计划的完成,应用蛋白质组学方法在整体水平上研究复杂生命现象的后基因组时代已经到来.蛋白质是生物生长、分化、代谢及调控的主要执行者,因而蛋白质组学方法成为研究生物体不同状态下差异蛋白表达非常重要的技术手段.差异蛋白质组学主要用于筛选和鉴定不同种类和状态下各样本之间蛋白质组之间的区别和变化,寻找任何有...     

抗阴道毛滴虫AP33单克隆抗体的制备及其功能初探

目的 制备阴道毛滴虫（T.υ317株）黏附蛋白抗原（AP33）单克隆抗体并初步分析鉴定其功能。　方法　将制备和纯化的融合黏附蛋白33（rAP33）为抗原，免疫BALB/c小鼠，共免疫3次（抗原含量分别为100、50和100 μg），每次间隔2周，末次免疫后3 d取小鼠脾细胞及SP2/0骨髓瘤细胞在聚乙二醇（PEG1500）作用下进行细胞融合，筛选出高滴度分泌的McAb 杂交瘤细胞株，测定其免疫球蛋白亚类及其效价，蛋白质印迹（Western blotting）分析其特异性，间接免疫荧光实验（IFAT）进行定位，并初步探讨其体外对阴道毛滴虫黏附HeLa细胞的抑制作用。 结果 经筛选获得能稳定分泌抗AP33单克隆抗体的5株（4A2， 4F11， 4F8， 4E7和4H11）杂交瘤细胞株，经免疫球蛋白类型和亚型鉴定为IgG1; ELISA和Western blotting分析显示，5 株单抗均能与重组阴道毛滴虫AP33发生特异性结合；IFAT显示其中4株（4F11， 4F8， 4E7， 4H11）可识别培养的阴道毛滴虫，体外滴虫黏附抑制实验显示终浓度分别为200、200、400和200 μg/ml，该4株单抗体外对滴虫黏附HeLa细胞的抑制率分别为50.08%、65.03%、50.70%和49.08%。 结论 制备的抗重组AP33单克隆抗体，体外对阴道毛滴虫黏附有较好的抑制功能。     

孕妇弓形虫、风疹病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒感染的血清学研究

近年来许多国家已经认识到导致胎儿畸形的寄生性病原体，弓形虫（ToxoplasmagondiiTox），风疹病毒（RubellavirusR．V），巨细胞病毒（CytomegalovirusCMV），单纯痢疾病毒（HerpessimplexVirusHSV）简称为TORCH感染是孕妇宫内感染影响新生儿出生缺陷的一个重要因素[1－2]，为     

青蒿琥酯治疗家犬卫氏并殖吸虫感染的效果观察

目的探讨青蒿琥酯（Art）对双倍体卫氏并殖吸虫病的治疗作用。方法1）卫氏并殖吸虫成虫用含不同浓度Art的RPMI 1640培养基体外培养后作电镜观察;2）实验犬常规感染卫氏并殖吸虫囊蚴,76 d后用青蒿琥酯50和80mg/kg灌胃治疗,103 d解剖犬,作常规病理检查,取出的虫体作电镜观察。结果1）5 mg/kg组体外培养24 h后,虫体萎缩,扫描电镜观察部分体棘消失、倒伏、絮状物附着;透射电镜显示皮层水肿、细胞器及分泌颗粒减少,卵黄腺萎缩,卵巢卵细胞胞浆空泡变等;2）两治疗犬体内虫体萎缩,厚壁囊肿数分别为28和35个,对照犬为16个,差异有显著性（P〈0.05）;透射电镜显示成虫变化与体外培养试验相似。结论青蒿琥酯对卫氏并殖吸虫有损伤作用。     

PRU株弓形虫包囊感染小鼠模型的建立

目的建立一个合理、经济的弓形虫包囊小鼠感染模型,为弓形虫的相关研究提供参考。方法 20个PRU株弓形虫包囊分别感染C57BL/6J、ICR、KM或BALB/c四个品系雌性小鼠10只,感染后42d,统计小鼠存活率、脑组织包囊数和包囊直径。结果 KM小鼠存活率100%(10/10),ICR小鼠存活率70%(7/10),C57BL/6J存活率10%(1/10),BALB/c全部死亡(0/10);ICR小鼠包囊数和包囊直径与KM小鼠相比具有显著性差异(P0.01):ICR鼠脑组织包囊数为1385.71±378.555,直径为4.044±0.187μm;而KM鼠脑组织包囊数为290.00±129.743,直径为3.557±0.271μm。结论与其他3个品系小鼠相比,ICR小鼠对PRU株弓形虫包囊的抗性较强,可以作为弓形虫包囊感染模型。