人神经营养因子3基因的分子克隆、表达及其产物的生物活性鉴定

以正常中国人血淋巴细胞染色体DNA为模板,PCR扩增出神经营养因子3（NT3）编码基因。将所得基因片段重组于M13噬菌体载体,筛选得到含中国人NT3基因的克隆。采用单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列,该序列与国外文献所报道的完全一臻。将NT3编码基因亚克隆于杆状病毒表达载体,以在大肠杆菌内转座后的重组Bacmid大分子DNA转染悬浮培养的昆虫细胞后,在培养上清中检测到大量成熟型的NT3,后者对人神经母细胞瘤SH－SY5Y－T3具有较强的促进神经突起生长的作用,其生物学效应可被抗人NT3多克隆抗体所阻断。     

中国人β神经生长因子基因的分子克隆,序列分析及其在哺乳…

以正常人血淋巴细胞染色体ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出短体前β神经生长因子编码基因。将所得基因片段重组于Ｍ１３噬菌体载体，筛选得到含中国人ｐｒｅｐｒｏ－β－ＮＧＦ基因的克隆。采用Ｓａｎｇｅｒ单链末端终止法测出其全部的核苷酸序列，该序列与国外文献所报道的仅有一个碱基不同。将该基因亚克隆于真核表达载体ｐＥＶ１，经转染哺乳动物细胞ＢＨＫ后，在培养上清中检测到了成熟型β－ＮＧＦ。     

过敏性紫癜患儿血小板表面黏附分子CD62P和GPⅡb/Ⅲa表达水平的变化

目的 了解过敏性紫癜(HSP)患儿血小板表面黏附分子CD62P、GPⅡb/Ⅲa的表达情况,探讨其在HSP发病机制中的作用.方法 选择2006年3～11月我院收治的29例HSP患儿,选择同期27例外科非感染性疾病患儿作为对照,应用流式细胞仪检测外周血小板黏附分子CD62P、GPⅡb/Ⅲa的水平.结果 与对照组比较,HSP组血小板GPⅡb/Ⅲa表达水平为(26.30±10.25)%,比对照组的(20.67±7.80)%明显增高(P＜0.05),且HSP肾炎者[(29.43±10.10)%]明显高于HSP非肾炎者[(21.18±8.72)%,P＜0.05];HSP组与对照组CD62P分子的表达水平分别为(1.33±0.40)%和(1.24±0.41)%.两组比较无显著性差异(P=0.43).结论 HSP患儿血小板GPⅡb/Ⅲa表达增加,尤以合并肾脏损害时明显.血小板的异常活化参与了HSP、过敏性紫癜肾炎(HSPN)发病的病理生理过程.     

半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶荧光定量测定及保存条件对酶活性的影响

目的探讨荧光定量测定导致经典型半乳糖血症的半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(GALT)的方法,以及不同保存条件对酶活性的影响。方法选取来本院就诊的半乳糖血症患儿及其父母为研究对象,随机选取健康体检儿童作为对照,采集肝素抗凝血,用定量荧光法测定GALT活性,并观察不同保存温度和不同时间的GALT活性的变化。结果本方法表明酶反应1hr时可以分辨出完全失活型和杂合子,诊断出75%的半乳糖血症患儿,并检测出4例杂合子。同时发现随着时间的推移GALT活性在下降,室温影响最大。结论本方法简单,准确,快捷,费用低廉适合于半乳糖血症的诊断和杂合子的检出,但要注意高温和保存时间对样品的影响。本法也适合于新生儿大规模筛查和孕妇杂合子的检出。     

ITK蛋白调节小鼠脾淋巴细胞增殖分化的研究

目的 应用RNA干扰技术特异性抑制Itk基因的表达,观察Itk蛋白在淋巴细胞增殖和相应免疫因子合成分泌中的作用,进行Itk作为药物靶标的确认.方法 设计合成针对Itk基因的siRNA,将siRNA电转染至小鼠脾淋巴细胞,Western Blot检测Itk蛋白的表达、MTS方法检测细胞增殖率、ELISA方法检测细胞因子的含量.结果 实验组hk-siRNA在细胞水平上有效抑制了Itk蛋白的表达;Itk受抑制后细胞增殖率与对照组相比明显降低,差异有统计学意义,P<0.05;细胞因子IL-2,IL-4,IL-5,IFN-γ的分泌水平下降,P<0.05.结论 Itk表达受抑制后有效降低脾淋巴细胞的增殖率及细胞因子分泌的减少,研究验证了Itk在细胞增殖和炎性细胞因子分泌方面的重要免疫调节作用,为将其作为药物的靶基因提供实验依据.     

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目的探讨哮喘患儿血清总免疫球蛋白E(IgE)及特异性免疫球蛋白E(SIgE)之间的关系,验证血清总IgE(TIgE)水平是否直接依赖于环境中占优势的变应原所诱导的SIgE(SIgE)升高而升高的观点。方法收集2007年1月至2010年6月首都儿科研究所附属北京儿童医院门诊及住院的哮喘、咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿219例,年龄3～16岁,平均(6.5±3.3)岁;其中男165例,女54例。应用荧光酶联免疫方法,进行混合真菌(mx1)、粉尘螨(d1)、户尘螨(d2)、猫毛(e1)、狗毛(e5)、艾蒿(w6)血清SIgE抗体和TIgE的测定。结果 219例患儿中SIgE阳性率分别是mx1:45.7%、d1:32%、d2:31.5%、e1:25.1%、e5:18.7%、w6:21.5%,中重度患儿的SIgE(≥50U/mL)阳性比率是mx1:14.16%、d1:12.79%、d2:15.53%、e1:8.22%、e5:1.14%、w6:2.74%,(1)mx1、d1、d2、e1、e5、w6血清SIgE抗体对TIgE的升高有显著意义,均为(r=0.000,P<0.01)。(2)本值是以200为分界值,以TIgE≥20...     

脊髓性肌萎缩症诊治进展

脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)属常染色体隐性遗传神经退行性病变,是由SMN1基因的纯和缺失或突变所致,SMN1基因存在于染色体5q11-5q13区.SMA疾病仅次于囊泡纤维症居于第二位的遗传性致死性疾病,婴儿发病率为1∶6000到1∶10 000之间,每40～60人中有1位杂合子携带者[1].本文针对目前SMA的治疗作一综述,以为SMA的研究提供帮助.     

甲基丙二酸血症患儿mut基因两个新遗传突变的发现和鉴证

目的研究甲基丙二酸血症患儿甲基丙二酰辅酶A变位酶基因（mut）变异，鉴证和分析突变位点。方法通过聚合酶链反应（PCR）对14例患儿、部分直系亲属及健康对照的mut基因外显子进行扩增和测序。采用限制性片段长度多态性方法进行变异位点鉴证。利用软件对甲基丙二酰辅酶A变位酶蛋白三维结构进行模拟分析。结果在例1的mut基因第3号外显子，发现D147E（cDNA517T→A）和244insL（cDNA805insTT）两处杂合突变，分别来自例1的母亲和父亲。D147E处于保守氨基酸区域，244insL移码突变导致终止密码子提前出现。结论中国甲基丙二酸血症患儿mut基因出现两个新的遗传突变D147E和244insL。