一起霍乱疫情分离株的耐药性和分子流行病学分析

目的对2017年北京市房山区一起霍乱疫情的O1群霍乱弧菌的分子流行病学特征和耐药性进行分析。方法采集患者和有关人员及外环境(包括食物)样本109件,用实时荧光PCR检测碱性蛋白胨水增菌液中O1/O139群霍乱弧菌特异性基因;同时按常规法分离培养鉴定;对鉴定的阳性菌株用实时荧光PCR检测霍乱弧菌CTX基因,用微量肉汤稀释法进行20种药物敏感试验,用Not I和SfiⅠ限制性内切酶进行脉冲场凝胶电泳实验和聚类分析。结果 109件样本增菌液O1群霍乱弧菌特异性基因阳性率19. 27%(21/109,患者、密切接触者中家属和就餐地厨师肛拭子各1件阳性,就餐地后厨外环境样本18件阳性);常规培养鉴定O1群小川型霍乱弧菌阳性率5. 50%(6/109,患者和就餐地厨师肛拭子各检出1株,就餐地后厨外环境涂抹检出4株); 6株O1群小川型霍乱弧菌,霍乱CTX基因均阴性,对20种抗生素中12种100%敏感,对头孢唑林100%耐药,PFGE分子分型条带具有一致性。结论该起霍乱疫情的病原为O1群小川型非产毒株; PFGE分子分型溯源表明疫情与厨师有关;应关注霍乱疫情菌株的耐药监测。     

我国食品来源金黄色葡萄球菌种群结构分析

目的 了解我国食源性金黄色葡萄球菌（金葡菌）的种群结构。方法 通过全基因组测序方法对2006-2020年我国16个省份收集的763株食源性金葡菌进行多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A编码基因（spa）和葡萄球菌染色体mec基因盒（SCCmec）分型，使用BioNumerics 7.5软件创建基于ST类型的最小生成树。国外进口食品分离到的金葡菌31株被纳入基因组系统发育树的构建。结果 763株金葡菌共鉴定出90个ST型和160个spa型别，其中20种为新ST型别。72个（72/90，80.0%）ST型属于22个克隆群，其中主要型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25，占82.44%（629/763）。其中优势克隆群中ST型和spa型别随着时间的变化呈多态性变化。耐甲氧西林金葡菌（MRSA）的阳性率为7.60%，共鉴定出7种SCCmec型别，以ST59-t437-Ⅳa（17.24%，10/58）、ST239-t030-Ⅲ（12.07%，7/58）、ST59-t437-Ⅴb（8.62%，5/58）、ST338-t437-Ⅴb（6.90%，4/58）和ST338-t441-Ⅴb（6.90%，4/58）为主。本研究分离株在系统发育树上被分为2个种群分支，命名为Clade1和Clade2，相同克隆群、ST型和spa型别的菌株呈聚集分布。Clade1全部为CC7甲氧西林敏感菌株，Clade2中包括21种克隆群和所有MRSA菌株，MRSA菌株按照SCCmec和ST型呈聚集分布。CC398、CC7、CC30、CC12和CC188中的国外分离株与我国分离株进化关系较远。结论 本研究中食源性菌株主要优势克隆群型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25，与既往报道的我国医院、社区感染和食物中毒的克隆群存在重叠现象，这提示食品作为病原体社区传播和食物中毒的载体，需高度关注。     

环境水系分离嗜肺军团菌脉冲场凝胶电泳的分型研究

目的初步揭示中国环境水系嗜肺军团菌分离株的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型特征。方法分别以SfiI和AscI为限制性内切酶,使用PFGE对菌株进行分型和聚类分析。结果单独使用SfiI、AscI和联合使用两种内切酶分别将78株嗜肺军团菌分为47、48和60个型别,分型得到的Simpson差异指数分别为0.9833、0.9817和0.9933;同一水系中分离的菌株既有带型相同或者相似者,又有带型差异较大者;相同型别的菌株可在同一水系中跨年份存在。结论PFGE对嗜肺军团菌具有很好的分辨率;多个克隆系的菌株可以在同一水系中共存,某些克隆系的菌株可以跨年份存在;环境水系中存在优势克隆系,这些优势克隆系应该在今后军团菌的监测中引起注意。     

血清杀菌试验和酶联免疫吸附试验测定C群脑膜炎奈瑟菌血清抗体滴度比较

目的 比较血清杀菌试验(SBA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定两种C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)疫苗免疫后血清抗体滴度的差异.方法 采用SBA测定75名未免疫健康成年人(40～70岁)血清、143名3～8月龄婴儿及194名3～5岁儿童NmA和C群结合疫苗或A+C群多糖疫苗免疫前后血清中Nm杀菌抗体水平,然后用ELISA测定相应血清的Nm特异性IgG含量,并利用线性相关与回归分析两种测定结果的相关性.结果 未免疫健康成年人血清中Nm杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较高(r=0.814 33,P＜0.001)；3～8月龄婴儿和3～5岁儿童接种结合/多糖疫苗前,Nm杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间相关性较差(3～8月龄:r=0.140 64,P＞0.l00/r=0.2899,P＜0.05;3 ～5岁:r=0.540 40,P＜0.05/r=0194 36,P＜0.05),接种1剂结合疫苗后,杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较好(r=0.809 38,P＜0.001和r=0.837 23,P＜0.001)；接种多糖疫苗后,杀菌抗体水平和特异性IgG含量之间的相关性较差(r＜0.500 00).结论 健康成年人血清和结合疫苗免疫后的婴幼儿血清中特异性C群Nm IgG含量可以间接反映血清杀菌抗体水平,ELISA方法可以替代SBA.但ELISA检测方法不适用于3～8月龄婴儿多糖疫苗免疫后的效果评价.     

2006～2010年湖北省流行性脑脊髓膜炎病原学和血清学监测分析

目的分析湖北省2006～2010年流行性脑脊髓膜炎(流脑)病原学和血清学监测结果,掌握湖北省流脑的变迁规律。方法对2006～2010年分离的脑膜炎奈瑟菌(Nm)菌株进行生化鉴定、血清学分型和药物敏感性检测,并采用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法进行分子分型;对所有的脑脊液和血液标本进行Nm种属特异性荧光PCR检测;对健康人群血清,运用血清杀菌试验(SBA)进行C群杀菌力抗体水平测定。结果 2007年湖北省Nm以B群为主,2008～2010年以来C群为优势菌群;对青霉素等6种抗生素均敏感,但对环丙沙星、米诺环素、萘啶酸、复方新诺明4种抗生素出现多重耐药;分子分型结果显示,湖北省B群Nm菌株具有高度的遗传多样性,未发现明显优势的克隆群,C群优势病原株为ST-4821型。RT-PCR检测(988份脑脊液)确诊29例流脑病例,其中C群22例,A群2例、B群5例。C群杀菌力总保护率(抗体滴度≥1︰8)为38.10%。结论湖北省流脑菌株发生了从B群散发到C群流行的变迁,人群对C群Nm的免疫力不足。     

霍乱弧菌的分子分型方法

在霍乱流行和暴发调查中,追溯传染源和调查传播途径往往需要对霍乱弧菌进行分型分析.对霍乱弧菌进行血清分型和噬菌体一生物分型,是得到菌株基本信息不可缺少的手段.如果想要揭示菌株在分子水平上的变异和进化规律,则需要进行分子分型分析.本研究对霍乱弧菌的各种分子分型方法进行逐一介绍并加以综合比较.     

血清群6肺炎链球菌分子分型与耐药特征研究

目的 比较不同方法鉴别血清群6肺炎链球菌不同血清型的能力,了解血清群6肺炎链球菌的耐药性与分子特征。 方法 采用荚膜肿胀分型方法与聚合酶链反应(PCR)分型方法鉴别33株血清群6肺炎链球菌的血清型及相应的基因型;检测菌株对6种常用抗生素的敏感性;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析不同血清型菌株的基因组特征。 结果 PCR分型方法与传统的血清学分型方法结果一致。全部菌株对阿奇霉素均耐药,对利福平及左氧氟沙星均敏感;6B型菌株呈现较高的多重耐药特征。根据PFGE带型特征,所有菌株可分为2个簇,6C菌株之间、6B菌株之间带型呈现较高相似性。 结论 PCR分型方法可用于鉴别血清群6菌株的不同血清型;菌株耐药情况严重,且大多数菌株呈多重耐药特征;PFGE对鉴别肺炎链球菌不同菌株间的差异有较高的分辨率。     

脉冲场凝胶电泳用于军团菌分型能力的评价

目的 评价脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术用于军团菌属不同种(Legionella species)以及不同血清型菌株的分型能力。 方法 选用117株10个嗜肺军团菌血清型,30种非嗜肺军团菌的参考菌株和我国环境分离菌株,采用AscⅠ内切酶酶切,进行PFGE。从电泳条带的数量和分布、PFGE的分型力、分辨率和与流行病学资料的相关性等4个方面评价PFGE用于军团菌属不同血清型的嗜肺军团菌以及30个非嗜肺军团菌种分型的能力。 结果 通过AscⅠ酶切、PFGE电泳后,所有血清型的嗜肺军团菌和17种非嗜肺军团菌能获得条带数量适合、且在电泳图谱上条带分布均匀,而另外13种非嗜肺军团菌株条带集中在小分量片段;PFGE能对所有117株选入实验的军团菌进行分析,分型力为100%;AscⅠ-PFGE将43株不同来源的各血清型嗜肺军团菌分成41个不同的型,分型D值为0.9978,将30株非嗜肺军团各自分为不同的型;AscⅠ-PFGE可以将相同来源的嗜肺军团菌和L. micdadei军团菌分为相同或者相似的型,成簇聚类。 结论 AscⅠ-PFGE对所有血清型的嗜肺军团菌和17种非嗜肺军团菌进行PFGE分型, 能够获得高质量的电泳图谱,可成功用于嗜肺军团菌的流行病学调查。     

高毒力肺炎克雷伯菌毒力和耐药机制研究进展

肺炎克雷伯菌属于克雷伯菌属中需氧革兰阴性杆菌，是社区获得性感染和院内感染常见致病菌之一。 高毒力肺炎克雷伯菌（hypervirulent Klebsiella pneumoniae, hvKP）是从传统肺炎克雷伯菌中分离出来的具有高毒力、高黏液性的侵袭性细菌，当机体免疫功能降低时，可引起肺炎、肝脓肿、泌尿系统感染和血流感染，严重时还可导致脓毒血症等危急重症，治疗难度大且病死率高。 为更好地了解hvKP特性，对其流行现状、高毒力相关因子、耐药以及相关机制等进行综述，以助于临床更好地预防和控制 hvKP感染。     

PulseNet China数据库在安徽省4起霍乱 疫情溯源中的应用

目的通过PulseNetChina数据库对安徽省2012年4起霍乱疫情进行溯源分析。 方法应用PCR扩增霍乱弧菌CT和TCP毒力基因，并利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行分 型，使用BioNumericsV4．0软件对电泳结果进行聚类分析，并与PulseNet China数据库进行比对。 结果16株菌经PCR扩增，cT和TCP基因均出现目的条带。菌株经Not I和踬I酶切，PFGE聚 类分析显示，13株菌的同源性>98％。其中2株菌与PulseNetChina数据库中湖南、四川、浙江、上 海、湖北5省(市)同年霍乱疫情菌株同源性达100％。结论安徽省2012年4起霍乱疫情均源自 食用霍乱弧菌感染甲鱼。PulseNet China数据库能有效、快速地对霍乱疫情溯源和预警。