从执业医师考试探讨医学微生物学教学改革

通过分析基础医学教学模式的现状和存在的问题,确认在教学改革中引入执业医师资格考试,将培养医师专业能力作为教学目标,以提高教学效能,促进基础阶段综合型课程的开展。在前期实践基础上设计教学流程,提出在医学微生物学教学中注重学科基本知识点和理论体系,强化与其他医学学科的联系。将课堂讲授法与改造PBL结合,将课外小组学习和课堂PBL结合,增加考核量化的指标,建立具有高效能的医学教学模式。     

γH2AX在HPV16阳性宫颈鳞癌组织中的表达及意义

目的 探讨γH2AX在HPV16阳性宫颈鳞癌组织中的表达及意义.方法 对74例宫颈鳞癌组织通过DNA提取,PCR检测,分析HPV的感染情况并筛选HPV16阳性宫颈癌组织;进而对HPV16阳性的宫颈癌石蜡组织连续切片HE染色明确组织型别,进行HPV16 DNA原位杂交检测HPV定位、免疫组化检测γH2 AX和p16蛋白的表达;最后选取30例典型的包括从正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变到宫颈原位癌渐变的组织切片,对比HPV DNA定位与γH2 AX和p16蛋白的表达,分析γH2 AX作为HPV感染导致宫颈癌发生过程中生物标记物的可行性.结果 经PCR扩增证明HPV感染率为98.65％,HPV16是最常见的型别占74.32％;原位杂交结果显示正常宫颈组织和CIN Ⅰ检测不到HPV16 DNA的存在,CINⅡ中HPV主要为游离型存在,随着宫颈病变的加重,HPV16 DNA逐渐出现整合形式;p16和γH2AX的表达均随着宫颈上皮病变级别的增加其阳性表达率增高,HPVDNA和γH2AX的表达均以颗粒细胞层和棘细胞层为主,定位具有一致性,HPV DNA和p16的表达定位不具有一致性.结论 γH2AX作为DNA损伤激活的重要蛋白,可作为HPV16感染致宫颈癌发生过程中的生物标记物.     

基础医学七年制学生毕业实习的模式探索

毕业实习是七年制基础医学专业教育的重要环节.通过分析七年制基础医学专业的学制特点和学生素质,结合医学微生物学的专业特点,从课题选择和实施以及毕业考核标准等方面,对七年制基础医学专业的毕业实习改革进行了探索与实践,采用了课题组支持和个性化的讨论式实习指导,发挥七年制学生优势、开展创新性课题研究,取得了良好的效果.     

人乳头瘤病毒基因工程疫苗的基础实验研究

人乳头瘤病毒(HPV)16型感染与宫颈癌的发生、发展密切相关,故研制HPW16型基因工程疫苗对预防HPV感染、控制宫颈癌的发生有重要意义。本研究构建HPV16 L1基因工程菌并进行了基础实验研究。首先采用PCR技术从3例宫颈癌组织中扩增和克隆了HPV16L1基因片段并进行测序。进而构建了pPIC3.5～HPV16L1真核表达工程菌、pQE31～HPV16L1和pGEX4T-HPV16LI原核表达工程菌及杆状病毒-昆虫细胞表达系统。经SDS-PAGE、Westem blot和电镜等手段证明了工程菌表达HPV16 L1蛋白的分子特性和免疫原性,而且,重组菌表达的HPV16 L1可以形成类病毒颗粒(VLP)。经免疫BALB/C小鼠可获得高效价特异血清,证实重组HPV16 L1蛋白具有良好的免疫原性。为进一步研制临床应用疫苗及血清学诊断试剂提供了实验基础。     

人乳头瘤病毒16型 E5基因克隆、原核表达及产物鉴定

目的 克隆HPVl6 E5基因,构建原核重组工程菌并诱导表达,对表达产物HPVl6E5蛋白进行鉴定.方法 提取宫颈癌组织DNA作为模板,用PCR方法扩增HPVl6 E5基因,经BamH I和HindⅢ双酶切后,插入相同酶切的pET21b载体质粒,转化DH5α,筛选阳性克隆.经酶切和测序鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),建屯重组工程菌株pET21b-HPVl6E5/BL21(DE3).经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物.结果 HPVl6 E5基因扩增片段0.27kb.测定序列与HPVl6原型株E5基因比较,出现4处核苷酸变异,分别为3979、4042、4077和4089位,引起144L和165V氨基酸改变.重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确.SDS-PAGE分析重组菌在16 kDa处出现蛋白条带.该蛋白条带可被组氨酸标签单克隆抗体特异性识别.结论 成功克隆HPVl6E5基因,并构建原核表达质粒,E5 蛋白在BL21(DE3)中表达.本实验为进一步研究E5生物学活性、转化活性和肿瘤杀伤免疫作用奠定了实验基础.     

HPV16 L1重组蛋白的纯化及免疫原性的实验研究

人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型感染与宫颈癌的发生密切相关。本研究通过包涵体提取、溶解、变性、复性、纯化 ,获得GST HPV16L1融合蛋白 ,同时检测GST HPV16L1蛋白在体外复性过程中自我组装成病毒样颗粒 (VLP)的情况。通过动物实验验证HPV16L1融合蛋白的免疫学作用。材料 :pGEX4     

人乳头瘤病毒基因工程疫苗的基础实验研究

人乳头瘤病毒(HPV)16型感染与宫颈癌的发生、发展密切相关，故研制HPV16型基因工程疫苗对预防HPV感染、控制宫颈癌的发生有重要意义。本研究构建HPV16L1基因工程菌并进行了基础实验研究。首先采用PCR技术从3例宫颈癌组织中扩增和克隆了HPV161基因片段并进行测序。进而构建了pPlC3．5-HPV16L1真核表达工程菌、pQE31-HPV16L1和pGEX4T—HPV16L1原核表达工程菌及杆状病毒一昆虫细胞表达系统。经SDS—PAGE、Western blot和电镜等手段证明了工程菌表达HPV16 L1蛋白的分子特性和免疫原性，而且，重组菌表达的HPV16 L1可以形成类病毒颗粒(VIP)。经免疫BALB／C小鼠可获得高效价特异血清，证实重组HPV16 L1蛋白具有良好的免疫原性。为进一步研制临床应用疫苗及血清学诊断试剂提供了实验基础。     

HPV16地方分离株E6基因的克隆与原核表达研究

目的克隆人乳头瘤病毒（HPV16E6）基因并在大肠埃希菌中表达，对表达产物进行鉴定。方法用PCR方法从克隆质粒pUC19-HPV16E6E7中扩增HPV16E6基因，采用定向克隆构建pQE30-HPV16E6原核表达质粒．利用酶切和序列测定鉴定重组质粒。将pQE30-HPV16E6转化大肠埃希菌BL21（DE3），建立重组工程菌pQE30-HPV16E6／BL21（DE3）。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导，SDS—PAGE分析蛋白表达情况，利用Western blot鉴定抗原特异性。结果PCR产物470bp，重组质粒经酶切和序列测定证实构建正确。SDS—PAGE分析在18×10^3处有蛋白条带出现，与预期一致。Western blot分析证实目的条带与HPV16E6抗体有特异性反应。结论成功构建了HPV16E6基因的基因工程菌株，能高效表达E6蛋白，表达蛋白具有良好的免疫反应性。     

大学生网络小说成瘾问卷编制

目的编制大学生网络小说成瘾问卷。方法在半开放式问卷与访谈的基础上,形成包含33个项目的预测问卷;对161名大学生进行问卷施测,通过项目分析和因素分析,形成由23个项目构成的正式问卷;以319名大学生为被试,对问卷的信度和效度进行检验。结果大学生网络小说成瘾问卷包含5个维度:作息健康状况、人际学业问题、耐受性、时间管理和戒断反应,共解释了62.140%的变异;五因素模型在验证性因素分析中得到了较好的验证(χ2/df=2.602,GFI=0.848,AGFI=0.809,NFI=0.826,CFI=0.848,IFI=0.885,RMSEA=0.075);信度分析显示各维度的α系数为0.669~0.843,分半信度为0.657~0.866,各维度与总分间有显著相关(0.714~0.879,P<0.01),各维度间有较高的相关(0.432~0.664,P<0.01)。结论编制的大学生网络小说成瘾问卷具有良好的心理测量学指标。     

细胞型朊蛋白分子结构及其相关疾病的研究进展

细胞型朊蛋白(cellular prion protein,PrPC)是一种高度保守且广泛表达的糖磷脂酰基醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)锚定糖蛋白,定位于脂筏.在哺乳动物体内,PrPC在中枢神经系统和网状内皮系统中大量存在,其它组织中有少量分布.目前研究表明,PrPC分子结构具有重要的生理功能之外,还与神经系统疾病和肿瘤发生等相关.本文重点阐述了PrPC的分子结构、组织分布及其相关疾病研究进展.