牛蒡子复方制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨牛蒡子复方制剂（阿克亭）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制。方法：①实验于2004—09／2005-01在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。选用健康雄性Wistar大鼠84只。将大鼠随机分为6组：假手术组，模型组，神经节苷脂组及牛蒡子复方制剂大、中、小剂量组，每组14只。每组又随机分为再灌注1，24h2个时相点，每个时相点7只进行观察。②采用改良线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型，每组模型均缺疯30min，随机使其中的7只再灌注1h，另外7只再灌注24h。神经节苷脂组在缺血即刻腹腔注射神经节苷脂（购自TRB Pharma S．A，2mL／支。生产批号20037）30mg／kg，牛蒡子复方制剂（牛蒡子生药。3g／mL，生产批号20050618，由乌苏里江制药责任有限公司提供）大、中、小剂量组在缺血即刻分别腹腔注射牛蒡于复方制剂100，50，10mg／ks。模型组给予等量生理盐水。③于大鼠缺疯30min再灌注1，24h进行神经病学评分（0分：无神经功能缺失症状，活动正常者；1分：不能伸展对侧前爪者；2分：爬行时曲现向左转圈者；3分：行走时身体向偏瘫侧倾倒者；4分：不能自发行走，意识丧失者）。④采用苏木精-伊红染色，光镜下观察脑组织变性坏死程度。⑤采用免疫组化分析方法观察Caspase-3蛋白的表达变化。⑥多组间比较采用单因素方差分析，同一时间点两组间比较采用Dunnett-t检验，不同时间点的比较采用两样本t检验。结果：进入结果分析大鼠保持为84只。①神经病学评分；神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂各剂量组明显低于模型组（t=-2．951—5．477，P〈0．05），牛蒡子复方制剂各剂量组与神经节苷脂组比较，差异不明显伊〉0．05）。②病理形态改变：模型组再灌注1h可见部分神经细胞核浆分界不清，细胞水肿；模型组再灌注24h病灶中心区神经细胞脱失范围增大，梗死血管周围出现大片空泡区。神经节苷脂组及牛蒡子复方制荆各剂量组与模型组比较，坏死区缩小，神经元受损减轻。③脑组织Caspase-3阳性细胞数：模型组再灌注1和24h明显多于假手术组（t=23．221．25．025．P〈0．01），模型组、神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注24h时明显多于再灌注1h（t=2．298-4．322，P〈0．05）；神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注1和24h明显少于模型组（t=-6．823-15．917，P〈0．01）；牛蒡子复方制剂小剂量组明显多于神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂大、中剂量组（t=6．080，6．336，P〈0．01）。结论：Caspase-3在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中活性显著增高；神经节苷脂及牛蒡子复方制剂均能降低神经功能缺失评分、抑制Caspase-3的激活，提示其脑保护作用可能与抑制缺血区Caspase-3激活从而抑制细胞凋亡有关，牛蒡子复方制剂大中剂量抑制Caspase-3激活的作用强于小剂量，与神经节苷脂作用差异不明显。     

脑脊液CK-BB、IgG指数与一氧化碳中毒迟发性脑病的相关性研究

目的研究家兔急性一氧化碳(CO)中毒后脑脊液CK-BB、IgG指数的变化,探讨其与急性一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)的相关性。方法将中毒组家兔放入一氧化碳中毒箱内,观察家兔的中毒症状,并经尾部采血测定血液中一氧化碳血红蛋白(HbCO)浓度;分别于中毒后24 h、3 d、7 d、14 d记录各家兔行为学变化,通过迷宫实验判断是否发生DEACMP,并采集脑脊液,采耳血,检测脑脊液CK-BB及IgG指数。结果脑病组与对照组及非脑病组对比在中毒后7 d、14 d脑脊液CK-BB、IgG指数均明显升高(P0.01)。脑病组Ig G指数在中毒后14 d升高更明显。结论脑脊液CK-BB、IgG指数升高与急性一氧化碳中毒性脑病发生成正相关,对预测一氧化碳中毒后迟发性脑病有重要意义。     

E-选择素预处理对大鼠脑缺血-再灌注损伤的影响

目的：研究E-选择素鼻粘膜耐受对大鼠脑缺血-再灌注损伤的作用及其机制。方法:E-选择素或PBS单程诱导耐受或加强诱导耐受48 h后,用改良的Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,缺血2 h再灌注22 h后,流式细胞仪测定血中CD3+CD4+T细胞及CD3+CD8+T细胞含量,TTC染色法测定脑梗死体积,RT-PCR检测脑梗死区E-选择素、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）的表达,黄嘌呤氧化酶法检测脑组织中SOD水平。结果:E-选择素单程诱导耐受组CD3+CD4+T细胞与CD3+CD8+T细胞比值增加（P<0.05）。与其它组相比,E-选择素加强诱导耐受组脑梗死体积减小了40.87%（P<0.05）, CD3+CD8+T细胞所占比例减小、CD3+CD4+T细胞与CD3+CD8+T细胞比值增高（P<0.05）,脑组织中SOD水平升高(P<0.05),E-选择素、ICAM-1表达减少（P<0.05）,LFA-1表达有减少趋势。结论:E-选择素鼻黏膜耐受诱导脑缺血耐受可减轻脑缺血-再灌注损伤,其作用机制与CD8+ T细胞减少,CD4+T细胞与CD8+T细胞比值增加、SOD水平升高及E-选择素、ICAM-1表达减少有关。     

脑源性神经营养因子对雪旺细胞增殖和分泌的影响

目的:评价脑源性神经营养因子(BDNF)对雪旺细胞(SCs)增殖、分泌功能的影响。方法:取新生SD大鼠双侧臂丛神经,用双酶消化法体外培养SCs,并检测特异性标志蛋白S-100的表达。按培养基中BDNF终浓度的不同将所培养的SCs设立0、10、20、50、100 ng/mL组,共5组培养2周,每2 d用MTT法测细胞活力。并对不同浓度BDNF处理的SCs培养24 h后,取上清液,ELISA法测细胞分泌神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)水平。结果:培养出的细胞呈S-100阳性,为SCs。与0 ng/mL BDNF组比较,终浓度为50、100 ng/mL BDNF组的SCs细胞活力明显高于0 ng/mL组(均P<0.05),而浓度为10、20 ng/mL时虽有差异但无统计学意义(均P>0.05)。SCs能分泌NGF和FGF;其中终浓度为50 ng/mL BDNF组的SCs分泌NGF和FGF水平最高(P<0.05)。结论:BDNF对SCs的增殖和分泌功能有促进作用,终浓度为50 ng/mL时,SCs的活力与分泌能力最佳。     

25-羟维生素D与认知障碍的研究进展

近几年对维生素D在维持人体健康上的作用的研究不断增加,越来越多的证据表明维生素D不仅对预防老年人骨质疏松症及骨折有明显益处,而且可能降低癌症、感染、自身免疫性疾病、心血管系统及神经系统疾病的发病率。目前研究指出维生素D具有神经保护作用,可以控制诱发认知障碍的促炎细胞因子,参与神经递质乙酰胆碱的合成,也与动脉粥样硬化、脑梗死、糖尿病及高血压病等有关。     

大脑中动脉闭塞大鼠继发丘脑损害与NAD含量关系探讨

目的观察大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠继发性丘脑病变,探讨其与NAD含量改变的关系,并考察缺血48 h后补充外源性NAD+能否减轻损害程度。方法建立5组动物分组,分别为MCAO模型组、建模48 h后补充NAD+组(NAD组)、建模48 h后补充溶剂组(溶剂组)、假手术组和空白对照组。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,并于建模48 h后向NAD组腹腔注射NAD+50 mg/kg,同时向溶剂组腹腔注射等量0.9%Na Cl溶液。于建模4周后处死大鼠,取丘脑行免疫组化,测定β淀粉样蛋白前体(APP)表达情况,尼氏染色计数形态完整细胞数,并使用酶循环法测定丘脑NAD含量。结果与假手术组、空白对照组比较,模型组APP表达较高,NAD含量及完整神经元个数减少(P<0.05)。与模型组比较,NAD组APP表达较低,NAD含量及完整神经元个数较高(P<0.05)。结论大脑中动脉供血区发生局部脑缺血后,丘脑处存在继发性病变。NAD含量变化与继发性丘脑损害相关。脑梗死48 h后补充外源性NAD+能够减轻丘脑损害。     

脑池内预应用肿瘤坏死因子-α对帕金森病小鼠黑质多巴胺神经元的影响及其机制

目的:研究脑池内预应用肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠黑质多巴胺神经元的影响及可能作用机制。方法:实验于2003-09/2004-03在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室进行。以MPTP诱导小鼠帕金森病模型,各干预组脑池内预注入TNF-α(0.1,2.0,100.0ng),24h后皮下注射MPTP40mg/(kg·d),连用5d,并设对照。观察小鼠行为学改变,免疫细胞化学染色法检测黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元及活化型caspase-3阳性细胞。结果:模型组小鼠黑质TH阳性神经元犤(22.429±7.254)/个犦比对照组犤(64.286±13.487)个犦明显减少(t=6.6764,P<0.001),模型组与对照组相比活化型caspase-3表达上调(P<0.001);各干预组与模型组相比,黑质TH阳性神经元明显减少(P<0.05),而且活化型cas-pase-3阳性细胞表达上调(P<0.05)。结论:脑池内以TNF-α预处理MPTP小鼠,使黑质多巴胺神经元损伤加重,其途径可能与caspase-3引起的细胞凋亡相关。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察预先应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用，以及在此过程中核转录因子κB表达的变化。方法：实验于2003-08／2004-04在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。①取63只雄性Wistar大鼠随机分为3组：假手术组（n=7），模型组（n=28）和N-乙酰半胱氨酸组（n=28），后两组又分为缺血6，24h两个亚组，每亚组14只。②N-乙酰半胱氨酸组于缺血前30min腹腔注射N-乙酰半胱氨酸（150mg/kg），其余大鼠注射等体积生理盐水。模型组和N-乙酰半胱氨酸组大鼠采用线栓法制作大鼠局灶脑缺血再灌注模型，于缺血6或24h后给予再灌注，1h后断头处死；假手术组不栓塞大脑中动脉，于术后1h断头处死。③应用红四氯氮唑染色测定大鼠脑梗死体积，苏木精-伊红染色分析病理形态学变化，免疫组化法观测核转录因子κB的表达情况。结果：经补充后63只大鼠进入结果分析。①N-乙酰半胱氨酸组较模型组脑组织损伤轻，炎性细胞浸润少。②缺血6，24hN-乙酰半胱氨酸组梗死体积百分比低于相应模型组[（8.57&;#177;2.34）％，（15.56&;#177;3.46）％；（23．66&;#177;6．34）％，（31．91&;#177;3.30）％；P〈0．01]。③假手术组核转录因子κBp65主要存在于胞质，模型组明显从胞质移位于胞核，N-乙酰半胱氨酸组较模型组p65阳性细胞减少（P〈0．01）。结论：④缺血再灌注后核转录因子κBp65活化，从胞质转移到胞核。②应用N-乙酰半胱氨酸能抑制核转录因子κB活化，减少炎症反应和脑组织损伤，缩小梗死体积，在6，24h的长时间脑缺血中仍能起到脑保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠局部脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察预先应用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对局部脑缺血再灌注损伤的保护作用,以及在此过程中核转录因子κB表达的变化。方法:实验于2003-08/2004-04在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成。①取63只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(n=7),模型组(n=28)和N-乙酰半胱氨酸组(n=28),后两组又分为缺血6,24h两个亚组,每亚组14只。②N-乙酰半胱氨酸组于缺血前30min腹腔注射N-乙酰半胱氨酸(150mg/kg),其余大鼠注射等体积生理盐水。模型组和N-乙酰半胱氨酸组大鼠采用线栓法制作大鼠局灶脑缺血再灌注模型,于缺血6或24h后给予再灌注,1h后断头处死;假手术组不栓塞大脑中动脉,于术后1h断头处死。③应用红四氯氮唑染色测定大鼠脑梗死体积,苏木精-伊红染色分析病理形态学变化,免疫组化法观测核转录因子κB的表达情况。结果:经补充后63只大鼠进入结果分析。①N-乙酰半胱氨酸组较模型组脑组织损伤轻,炎性细胞浸润少。②缺血6,24hN-乙酰半胱氨酸组梗死体积百分比低于相应模型组[(8.57±2.34)%,(15.56±3.46)%;(23.66±6.34)%,(31.91±3.30)%;P<0.01]。③假手术组核转录因子κBp65主要存在于胞质,模型组明显从胞质移位于胞核,N-乙酰半胱氨酸组较模型组p65阳性细胞减少(P<0.01)。结论:①缺血再灌注后核转录因子κBp65活化,从胞质转移到胞核。②应用N-乙酰半胱氨酸能抑制核转录因子κB活化,减少炎症反应和脑组织损伤,缩小梗死体积,在6,24h的长时间脑缺血中仍能起到脑保护作用。     

注射肿瘤坏死因子-α对大鼠脑缺血再灌注的影响

背景一些研究提示肿瘤坏死因子-α预注射对小鼠局灶性脑缺血可产生保护作用,脑缺血耐受与血浆肿瘤坏死因子-α水平增高有关.另一方面,肿瘤坏死因子-α是与脑卒中有关的一个有害细胞因子,抗肿瘤坏死因子-α循环抗体对再灌注损伤起保护作用.目的探讨脑缺血再灌注前、后不同时期注射肿瘤坏死因子-α对大鼠脑缺血灶的影响,是保护作用还是毒性作用.设计随机对照实验.单位哈尔滨医科大学附属第二医院神经科.材料实验于2002-01/2002-04在哈尔滨医科大学动物实验中心完成;选择健康雄性Wistar大鼠120只,随机将大鼠分为8组预注射肿瘤坏死因子-α 0.05,0.5,1.0μg及磷酸盐缓冲液对照组,后注射肿瘤坏死因子-α 0.05,0.5,1.0μg及磷酸盐缓冲液对照组,每组15只.方法制备大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型.缺血前48 h或缺血2 h再灌注后,在大鼠小脑延髓池内分别注射不同剂量肿瘤坏死因子-α(0.05 μg,0.5 μg,1.0μg)或磷酸盐缓冲液.①各组取8只大鼠,于脑缺血2 h再灌注22 h,麻醉下处死取脑,制备TTC切片,用计算机图像分析系统测定每个脑片面积及梗死面积,然后计算梗死体积百分比.②各组取7只大鼠,于缺血2 h再灌注22 h后,麻醉下处死取脑,行HE、GFAP和ICAM-1免疫组化染色,用显微镜和计算机图像分析系统分析组织病理和免疫组化切片,计算胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数目及每侧半球细胞内黏附分子-1阳性血管数.主要观察指标①各组大鼠脑梗死体积百分比.②各组大鼠脑组织病理学观察.③各组大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白和细胞间黏附分子-1蛋白表达情况.结果120只大鼠全部进入结果分析.①脑梗死体积百分比肿瘤坏死因子-α 0.5 μg预注射组及1.0μg预注射组脑梗死体积减小,0.5μg预注射组脑梗死体积百分比减小70.9%,1.0 μg预注射组减小66.5%;肿瘤坏死因子-α 0.5 μg后注射及1.0 μg后注射组脑梗死体积增加,0.5 μg后注射组脑梗死体积百分比增加22.3%,1.0 μg后注射组增加46.7%.肿瘤坏死因子-α 0.5 μg预注射组与1.0 μg预注射组间比较无显著差异(P＞0.05),肿瘤坏死因子-α 0.5 μg后注射组与1.0 μg后注射组间比较有显著差异(P＜0.05).②病理变化肿瘤坏死因子-α0.5 μg预注射组及1.0 μg预注射组脑组织变性坏死程度减轻;肿瘤坏死因子-α0.5 μg后注射及1.0 μg后注射组脑组织变性坏死程度加重.③胶质纤维酸性蛋白和细胞间黏附分子-1蛋白的表达肿瘤坏死因子-α0.5 μg预注射组及1.0 μg预注射组胶质纤维酸性蛋白和细胞间黏附分子-1蛋白表达减少(P均＜0.05);肿瘤坏死因子-α 0.5μg后注射及1.0 μg后注射组胶质纤维酸性蛋白和细胞间黏附分子-1蛋白表达增加(P均＜0.05);肿瘤坏死因子-α 0.5 μg预注射组与1.0 μg预注射组间比较无显著差异(P均＞0.05),肿瘤坏死因子-α 0.5 μg后注射组与1.0 μg后注射组间比较有显著差异(P均＜0.05).结论①肿瘤坏死因子-α预注射对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,该作用与星形胶质细胞的修复作用无关,而与细胞间黏附分子-1表达减少有关.②在脑缺血再灌注后给肿瘤坏死因子-α则加重脑缺血,该作用与细胞间黏附分子-1表达增加有关.③脑缺血前或脑缺血后给予肿瘤坏死因子-α决定了它的作用效果,这两种作用都有剂量依赖性.