Anxa5真核表达质粒构建及其对小鼠肝癌Hca—P细胞增殖影响观察

目的：构建pcDNA3。1-V5／HisB—Anxa5真核表达质粒,获得膜联蛋白A5（AnnexinA5,Anxa5）表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,探究Anxa5上调对Hca—P增殖的影响。方法：利用RT—PCR扩增小鼠全长Anxa5编码序列,将其克隆到pcDNA3．1-V5／HisB载体中,并将构建的pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒转入Hca—P细胞。采用（;418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,观察细胞形态变化。蛋白质印迹法分析Anxa5表达情况,CCK-8法检测相应Hca—P细胞的增殖能力。结果：酶切及测序结果显示,pMD R 18-T—Anxa5克隆质粒和pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒构建成功;获得了Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株;与正常Hca-P比较,Anxa5蛋白在pcDNA3．1一V5／HisB-Anxa5-Hca-P单克隆细胞中上调了59．5％,P一0．016;pcDNA3．1-V5／HisB～Anxa5-Hca—P增殖显著加快,P=0．002。结论：成功构建了Anxa5真核表达质粒并获得Anxa5表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,Anxa5上调对Hca—P细胞的增殖具有促进作用,为后续研究提供实验基础。     

基于医学领域重大科技项目科研诚信管理的现状研究

目的研究我国医学领域项目管理专业机构及承担单位的科研诚信管理, 分析重大科技项目科研诚信管理现状与问题, 梳理科研诚信管理的需求。方法采用定量与定性相结合的方法, 描述医学重大科技项目承担单位的科研诚信管理全流程, 了解专业管理机构在重大科技项目的科研诚信管理举措。结果承担单位将科研诚信管理落实于重大项目的全流程, 规范管理科研伦理及人类遗传资源申报, 部分专业机构缺乏科学有效的科研诚信评价机制。结论加强项目管理专业机构和承担单位科研诚信管理体系建设, 注重科研活动全过程科研诚信管理, 建立立体化、全方位的重大项目科研诚信监管体系, 加强医学研究伦理和人类遗传资源的规范化管理, 协同推动医学研究高质量发展。     

D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型的建立

目的研究D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠慢性肝损伤模型建立的方法。方法 30 mg/mLD-氨基半乳糖和2μg/mL脂多糖混合溶液,腹腔注射,每2天1次,连续8周。监测小鼠饮食和体重变化;取血测定小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;取肝组织,HE和Masson染色,观察小鼠肝组织结构、细胞形态及纤维化程度。结果模型组ALT水平升高,肝细胞变性、坏死等病变,组织纤维化明显增生。结论 D-氨基半乳糖联合脂多糖可诱导小鼠的慢性肝损伤模型。