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  1990年   4篇
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1.
子痫前期(pre-eclampsia, PE)是一种常见的严重妊娠并发症,其病因和发病机制至今尚未完全阐明,目前的研究表明泛素化和类泛素化修饰在PE发生发展中起着重要作用。E3泛素连接酶作为泛素化修饰的关键酶之一,对PE的影响至关重要。而在与泛素化修饰密切相关的类泛素化修饰中,小泛素蛋白样修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier proteins, SUMO)显著地影响了PE的进展。本综述将着重讨论E3泛素连接酶和小泛素蛋白样修饰蛋白在PE发病机制中的作用。  相似文献   
2.
目的 明确泛素E3连接酶(DTL)对多发性骨髓瘤细胞增殖、克隆形成的影响,并探讨其机制。方法 提取34例多发性骨髓瘤患者骨髓中CD138+细胞后,以14例健康志愿者骨髓单个核细胞为对照,实时定量PCR检测DTL在mRNA水平的变化,并选取12例骨髓瘤患者和2例对照,Western blot检测DTL在蛋白水平的变化。同时,人骨髓瘤细胞系RPMI8226分为对照(CON)与DTL敲低(DTL-shRNA)组,感染10 感染复数 CON与DTL-shRNA病毒48 h,使用流式细胞仪确认慢病毒的感染效率、实时定量基因扩增荧光检测系统和Western blot确认在mRNA和蛋白水平的敲低效率,使用细胞增殖及毒性检测试剂盒检测细胞在随后的0、24、48、72、96 h的细胞数量变化,将CON与DTL-shRNA细胞培养于半固体培养基中,10 d后倒置相差显微镜观察大于50个细胞的克隆数量,并使用膜联蛋白 V/碘化丙啶双染法检测凋亡的变化,碘化丙啶染色检测细胞周期的变化。使用Western blot检测核因子-κB(NF-κB)通路中P65和抑制因子κBα(IκBα)磷酸化水平的改变、凝胶迁移实验检测NF-κB转录活性的变化。结果 健康志愿者骨髓单个核细胞与骨髓瘤患者CD138+细胞中,DTL的表达量分别为1.00±0.12 和 9.36±3.71(t=3.65,P=0.0024),DTL在骨髓瘤CD138+细胞中蛋白水平同样呈现过表达。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA病毒48 h后,绿色荧光蛋白阳性细胞的比率为90%,CON组与DTL-shRNA组DTL在mRNA水平相对表达量分别为1.00±0.01 和 0.21±0.04(t=33.19,P<0.0001),在蛋白水平 DTL的相对表达量分别为0.52±0.13 和 0.11±0.02(t=5.399,P=0.0057)。CCK8检测CON组与DTL-shRNA组细胞增殖后显示0、24、48、72、96 h的细胞增殖倍数分别为1.00±0.03 比 1.00±0.02、2.19±0.28 比 1.47±0.13、3.50±0.14 比 2.24±0.19、5.43±0.41 比 3.08±0.14、7.42±0.17 比 4.29±013(F=24.58,P=0.001)。检测CON组与DTL-shRNA组的克隆形成后显示,DTL-shRNA组大于50个细胞的克隆不可见,CON与DTL-shRNA克隆形成数量分别为76±4比0(P<0.01),在细胞周期中,CON与DTL-shRNA组G1期细胞比例分别为(28.61±8.64)%比(57.25±10.37)%(t=3.675,P=0.0213),细胞凋亡中,CON与DTL-shRNA组膜联蛋白 V+细胞比例为(3.21±0.89)%比(34.71±18.68)%(t=2.895,P=0.0443)。RPMI8226感染CON与DTL-shRNA慢病毒48 h后,CON与DTL-shRNA 磷酸化P65相对表达量分别为1.52±0.14 和 0.82±0.11(t=6.81,P=0.0024),而P65的表达分别为0.25±0.04 和 0.24±0.08(t=0.19,P=0.85),差异无统计学意义,CON与DTL-shRNA 磷酸化IκBα的相对表达量分别为0.19±0.03 和 0.13±0.02(t=2.882,P=0.0449),而IκBα相对表达量分别为0.22±0.05 和1.01±0.06(t=17.52,P<0.0001)。凝胶迁移实验检测DTL-shRNA NF-κB转录活性进一步确定了DTL的下调抑制了NF-κB转录活性。结论 DTL在多发性骨髓瘤细胞中高表达,且DTL的下调抑制了细胞增殖,阻断了克隆形成,促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,而DTL对骨髓瘤细胞生物学功能的影响与NF-κB通路的改变相关。  相似文献   
3.
4.
5.
6.
目的分析β-转导重复相容蛋白(β-TrCP1)和疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶(HAUSP)对胶质母细胞瘤增殖和侵袭能力以及表观遗传调控因子UHRF1表达的影响。 方法胶质母细胞瘤U87细胞内分别转染N1空质粒(NC组)和β-TrCP1-N1过表达质粒(β-TrCP1组),以及分别转染无意义siRNA序列(siRNA阴性对照,si-NC组)和靶向HAUSP mRNA的siRNA(si-HAUSP组)。RT-qPCR法和Western blot法分别检测各组细胞中β-TRCP1、HAUSP和UHRF1的mRNA以及蛋白水平。CCK8法和基质胶-transwell侵袭实验分别检测各组细胞的增殖和侵袭能力。 结果质粒转染后第4天和第5天,β-TrCP1组细胞的增殖能力显著低于同时期的NC组细胞(均P<0.05);转染第4天,β-TrCP1组穿过基质胶的细胞数显著低于NC组细胞(P<0.05)。转染siRNA后第4天和第5天,si-HAUSP组细胞的增殖能力显著低于同时期si-NC组细胞(P<0.05);转染si-HAUSP 4 d,si-HAUSP组穿过基质胶的细胞数显著低于si-NC组(P<0.05)。此外,过表达β-TrCP1和敲低HAUSP均不影响UHRF1的mRNA水平(均P>0.05),但均可降低UHRF1蛋白水平(均P<0.05)。 结论过表达β-TrCP1和敲低HAUSP均可抑制胶质母细胞瘤U87细胞的增殖和侵袭能力,同时降低UHRF1蛋白水平。UHRF1蛋白水平改变可能是β-TrCP1和HAUSP影响胶质母细胞瘤增殖和侵袭能力的机制之一。  相似文献   
7.
8.
《药学学报(英文版)》2020,10(8):1476-1491
Ubiquitin specific peptidase 28 (USP28) is closely associated to the occurrence and development of various malignancies, and thus has been validated as a promising therapeutic target for cancer therapy. To date, only few USP28 inhibitors with moderate inhibitory activity have been reported, highly potent and selective USP28 inhibitors with new chemotypes remain to be discovered for pathologically investigating the roles of deubiquitinase. In this current study, we reported the synthesis and biological evaluation of new [1,2,3]triazolo[4,5-d]pyrimidine derivatives as potent USP28 inhibitors. Especially, compound 19 potently inhibited USP28 (IC50 = 1.10 ± 0.02 μmol/L, Kd = 40 nmol/L), showing selectivity over USP7 and LSD1 (IC50 > 100 μmol/L). Compound 19 was cellularly engaged to USP28 in gastric cancer cells. Compound 19 reversibly bound to USP28 and directly affected its protein levels, thus inhibiting the proliferation, cell cycle at S phase, and epithelial-mesenchymal transition (EMT) progression in gastric cancer cell lines. Docking studies were performed to rationalize the potency of compound 19. Collectively, compound 19 could serve as a new tool compound for the development of new USP28 inhibitors for exploring the roles of deubiquitinase in cancers.  相似文献   
9.
文题释义: 蛋白聚物:在某些生理或是病理生理情况下,蛋白质折叠异常,暴露出本应包裹在蛋白中心的疏水核团,暴露在外的疏水核团之间容易相互吸引,形成的大分子、具有细胞毒性的蛋白聚集物。 蛋白聚集体:蛋白聚集物被泛素标记,并通过组蛋白去乙酰化酶6经微管dynein蛋白运输至微管组织中心,被波形蛋白和角蛋白构成的笼状结构包裹,形成蛋白聚集体。蛋白聚集体的形成是对细胞的保护,一方面隔离储存了毒性的蛋白聚集物,以免攻击其他细胞器;另一方面是自噬降解的前提步骤,有助于毒性蛋白的降解。 背景:蛋白降解是运动诱导骨骼肌损伤的重要原因,大强度的运动会导致蛋白错误折叠,易形成蛋白聚集体,损害骨骼肌超微结构。 目的:初步探索运动诱导骨骼肌损伤中蛋白聚集尤其是结蛋白聚集体的发生,以期明确结蛋白聚集在运动诱导骨骼肌损伤中的作用。 方法:将64只成年雄性SD大鼠(购自北京维通利华实验技术有限公司)随机分为安静对照组(n=8)和运动组(n=56),运动组又按运动后时相分为0,3,6,12,24,48,72 h组,每组8只。运动组大鼠进行一次跑台下坡跑运动(-16°,16 m/min,90 min),分别在运动后的相应时刻取比目鱼肌,使用透视电子显微镜观察损伤发生程度,采用 Western Blot方法检测比目鱼肌难溶蛋白中泛素蛋白的表达,免疫荧光双标观察结蛋白聚集体的表达。实验获得北京体育大学运动科学实验伦理委员会批准(2016030A)。 结果与结论:①透射电镜显示一次大负荷离心运动后,大鼠比目鱼肌部分位置肌节变宽,Z线断裂,肌原纤维断裂、扭曲,其中运动后12 h损伤最为严重,于运动后72 h完全恢复;②Western Blot方法检测显示一次大负荷离心运动后,骨骼肌中泛素蛋白表达总体呈先升高后降低的趋势,于运动后12 h达峰值,于运动后72 h恢复至安静对照组水平;③免疫荧光双标染色显示一次大负荷离心运动后,骨骼肌结蛋白聚集体表达总体上呈现先升高后降低的趋势,运动后12 h达到峰值,运动后24,48 h有所降低,72 h完全恢复安静对照组水平;④结果表明,结蛋白聚集可能是运动诱导骨骼肌损伤的原因之一。 ORCID: 0000-0002-6365-7822(高扬) 中国组织工程研究杂志出版内容重点:组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程  相似文献   
10.
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