HIV集合核酸检测在男男性行为人群中的应用评价

目的 评估集合核酸检测方法在男男性行为人群(MSM)中的应用,探索适合该人群的HIV早期感染检测策略及应用该方法估算新发感染率的可行性.方法 本研究共采集4 856份2008年4月至2009 年9月我国黑龙江省(4 156份样品)和北京市(700份样品)MSM人群的样品.分别经三代ELISA、四代ELISA和WB检测后,HIV阴性样品进行集合核酸检测.样品集合采用三级集合策略.并计算和比较"三代ELISA检测+WB"、"四代ELISA检测+WB"、"三代ELISA检测+WB+集合核酸检测"和"四代ELISA检测+WB+集合核酸检测"的HIV检测阳性率.4 156份黑龙江省MSM人群样品中符合条件的WB确认阳性样品纳入BED-捕获酶联试验 (BED-CEIA),并应用BED方法和集合核酸检测方法进行新发感染率估算.结果 4 856份样品中共有143份被判定为HIV阳性,其中经三代和四代ELISA检测为阳性的样品均为130份,窗口期感染样品13份.常规ELISA检测加核酸检测能最有效检测出MSM人群窗口期感染者;4种检测策略的HIV检测阳性率分别为:2.68%(95%CI 为2.22%～3.14%)、2.82%(95%CI 为2.35%～3.29%)、2.94%(95%CI 为2.46%～3.42%)和2.94%(95%CI 为2.46%～3.42%),差异无统计学意义(χ2=0.854 3,P=0.836 4).4 156份黑龙江省样品中有88份纳入BED检测,41份样品被判为新近感染.应用BED检测方法和集合核酸检测方法估算的HIV发病率分别为2.36%(95%CI 为1.63%～3.08%)和2.92%(95%CI 为1.01%～4.83%).结论 HIV集合核酸检测技术能有效地筛查出窗口期感染者,可用于我国MSM人群窗口期检测.

Abstract：

Objective To evaluate the application of pooling HIV nucleic acid amplification testing (NAAT) among men who had sex with men (MSM) population, and to investigate suitable HIV screening strategy and the feasibility of calculation of HIV incidence using pooling NAAT among MSM population in China.Methods Four thousand eight hundred and fifty-six samples were collected from MSM population from April 2008 to September 2009 among with 4 156 were in Heilongjiang province and 700 were in Beijing in China. After standard testing with an HIV ELISA and WB confirmation testing, HIV antibody-negative samples were pooled and screened for HIV using NAAT.A three-stage pooling strategy was adopted.The HIV positive rate estimated by the four HIV screening strategies was calculated.In addition, 4 156 HIV positive specimens from Heilongjiang province were screened with the BED capture enzyme immunoassay (BED-CEIA).The HIV-1 incidences were estimated by BED-CEIA assay and pooling NAAT individually.ResultsOne hundred and forty-three of 4 856 subjects were HIV infected.130 were 3rd and 4th generation ELISA positive; 13 were antibody-negative but acutely HIV infected.According to the evaluation of four HIV screening strategies, routine HIV screening test together with pooling NAAT was more effective than other strategies for screening out window period generation ELISA+WB+pooling NAAT' were 2.68%(95% confidence interval CI=2.22%-3.14%), 2.82%(95%CI=2.35%-3.29%), 2.94%(95%CI=2.46%-3.42%) and 2.94%(95%CI=2.46%-3.42%), respectively.The differences were not significant (χ2=0.854 3, P=0.836 4).Of the 88 HIV positive samples from Heilongjiang province, 44 participants were tested as recent HIV infections by BED-CEIA assay. The estimated HIV-1 incidence was 2.36% (95%CI=1.63%-3.08%) and 2.92% (95%CI=1.01%-4.83%) based on BED-CEIA assay and pooling NAAT,respectively.Conclusions Pooling NAAT is a effective screening test in HIV negative population to detect window period infection among MSM population in China.     

Nuclisens EasyQ HIV-1和COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITORTM Test检测集合在HIV-1“窗口期”诊断的比较应用

目的将Nuclisens EasyQ HIV-1方法与COBAS AMPLICOR HIV-1MONITORTM Test方法检测集合的结果进行比较,并将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法应用于艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)"窗口期"的检测。方法采用50:1、10:1二级集合HIV RNA COBAS和EasyQ方法进行检测。结果 (1)两种方法在54份定值血清和质控血浆的阳性检出率均为100%,方法的一致性为94.44%,两方法之间具有显著相关性,相关系数为r=0.855。(2)检测感染者配偶、静脉吸毒者(IDU)及男男性行为人群(MSM)样本集合2 426人份,两种方法检测结果一致,发现3例"窗口期"感染者。结论集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法具有很好的实验性能,可应用于HIV高危人群的"窗口期"检测。     

2009年第1季度四川省报告HIV感染者中新近感染状况

目的使用BED捕获酶联免疫方法对四川省（除凉山州外）2009年第1季度新报告HIV感染人群进行检测,分析全省艾滋病新近感染状况。方法收集四川省20个市州2009年第1季度新报告HIV感染病例确证阳性样本,对其进行BED方法检测,计算HIV新近感染的构成比。结果全省20个市州2009年第1季度新报告HIV感染病例中有19.12%为新近感染病例。其中,男性所占比例为77.15%,18～40岁年龄组所占比例为65.25%,MSM人群所占比例为22.03%。结论四川省2009年第1季度HIV新近感染病例男性远远大于女性,以青壮年为主,MSM人群感染形式严峻。     

应用BED．CEIA检测干血斑样本监测HIV-1发病率的可行性研究

目的 研究干血斑样本应用于现场HIV-1 BED-CEIA新近感染的检测以及监测HIV-1发病率的可行性.方法 收集27个自愿咨询检测(VCT)哨点的10 313名咨询者的血浆和干血斑样本,进行HIV抗体检测,对经免疫印迹方法确认的349例HIV感染者的血浆和干血斑样本同时进行BED-CEIA检测,检验干血斑样本BED-CEIA新近感染检测结果的稳定性和重复性,比较两种样本检测结果的差异及对HIV发病率估计的一致性.结果 应用干血斑样本检测具有较好的稳定性和重复性,R2值分别达到0.9551和0.95.349对样本的检测结果显示,294对样本被同时判定为长期感染,53对样本被同时判定为新近感染,两种样本对HIV-1是否为新近感染判断的一致性达到99.43%.而2对样本得到不同的结果,其An值均处于临界值附近.在人群总体水平上,两种样本计算得到的HIV-1发病率完全一致.结论 在HIV-1 BED-CEIA新近感染检测中,尽管个别样本检测结果存在差异,但在人群水平上千血斑样本的检测结果对HIV-1发病率的估计与血浆样本没有差异,因此在中国可以应用于血斑样本进行HIV-1 BED-CEIA新近感染检测.     

自制裸磁珠对常见食源性致病菌吸附性能的研究

目的：研究自制裸磁珠对常见食源性致病菌和卫生指示菌的吸附性能，摸索从样品中快速分离和浓集细菌的方法。方法：试验裸磁珠对细菌的吸附性能，摸索温度和样品成分对其吸附性能的影响。结果：自制裸磁珠在37℃对常见食源性致病菌和卫生指示菌有很强的吸附，吸附率均高于97％。食品成分对其吸附有一定影响，吸附率最低为58．42％。结论：自制裸磁珠可望用于环境和食品样品中多种细菌的非特异性吸附分离和浓集，值得进一步研究和推广。     

TaqManTM实时荧光PCR快速检测蜡样芽胞杆菌的初步研究

目的：建立实时荧光TaqMan^TM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法，为食品中蜡样芽胞杆菌污染的调查及食物中毒的快速准确定量检测提供手段。方法：通过分析蜡样芽胞杆菌16SrDNA、23SrDNA、16S-23S ITS、gyrB、groEL、cereolysin AB、HBL（hblA、hblC、hblD）、NHE（nheA、nheC、nheD）、bce—T等目的基因，对比所选取的不同目的基因优缺点，最终选择合适的目的基因16S-23SITS进行同源性分析，并根据GenBank公布的蜡样芽胞杆菌16S-23SITS基因的保守序列，用引物与探针专业设计软件自行设计引物和TaqMan^TM探针，并利用硅胶模型^TM 基因组DNA提取法制备DNA标准品，通过对TaqMan^TM实时荧光PCR退火温度、探针浓度、引物浓度、Mg^2＋离子浓度、缓冲液浓度及酶用量等反应条件的优化，初步建立蜡样芽胞杆菌的实时荧光TaqMan^TM,陕速定量检测方法，并利用该方法对模拟样品进行检测。结果：选取的16S-23S ITS基因同源性达到99％以上，特异性好；所有蜡样芽胞杆菌均含有两段16S-23S ITS基因，有利于提高反应的灵敏度。通过对各实验条件的优化，得出蜡样芽胞杆菌TaqMan^TM实时荧光PCR的最佳反应条件，初步建立起实时荧光TaqMan^TM定量检测蜡样芽胞杆菌的快速检测方法，该方法能在3h左右完成整个检测过程。结论：实时荧光TaqMan^TM定量检测法不但灵敏度好，而且特异性高，检测时间短，能提高蜡样芽胞杆菌的检出率和检测准确性，可望应用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速准确定量诊断。     

云南省2000-2007年静脉吸毒者、性病就诊者和孕产妇HIV-1新近感染率及流行趋势变化

目的 在云南省艾滋病监测哨点用BED-CEIA方法 开展HIV-1新近感染检测,估箅新近感染率和流行趋势.方法 收集2000-2007年云南省静脉吸毒(IDU)监测哨点、性病门诊监测哨点和孕产妇监测哨点样本,采用连续的横断面调查,对经过血清学检测确认为HIV-1阳性样本再进行BED-CEIA检测.结果 研究样本共计144 780份,检出HIV-1阳性样本4932份,完成BED-CEIA检测4678份,判为新近感染样本723份.相邻两年样本合并分析,2000-2007年IDU监测哨点HIV-1平均感染率在18.2%～26.9%之间,新近感染率分别为14.65%、6.21%、4.06%、2.23%;性病门诊监测哨点HIV-1平均感染率在1.6%～3.2%之间,新近感染率分别为1.46%、0.76%、0.52%、0.33%;孕产妇监测哨点HIV-1平均感染率在0.2%～0.5%之间,新近感染率分别为0.16%、0.11%、0.10%、0.09%.结论 三类监测人群中,IDU、性病门诊就诊者和孕产妇新近感染率有所下降.     

重庆市2006——2008年男男性行为人群HIV-1感染发病率调查

的HIV-1感染发病率差异有统计学意义,2007年和2008年MSM发病率最高的人群分别来自浴室和通过网络寻找性伴的MSM,分别达到17.87%和12.22%;2008年21～25岁年龄组HIV-1发病率最高,达8.69%;不同方法的校正降低了对发病率的估计.结论 重庆市MSM人群HIV-1新发感染维持在较高水平,但连续3年的发病率经校正后上升趋势不明显.     

HIV新近感染检测方法研究进展

我国在"艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项"十一五"计划中明确提出"减少艾滋病病毒新近感染人数,降低艾滋病新发感染率"的目标,其评估的必要手段是进行HIV新近感染检测,估算HIV新发感染率并观察其动态变化趋势,估计HIV新近感染人数及比例.     

多重PCR快速检测致泻大肠埃希菌

大肠埃希菌(Escherichia coli,E. coli)是寄居在人和动物肠道中的正常菌群之一,但其中一些菌株携带毒力基因,具有致病性,能引起人类腹泻,被称为致泻E.coli.