SARS病人外周血T淋巴细胞的动态变化及其在发病进程和发病机理中的意义

目的 :通过研究严重急性呼吸综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS)患者外周血免疫细胞的动态变化 ,探讨外周血免疫细胞在SARS发病进程中的意义 ,初步探讨SARS的发病机理 ,并为SARS的诊断和治疗提供有力的实验室依据。方法 :回顾性动态观察我院收治的已治愈SARS病例和SARS死亡病例外周血CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞 ,评估外周血免疫细胞在SARS发病进程及预后中的作用。实验方法为流式细胞术检测和分析免疫细胞表面特异性荧光抗体标记 ,T细胞表面标志组合为CD3 CD8 CD4 5 CD4。结果 :所有治愈的SARS病人的CD4 + 和CD8+ T淋巴细胞都有不同程度的可逆性下降 ,而所有的死亡病例有不可逆性显著下降 ,直至死亡。T细胞下降程度和维持的时间与病情密切相关。普通型SARS病例最低CD4 + T淋巴细胞数为 30 5± 15 0cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 139± 6 9cells μl(P <0 .0 0 1) ,普通型SARS病例最低CD8+ T淋巴细胞数为 2 2 3± 89cells μl(P <0 .0 0 1)、重型为 171± 92cells μl(P <0 .0 0 1)。所有普通型病例和大部分重型病例T淋巴细胞恢复正常 ,个别重型病例低于正常或接近正常 ,恢复后普通型平均为 991± 2 86cells μl,重型平均为 5 4 5± 2 2 5cells μl。恢复时间有所不同 ,普通型平均为 17± 5天     

SARS患者外周血B淋巴细胞和自然杀伤细胞动态变化

目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)患者的外周血B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞动态变化。方法 应用流式法对240例SARS患者的602份系列标本外周血B淋巴细胞和NK细胞进行绝对计数测定。结果 SARS患者的B淋巴细胞和NK细胞计数显著低于正常人(P<0.001);重型(极重型)患者明显低于普通型(P<0.001)。治愈组SARS患者的B淋巴细胞于发病时处于低水平,但于发病后第2周开始上升,然后随病情恢复逐渐升至正常水平。但NK细胞于发病时已处于低水平,至发病后第2周继续下降,于发病后第5周有所上升,但仍未恢复至正常水平。结论 SARS患者的B淋巴细胞和NK细胞计数与病情轻重有关,测定SARS患者的该两种细胞计数有助于判断预后。     

血清乙肝病毒DNA煮沸抽提法的建立和应用

目的 建立一种简便的血清HBVDNA抽提方法一煮沸抽提法，并将其应用于巢式PCR扩增。方法 选取16份CHB血清，分别应用直接煮沸法和异硫氰酸胍-酚／氯仿法进行HBVDNA抽提后，进行荧光定量PCR测定；并以煮沸法抽提样品为模板，进行HBVDNAP区部分片段巢式PCR扩增。结果 将上述两种抽提方法的荧光定量PCR结果取对数后进行直线相关分析和配对样本I检验，结果显示：两种方法的定量PCR结果之间存在良好的相关性(r=0．696，P=0．003)，且二者定量PCR结果无差异(P=0．663)。16份标本巢式PCR扩增均为阳性，PCR产物分子量大小与预期值相符。结论 直接煮沸法抽提HBVDNA，简便、快速、效果好，适用于HBV的科研和临床检测工作。     

北京地区丙型肝炎患者的丙型肝炎病毒基因分型

研究旨在了解近年来北京地区丙型肝炎病毒(HCV)流行株的基因型别，探讨基因型与肝病程度，HCV RNA病毒载量的关系。     

C型乙型肝炎病毒的全基因组序列分析

目的 探索乙型肝炎病毒(HBV)全基因组的结构特点。方法 应用直接PCR基因分型法确定HBV基因型。然后随机选择1例单纯HBVC基因型感染的患血清，分3个相互重叠片段扩增HBV基因并分别克隆测序。利用Vector NTI Suite7．0软件包、GeneDoc2．6和TreeView1．5，将该3个基因片段拼接为全基因组序列，命名为BDHBl，并进行基因进化树分析和同源性比较。结果 HBVC基因型序列全长为3215bp，其中A占22．2％，G占22．4％。C占26．8％。T占28．6％；有S、C、P和X区4个开放读码框架(ORFs)；HBsAg亚型为adr；HBVRT区549～552aa为YMDD，未发生变异；未发现前C区：ntl896G变异：BCP区ntl762、1764发生双突变。对HBV分段序列及全基因组序列进行基因进化树分析显示，BDHBl与HBVVC基因型的同源性最高。结论 BDHBl基因组符合HBVC基因型结构特点，在BCP区存在双突变。分片段扩增再拼接可作为全基因组序列分析方法之一。     

应用PCR法对临床血标本中人微小病毒B19的检测分析

目的探讨PCR法检测临床血标本中人微小病毒B19(HPV B19)的应用价值。方法根据序列比对结果,在HPV B19核苷酸相对保守区设计引物进行PCR扩增。应用双脱氧链末端终止法对HPV B19阳性PCR产物进行克隆测序。结果应用该法最终检出HPV B19的血清稀释度为10^3。序列比较表明,用本法检出的1株HPV B19阳性标本与标准株(Au株)核苷酸序列同源性为92％。检测肝癌和肝硬化患者血清标本各14例,结果HPV B19阳性分别为8例和5例。结论本法可用于HPV B19的临床诊断和流行病学调查。     

异源双链泳动分析法快速检测TT病毒基因型

目的 建立一种简单、敏感、特异和成本低的TT病毒(TTV)基因型测定方法。方法 采用巢式聚合酶链反应方法(nPCR)对96名正常人和180例各型肝炎患者血清标本进行TTV DNA检测，然后采用异源双链泳动分析法(HMA)和序列测定分析法对TTV DNA阳性标本进行基因分型。结果 各型病毒性肝炎中TTV DNA阳性率为22．2％(40／180)，正常人为19．8％(19／96)，两者差异无显著性(X^2=0．220，P=0．639)。在甲、乙、丙、戊型肝炎和非甲～戊型肝炎患者中TTV DNA阳性率分别为20．0％(6／30)、16．7％(5／30)、23．3％(7／30)、36．7％(11／30)和18．3％(11／60)。在40例TTV DNA阳性标本中，经HMA法分型，G1型为50．0％(20／40)，G2型为17．5％(7／40)，混合型为25．0％(10／40)，另有7．5％(3／40)未能分型。10例TTV混合型感染的标本经克隆测序及基因进化树分析，5例为G1和G2型，2例为G1和G3型，1例为G1和G4型，1例为G2和G3型，1例为G1、G2和G3混合型感染。结论 HMA是一种简单、敏感、特异和经济的分型法，可用于TTV基因型分型。     

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区聚合酶链反应检测方法的建立及应用

目的:建立一种以丙型肝炎病毒(HCV)干扰素敏感决定区(ISDR)特异性引物为基础的聚合酶链反应(PCR)方法,对HCVISDR进行序列测定.方法:根据GenBank中6株HCV全序列核苷酸序列,设计共同的外引物及三组ISDR型特异性内引物.建立了HCVISDRPCR检测方法,对27例HCV基因型1b的慢性丙型肝炎患者血清HCVRNA进行测定,并对PCR阳性标本的产物进行多位点分析.结果:A组PCR结果阳性率为37%(10/27),A-B组为30%(8/27),A-C组为4%(1/27),A-B-C组为22%(6/27),三组均阳性者有5例为使用IFN治疗6-12mo后定性PCR检测HCVRNA转阴,停药3mo后PCR检测HCVRNA结果仍为阴性.结论:以ISDR特异性引物为基础的PCR法可靠、简便,可用于丙型病毒性肝炎患者对HCV进行敏感决定区的测定,用于以NS5A-ISDR突变数量来预测HCV基因型1b感染的患者对IFN的持续应答.     

19例SARS死亡病例免疫学特征分析

目的　总结 19例严重急性呼吸综合征 (SARS)死亡病例的免疫学特点。方法　分析SARS死亡病例的一般临床特征 ,并用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对计数 ,并与艾滋病 (AIDS)患者及正常对照组比较。结果　SARS死亡病例的淋巴细胞总数、T、T4和T8淋巴细胞绝对数均显著低于AIDS组及正常对照组(P <0 0 0 1) ,4项指标最低值分别为 85个 /mm3 、3 8个 /mm3 、2 6个 /mm3 和 14个 /mm3 ;SARS组的T4/T8淋巴细胞比值高于AIDS组 (P <0 0 0 1) ,与正常对照组无显著性差异 (P =0 8663 ) ;NK和B淋巴细胞低于正常组 (P <0 0 0 1) ,最低值分别为 2个 /mm3 和 17个 /mm3 。结论　SARS患者的细胞和体液免疫功能明显低下。检测T淋巴细胞及其亚群、NK和B细胞绝对数有助于判断SARS患者的病情和预后 ,并对发病早期的辅助诊断有一定意义     

12例TTV DNA阳性肝炎患者临床分析

1997年底日本学者发现一种新的肝炎病毒并命名为TTV。根据日本报道的TTV基因序列,我们建立了套式聚合酶链反应(nested-PCR)方法,对1997年3月～1998年4月的90份急慢性肝炎及重型肝炎患者血清进行检测,发现12例TTV DNA阳性(13.3)％。现将这12例患者临床资料报告如下。 一、一般资料 12例患者中男性8例,女性4例,平均年龄41岁,诊断为急性肝炎者7例,(其中4例为非甲-戊型肝炎且排除HBV和CMV感染,2例抗HAV-IgM阳性,1例抗-HEV阳性),2例长期HBsAg