深圳市食物中毒来源金黄色葡萄球菌的分子流行病学分析

目的建立金黄色葡萄球菌(金葡菌)的分子分型技术,研究深圳市食物中毒来源金葡菌的分子流行病学特征。方法对食物中毒事件中食物链的不同环节均采集标本,进行金葡菌分离培养。对所分离菌株同时应用SPA分型及PFGE技术作分子流行病学分析。结果 136起疑似食物中毒事件中有12起能够从食物链不同环节分离到金葡菌,共59株。PFGE将59株金葡菌分为15个型别,在10起食物中毒事件的不同环节中分析到PFGE型别一致的菌株,分辨系数为0.87。SPA分型将59株金葡菌分为10个型别,在12起食物中毒事件中不同环节样品中分析到SPA型别一致的菌株,分辨系数为0.85。结论 PFGE的分辨力高于SPA分型;通过结合流行病学资料分析,12起食物中毒事件中有6起能够通过分子分型方法准确溯源。     

重组柞蚕抗菌肽AD的纯化及鉴定

目的从重组柞蚕抗菌肽AD毕赤酵母发酵液中分离纯化出抗菌肽纯品,并对其进行纯度、分子量和抗菌作用的鉴定。方法用离子交换和疏水层析法对发酵液中的重组柞蚕抗菌肽AD进行分离纯化,用高效液相色谱法分析产物的纯度,再用基质辅助激光解析—飞行时间质谱仪对产物进行分子量鉴定,并结合传统微量肉汤稀释法和流式细胞术分析重组柞蚕抗菌肽AD纯品对E.coli敏感株及耐药株的抗菌作用。结果重组柞蚕抗菌肽AD经离子交换和疏水层析纯化后的纯度达到98.40%,分子量为4068.15Da,与所设计的重组柞蚕抗菌肽AD大小相近。所纯化出的重组柞蚕抗菌肽AD对E.coli的敏感株ATCC25922和产β-内酰胺酶耐药株株ATCC35218的抗菌作用均为MIC 8μg/m L,而头孢他啶和氨苄西林对耐药株ATCC35218的MIC的值分别为8μg/m L和>32μg/m L。结论成功纯化分离出具有自主知识产权的重组柞蚕抗菌肽AD,其对E.coli敏感株和耐药株具有相同的抗菌效果。     

深圳市淡水鱼中香港海鸥菌污染状况调查

目的了解深圳市淡水鱼受香港海鸥菌污染的状况。方法于2011年2-3月共采集深圳市2家农贸批发市场和1家商场淡水鱼共计329份,将鱼肠中、后段内容物直接涂布改良麦康凯琼脂平板,凡生化符合的同时用特异性荧光PCR确诊香港海鸥菌。结果在329份淡水鱼中共检出香港海鸥菌7份,总阳性率为2.13%,其中塘虱鱼的阳性率最高为7.50%,鳙鱼的阳性率为2.50%,草鱼的阳性率为1.22%,其它淡水鱼未检出。7株香港海鸥菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。结论深圳市场淡水鱼中香港海鸥菌的污染不容忽视,应加强对淡水鱼产品中香港海鸥菌污染的监测,及时进行食品安全的预防和预警。     

香港海鸥形菌分型方法建立与病原学分布调查

目的通过对深圳市感染性腹泻患者标本与外环境水产品标本的检测,掌握深圳市香港海鸥形菌病原学特征及分子分型。方法用传统方法和荧光PCR法同时检测香港海鸥形菌,阳性菌株用K-B法做药敏试验和PFGE分子分型。结果在329份淡水鱼中共检出7份阳性标本,579份腹泻病人标本未检出。该菌对临床常用的24种抗生素耐药性检测结果显示,对氨苄西林、头孢他啶、头孢噻吩、头孢噻腭、头孢哌酮、头孢曲松耐药,头孢西丁为中介,其余均为敏感。7株香港海鸥形菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。PFGE分子分型表明7株菌不具有同源性。结论本文建立一套完整的对该菌的分离鉴定、基因诊断和PFGE分子分型方法;了解深圳地区主要流行菌型,预测深圳地区该菌的流行趋势,为应对食源性疾病突发事件和水产品安全问题做好技术储备。     

聚合酶链反应与生物化学反应方法鉴定单核细胞增多性李斯特菌的比较

李斯特菌病是一种波及中枢神经系统的新发食源性疾病，以病死率高、传播迅速、波及范围广、能引起大流行为特征，单核细胞增多性李斯特菌是引起李斯特菌病的病原菌。     

伤寒沙门菌PFGE分子分型及耐药性研究

目的对深圳市2004-2011年伤寒沙门菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型及耐药性分析,为临床用药和追踪传染源提供依据。方法采用K-B法对42株伤寒沙门菌进行20种抗菌药物敏感性测试,并用PFGE对其进行分子分型。结果 42株伤寒沙门菌株对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻吩、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢西丁、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、左旋氧氟沙星、复方新诺明、甲氧苄啶、氯霉素和四环素17种药物的敏感率均超过90%,对萘啶酸耐药率最高达61.5%。42株伤寒沙门菌株可分为SZ0001-SZ0028共28个PFGE型别,其中流行优势型为SZ0023型别。结论结合药物敏感试验结果和PFGE分子分型结果可以判断伤寒疫情的优势株型。     

实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。     

臭氧水消毒器对微生物杀灭效果的试验观察

目的：观察臭氧水消毒器产生臭氧水的杀菌效果。方法：采用悬液定量和载体定量杀菌试验进行检测。结果：该机产生含臭氧4．20mg／L的水溶液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用5min的杀灭率均为100％；当菌液中含有10％蛋白胨时，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌作用5min的杀灭率分别为55．67％、59．48％和37．44％。用消毒液流动浸泡载体定量杀菌试验，含臭氧4．20mg／L的水溶液作用30min对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的平均杀灭率分别为99．95％、99．99％和96．94％。结论：该臭氧水消毒器产生的臭氧水具有一定消毒效果。     

食源性单核细胞增生李斯特菌的自动化核糖体基因分型

[目的]为了解我国食品来源的单核细胞增生李斯特菌(Listeria Monocytogene,LM)的遗传物质多态性特征,探索LM鉴定及溯源新方法. [方法]运用自动化的核糖体基因分型系统(RiboPrinter),用EcoRI酶,对我国食品污染物监测网来源的67株LM进行了分子分型研究. [结果]67株菌均被鉴定为LM;并获得了13种RiboPrinter 核糖体基因条带型,除2种被系统判定为新条带型,另外11种分别与杜邦数据库中的DUP-1038、DUP-1039、DUP-1042、DUP-1044、DUP-1045、DUP-1052相似. [结论]RiboPrinter分型结果为建立我国LM分子分型数据库积累了一定的数据和经验,但由于菌株的来源地及数量都有限,因此尚不能看出核糖体基因型是否有明显的地域分布特征.