福建省肺非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定

目的 对2005-2011年间,福建省福州市胸科医院分离获得的非结核分枝杆菌临床菌株进行菌种鉴定.方法 分别使用传统鉴别培养基法和多位点PCR、hsp65-PRA与rpoB-PRA,以及hsp65、rpoB、16s rRNA和ITS基因测序等分子生物学方法,对全部菌株进行菌种鉴定.结果 450株被初步鉴定为非结核分枝杆菌的临床分离菌株中,有45株被鉴定为结核分枝杆菌,其余405株被鉴定为23种不同的非结核分枝杆菌和1株支气管戈登菌.结论 在该地区有多种非结核分枝杆菌传播和流行,其中,6种非结核分枝杆菌和支气管戈登菌为在福建省内首次发现.     

西藏藏族结核分枝杆菌临床分离株的MIRU-VNTR基因多态性分析与评价

目的 了解西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌24位点MIRU-VNTR的基因多态性及其评价.方法 应用欧盟推荐的24位点MIRU-VNTR分型方法,将本次分型结果与MIRU-VNTRplus数据库进行比对,并应用BioNumerics5.0软件进行聚类分析.结果 577株结核分枝杆菌分为347种基因型,其中299株分为69个基因簇,另278株表现为独特的基因型.MIRU31、Qub11b2、Qub26、Qub4156c、Mtub21、MIRU20和MIRU26七个位点对西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌临床分离株的分辨力较高,另17个位点的分辨力较低,其中MIRU24位点分辨率为0.结论 西藏地区藏族人群中结核分枝杆菌MIRU-VNTR分型具有良好的多态性,且该地区以现代型结核分枝杆菌为流行优势菌.     

中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析

目的克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据。方法结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段。将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析。利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性。并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,Western blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应。ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2%低于全菌蛋白的灵敏度92.8%(P0.001);特异性分别为73.3%、68.9%,差异无统计学意义(P=0.511)。在检测梅毒血清上特异性分别为83.3%、18.9%,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P0.001)。结论重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义。     

自贡市非结核分枝杆菌临床分离株的菌种鉴定结果分析

目的 对自贡市35株疑似非结核分枝杆菌（NTM）临床分离株进行菌种鉴定。方法 从自贡市各区（县）及市结核病防治获得的临床分枝杆菌分离株，通过罗氏培养基（L-J）、对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羧酸肼（TCH）鉴别培养基初步鉴定为NTM，再经多位点PCR方法确定为NTM后，对rpoB、hsp64及its基因进行测序及分析鉴定。结果 35株疑似NTM临床分离株，通过初步鉴别，多位点PCR，rpoB、hsp64及its基因测序及分析鉴别出32株NTM，分别为脓肿分枝杆菌（M. abscessus）11株、胞内分枝杆菌（M. intracellulare）7株、堪萨斯分枝杆菌（M. kansasii）5株、鸟分枝杆菌（M. avium）3株、脓毒分枝杆菌（M. septicum）1株、马赛分枝杆菌（M. masseillense）1株、戈登分枝杆菌（M. gordonae）2株、副瘰疬分枝杆菌（M. parascrofulaceum）1株和Mycobacterium peregrinum 1株。结论 抗酸染色阳性、PNB/TCH鉴定为NTM的临床分离株中包含不同种类的NTM，自贡市NTM肺病的病原种类较多，以快生长脓肿分枝杆菌为主，其次为慢生长不产色菌的胞内分枝杆菌和缓慢生长光产色菌的堪萨斯分枝杆菌。实验室应开展进一步菌种鉴定，以指导临床正确诊断和合理治疗。     

莱姆病螺旋体的转移感染和致病机制

本文主要就莱姆病螺旋体从蜱到宿主动物的转移感染以及在宿主体内存活并致病的机制进行了的阐述,包括螺旋体在蜱内定居以及感染宿主动物过程中蛋白的变化及作用;螺旋体在宿主体内致病的各种机制(病原体本身的作用、免疫逃避、细胞因子的作用、自身免疫)。     

流行性乙型脑炎预警指标体系研究

目的 建立流行性乙型脑炎(乙脑)预警指标体系。 方法 首先采用文献调研和专家会议法拟订乙脑预警指标体系初始框架和指标,然后应用德尔菲法确定预警指标和指标权重。 结果 建立了包括人群免疫水平、传播媒介、贮存宿主、社会因素及病例相关指标的5项一级预警指标及对应的10个二级预警指标。 结论 建立了适用于中国乙脑防控的预警指标体系,但需要利用历史疫情对该指标体系的信度和效度进行评价,并在实际应用中进一步完善。     

Trustline结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测试剂盒(胶体金法)的临床应用评价

目的 评价Trustline结核抗体IgG/IgM检测试剂盒临床应用效果。 方法 选用3家医院的1009份血清标本,其中628份为结核病患者血清(308例菌阳病例,320例菌阴病例);对照组381份非结核病血清。采用Trustline试剂盒及一种已上市的试剂盒(对照试剂盒)分别检测1009份血清,计算多项检测指标,从而评价试剂盒的检测效果。 结果 通过检测1009份临床血清标本, Trustline试剂盒检测血清抗体(IgG+IgM)的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、 Youden 指数分别为61.3%、79.8%、 83.3%、 55.6% 和0.411,对照试剂盒检测血清抗体(IgG) 的结果分别为53.7%、89.0%、88.9%、 53.8%和0.426。经统计分析表明Trustline试剂盒的灵敏度显著优于对照试剂盒(P0.01),特异度低于对照试剂盒(P0.01),但阳性诊断效率和阴性诊断效率方面差异无统计学意义,Youden指数相接近。 进一步分析显示Trustline试剂盒对菌阳样本及菌阴样本的检出率分别77.6%和44.7%,对照试剂盒则为67.9%和40.0%,对菌阳样本检出率的差异有统计学意义。检测1009份标本,Trustline试剂盒共得IgM阳性35例,其中结核组阳性30例(4.8%),非结核组阳性5例(1.3%)。 结论 Trustline试剂盒检测结核抗体的灵敏度显著优于对照结核抗体试剂盒,并可同时用于检测IgG/IgM抗体,可以应用于结核病的快速诊断。     

针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究

目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果。方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照。结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49%(41/59)、100%(51/51),符合度为83.63%;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56%(40/41),98.55%(68/69),符合度达98.18%。结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度。     

耐多药结核分枝杆菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性研究

目的 研究耐多药结核分枝菌中embB基因突变与乙胺丁醇耐药的相关性. 方法 比例法检测84株耐多药结核分枝杆菌的乙胺丁醇(EMB)耐药性,基因测序检测embB基因的突变,2检验分析二者之间的相关性. 结果 84株耐多药结核分枝杆菌中有43株(51.2%)对EMB耐药,41株(48.8%)对EMB敏感,57株耐多药菌株(67.9%)的embB基因发生突变.在43株EMB耐药菌株中,embB基因突变的菌株为40株(93.0%),而41株EMB敏感菌株中,embB基因突变的菌株为17株(41.5%),embB基因在耐药菌株中的突变频率远高于敏感菌株(2=25.58,P=0.00).embB306是最常见的突变位点,其在耐药菌株的突变率也高于敏感菌株(2=12.37,P=0.00),embB基因和embB306位点检测EMB耐药的敏感度、特异度和准确性分别为93.0%和65.1%,58.5%和73.2%,76.2%和69.0%. 结论 EMB耐药的产生与embB基因和embB306突变有关,二者用于检测EMB耐药有一定的参考意义.     

574例结核病病例细菌学检验结果分析

目的了解西安市分支杆菌病原菌感染的流行状况,为制定结核病防治措施提供科学依据。方法采用流行病学抽样调查方法,选取陕西省西安市为调查点,于2005年5～8月对其13个区级结防所就诊的所有病人进行调查,每个病人收集三份痰标本。采用痰涂片和痰培养法检测病人痰标本,鉴别培养基培养法鉴定分支杆菌菌种。结果574位病人,涂片阳性113人,阳性率为19.69%,培养阳性病人150人,阳性率26.13%。后者明显高于前者,两者之间的差异具有显著统计学意义(!2=360.50,P<0.01),两者联合阳性率为26.83%。从137例病例痰标本中分离到251株分支杆菌菌株,结核分支杆菌、牛分支杆菌、非结核分支杆菌(NTM)和混合感染的比例分别是67.88%、5.84%、11.68%、14.60%。结论细菌培养法可明显提高阳性率;NTM感染流行状况应予以足够的重视。