应用PMTCT模式阻断梅毒母婴传播的效果评价

目的评价预防艾滋病母婴传播(PMTCT)模式预防先天性梅毒的效果。方法采用PMTCT模式对2012—2013年在舟山市妇幼保健院进行孕期保健管理的妊娠合并梅毒孕妇58例为实验组,同期采用常规干预模式管理的妊娠合并梅毒孕妇45例作为对照组,比较两组人群妊娠合并梅毒的诊断、规范治疗及妊娠结局。结果实验组早期发现并诊断的比例明显高于对照组(P0.05)。实验组规范治疗率为81.03%,高于对照组的62.22%(P0.05)。实验组和对照组人群不良妊娠结局发生率分别为8.62%和26.67%,两组差异有统计学意义(P0.05)。结论运用PMTCT模式阻断梅毒母婴传播可提高妊娠合并梅毒感染孕妇早期发现和诊断,促进妊娠梅毒的规范治疗,减少不良妊娠结局的发生率。     

舟山海岛流动人口孕产妇保健管理模式探讨

随着舟山海岛新区成立,经济快速发展,大量流动人口涌入舟山市,流动人口孕产妇在本市分娩逐年增加。舟山市从2006年起在相继推出一系列管理措施,正在逐步探索适合本市流动人口孕产妇保健的管理模式。     

磁珠-ELISA检测日本血吸虫循环虫卵抗原的研究

循环抗原(circulating antigen,CAg)是宿主体内活虫(包括虫卵)所产生的具抗原性的代谢物质。它的存在表明血吸虫现症感染,并能大致反映感染虫荷,而且宿主有效化疗后CAg可被宿主迅速清除。故CAg检测不仅可作为诊断的依据,还可用于疗效考核。目前国内外已建立了多种检测CAg的方法如双夹心-ELISA、斑点-ELISA、反向间接血凝试验等,并采用不同样本(血液和/或尿液)进行血吸虫CAg的检测,均取得一定的     

舟山市高危孕产妇的高危原因分析

舟山地处我国东南沿海,是中国第一大群岛,由1390个岛屿组成,交通不便。现已连续4年无孕产妇死亡,获得了浙江省卫生厅嘉奖。为进一步探讨舟山市高危妊娠管理办法,降低孕产妇和围产儿死亡率[1],本文对舟山市2001—2010年10年中     

空肠弯曲菌mcp1/2/3基因原核表达及其产物与细菌趋化作用的相关性

目的 克隆空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)接受甲基趋化蛋白(MCP)编码基因mcp1、mcp2和mcp3并构建其原核表达系统,建立空肠弯曲菌体外趋化模型并确定趋化诱导物质,了解MCPs与趋化诱导物之间的关系.方法 PCR扩增mcp1、mcp2和mcp3基因片段,T-A克隆后测序.构建上述目的 基因原核表达系统,SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的 重组蛋白rMCP1、rMCP2和rMCP3的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rMCPs.rMCPs免疫家兔获得抗血清,免疫扩散法测其效价.用饱和硫酸铵盐析法和DEAE-32离子交换法提纯IgG,经胃蛋白酶酶解和Sephedex G-100层析制备IgGF(ab')2.建立HAP(hard-agar plus)法空肠弯曲菌体外趋化模型并检测8种物质的趋化诱导作用.采用基于IgG F(ab')2封闭的趋化阻断试验,确定不同MCPs的功能及其差异.结果 PCR扩增获得预期大小的mcp1、mcp2和mop3基因片段,其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能有效地表达各rMCPs,其产量均约为细菌总蛋白的10%.rMCP1、rMCP2和rMCP3免疫家兔后能产生特异性抗体,其免疫扩散效价均为1∶4.牛胆汁和脱氧胆酸钠(DOC)对空肠弯曲菌趋化有浓度依赖性诱导作用(P<0.05).MCP1和MCP2被其IgG F(ab')2 封闭后,空肠弯曲菌对DOC的趋化能力明显减弱(P<0.05),MCP3被封闭后对空肠弯曲菌趋化能力无影响(P>0.05).结论 本研究成功地表达了空肠弯曲菌MCPs蛋白.牛胆汁和DOC是诱导空肠弯曲菌趋化的信号物质,MCP1和MCP2可能参与该菌对DOC的趋化过程.     

孕前BMI及孕期BMI增加对妊娠并发症及新生儿出生体重的影响

目的 探讨孕前BMI及孕期BMI增长（BMI△）对妊娠结局及新生儿出生体重的影响.方法 观察1530例舟山市妇幼保健院进行围产保健的孕产妇孕前BMI及孕期BMI△不同组别妊娠结局、新生儿出生体重的差异.结果 超重肥胖组及孕期BMI△≥6 kg/m2时妊娠并发症、剖宫产、新生儿出生体重、巨大儿发生率均高于均衡组及4 kg/m2≤BMI△＜6 kg/m2组（P＜0.05）,消瘦组及BMI△＜4 kg/m2组低体重儿发生率高于均衡组及4 kg/m2≤BMI△＜6kg/m2组（P＜0.05）.结论 孕前BMI及孕期BMI△与妊娠并发症及新生儿出生体重存在直接关系,要重视孕期体重增加的情况,控制在适宜的范围内.     

问号钩端螺旋体属lipL32/1-ompL1/1融合基因的真核表达及其表达产物的免疫反应性

目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)的融合基因lipL32/1-ompL1/1真核表达系统并鉴定表达产物的免疫反应性.方法:采用连接引物PCR构建融合基因lipL32/1-ompL1/1,克隆测序后构建lipL32/1-ompL1/1的毕赤酵母真核表达系统pPIC9K-lipL32/1-ompL1/1-P.pastorisGS115.用MM和MD平板分离His Mut 型菌落,YPD平板筛选出G418高抗性的His Mut 转化子.以酵母裂解酶处理的高拷贝转化子His Mut 克隆裂解产物为模板,5'AOX1和3'AOX1为引物,用PCR检测所构建的毕赤酵母工程菌株染色体DNA中的目的融合基因.在BMMY培养基中用甲醇诱导目的重组蛋白rLipL32/1-rOmpL1/1表达.采用硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析提纯培养物上清液中的rLipL32/1-rOmpL1/1.采用SDS-PAGE和Western blot分别检测rLipL32/1-rOmpL1/1的产量及其免疫反应性.结果:获得的lipL32/1-ompL1/1融合基因约为1 794 bp.其核苷酸和氨基酸序列与原始lipL32/1和ompL1/1基因型比较,相似性分别高达99.94%和100%.所构建的真核表达系统可分泌rLipL32/1-rOmpL1/1,SDS-PAGE后位于预期位置处,产量约占上清总蛋白的40%.rLipL32/1和rOmpL1/1兔抗血清均能与表达的rLipL32/1-rOmpL1/1结合.结论:本研究成功地构建了钩体lipL32/1-ompL1/1融合基因高效毕赤酵母真核表达系统,所表达的融合蛋白具有特异的免疫反应性,可作为研制钩体新疫苗的候选抗原.     

幽门螺杆菌临床菌株尿素酶B亚单位原核表达系统的构建及其重组蛋白免疫性的鉴定

目的：克隆幽门螺杆菌（Hp）ureB基因并构建其原核表达系统。方法：采用高保真PCR从幽门螺杆菌临床分离菌株Y06中扩增ureB基因，T-A克隆后测定核苷酸序列，构建pET32a的ureB表达载体，在E.coli BL21DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达，采用Hp全菌抗体的Western blot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。结果：所克隆的ureB基因与报道的相应核苷酸序列同源性为96.88％-97.82％，氨基酸序列同源性高达99.65％-99.82％。pET32a-ureB-BL21DE3系统的UreB融合蛋白表达量高达细菌总蛋白的40％左右。UreB融合蛋白能与Hp全菌抗体发生结合反应，免疫家兔能获得高效价抗体。结论：本研究成功地构建了Hp ureB高效表达系统，所表达的UreB融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性，可作为Hp瘤苗的抗原。     

问号钩端螺旋体rLTB/rCTB-LipL32/1免疫保护作用及野生株LipL32基因表达和患者抗体检测

目的构建LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫和佐剂活性及保护作用，了解问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株LipL32基因携带、表达及钩体病人血清LipL32基因产物抗体产生频率。方法采用常规分子生物学技术构建LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因及其原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rLTB-LipL32／1及rCTB-LipL32／1表达情况。分别采用Western blot和GM1-ELISA检测rLTB-LipL32／1及rCTB—LipL32／1的免疫反应性和佐剂活性。采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株LipL32基因及其表达情况。采用ELISA检测228例钩体病人血清LipL32基因产物的抗体。采用豚鼠保护试验检测重组蛋白的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较，LTB—LipL32／1和CTB-LipL32／1融合基因核苷酸序列相似性分别为99．12％～99．71％和98．54％～99．42％，氨基酸序列相似性分别为97．58％-99．63％和96．77％～99．63％。rLTB-LipL32／1和rCTB—LipL32／1表达产量均约为细菌总蛋白的10％，并主要以包涵体形式存在。rLTB—LipL32／1和rCTB-LipL32／1均分别能与LipL32／1兔抗血清和牛GMI结合。97．9％(95／97)问号钩体野生株含有LipL32基因，95．9％(93／97)问号钩体野生株与rLipL32／1和rLipL32／2兔抗血清的MAT结果阳性。97．4％(222／228)和94．7％(216／228)的病人血清rLipL32／1和rLipL32／2抗体阳性。rLTB-LipL32／1、rCTB-LipL32／1和rLipL32／1豚鼠保护率分别为75．0％、75．0％～87．5％、50．O％～62．5％。结论成功构建了LTB—LipL32／1和CTB—LipL32／1融合基因及其原核表达系统。rLTB-LipL32／1和rCTB-LipL32／1融合蛋白有良好的抗原性和佐剂活性及一定的免疫保护作用，具有成为问号钩体属特异性疫苗的良好前景。LipL32／1是不同问号钩体血清群中广泛存在、序列保守、高频率表达的基因。     

钩端螺旋体属特异性外膜蛋白抗原的分析

致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群众多,各群间交叉保护作用较弱或无,目前国内外均采用当地流行的钩体血清群来制备多价钩体疫苗,但对疫苗中未包含钩体血清群感染的保护作用极其有限,易造成钩体病的暴发流行。已知80℃灭活、生理盐水回收的腐生性双曲钩体PatocⅠ株全细胞抗原(TR PatocⅠ)能与所有钩体病人血清发生凝集反应,但其抗血清能否凝集不同血清群的问号钩端螺旋体尚不清楚。本研究中,我们采用TR PatocⅠ免疫的兔抗血清与我国15群17型问号钩体参考标准株、2群2型双曲钩体国际标准株进行了显微镜凝集试验(MAT) ,发现该抗血清能…