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1.
组织工程中胶原基纳米骨复合材料的研制   总被引:71,自引:0,他引:71  
目的:依据仿生原理制备纳米骨框架材料。方法:以胶原分子为模板,调制钙磷盐在液相中沉积其上,得到矿化胶原基复合材料,并采用液相分离法与少量聚乳酸复合进一步制备成为三维多孔框架材料。分离成骨细胞并在三维框架材料上培养,用x-ray、衍射扫描电镜、透射电镜、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜进行观察和分析。结果:胶原基纳米晶钙磷盐复合材料的晶粒度较低,晶体极为细小,与天然骨类似;材料为多孔状,孔隙率较高;内部为典型的纤维束状结构,该纤维束有HA晶体的衍射图样,且具有[002]择优取向;成骨细胞可在其上贴附、生长和繁殖。结论:仿生制备的三维胶原基纳米骨框架材料,无论从结构还是性能上,都是骨组织工程中的优选材料之一。  相似文献
2.
组织工程骨在颅颌面骨缺损临床修复中的应用   总被引:57,自引:1,他引:56  
Chai G  Zhang Y  Liu W  Cui L  Cao YL 《Zhonghua yi xue za zhi》2003,83(19):1676-1681
目的 探索人自体骨髓基质干细胞(hBMS6C)为种子细胞的组织工程骨在治疗临床颅颌面骨缺损中的可行性。方法 自1999到2002年问,选择颅颌面骨缺损病11例(外伤性颅骨缺损4例,先天性梨状孔周围骨凹陷畸形7例)进行治疗研究。从患者髂前上棘穿刺取骨髓,密度梯度离心法分离hBMSC,经体外成骨诱导和扩增至第3代。将诱导的hBMSC,与部分脱钙骨(partly demineralized bone mattix,pDBM)复合,并于体外培养一周后,手术回植骨缺损区。选择3例梨状孔凹陷畸形患者,在凹陷明显侧植入hBMSC/pDBM复合物,对侧轻度凹陷区仅植入单纯pDBM。分别于术后1,3,6,12,24,48,50个月进行临床外形和三维CT检查随访。2例患者在Ⅱ期手术时,取少量植入物活检,行组织学(HE染色),免疫组织化学(骨桥蛋白、骨粘连蛋白)检测。结果 患者三维CT检查结果示术后3~6月能形成组织工程化骨,并修复骨组织缺损。术后1~2.5年的随访表明组织工程骨稳定存在,无明显骨吸收现象,临床治疗效果稳定。组织工程骨活检标本HE染色显示其组织学结构与正常松质骨相同,并有典型软骨内化骨现象。免疫组织化学显示有骨桥蛋白、骨粘连蛋白阳性表达。而植入的单纯部分脱钙骨于术后3~6月吸收,组织学显示为脱钙骨降解碎片和纤维组织的混合物。结论 以自体hBMSC为种子细胞,利用组织工程技术可在人体内形成稳定的工程化骨组织,并临床修复颅颌面骨组织缺损。这项研究的结果为组织工程骨的临床大规模应用奠定了坚实的基础。  相似文献
3.
骨髓间充质干细胞的分离与培养   总被引:43,自引:4,他引:39  
目的 摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件 ,并观察其部分生物学活性。方法 采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法 ,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响 ,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果 以选用 4~ 2 4h贴壁的有核细胞 ,加入 5 %~ 1 0 %胎牛血清、种植密度(4~ 8)× 1 0 4个 /ml的培养条件为最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性 ;其形态呈梭状 ,具有快速增殖的能力 ;培养细胞在 3~ 4d进入对数生长期 ,随后进入平台期 ,分裂相细胞明显减少 ;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状 ,2~1 0代的细胞呈均质状 ;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论 建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件 ,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性 ,为进一步深入研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础  相似文献
4.
纳米结构组织工程支架材料   总被引:23,自引:0,他引:23  
组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的粘附与生长有很重要的影响,表层具有纳米结构的支架材料可以改善细胞对材料的粘附性和生物相容性。本文主要介绍了纳米生物材料对组织工程发展的影响及纳米生物材料的一些制备方法,如自组装技术和模板技术。  相似文献
5.
人骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性   总被引:22,自引:8,他引:14  
目的 探讨在骨组织工程研究中作为种子细胞来源之一的骨髓基质干细胞体外培养后的生物学特性 .方法 获取人胎儿骨髓于含 10 0 m L· L- 1 胎牛血清的 DMEM培养液中培养 ;将骨髓基质干细胞向成骨细胞方向进行诱导 ,2~ 3wk后行钙化结节 Vonkossa和碱性磷酸酶 (AL P)钙钴染色 ;同时绘制诱导前后细胞的生长曲线、测定细胞内 AL P含量变化 ,并做统计学分析 .结果 骨髓基质干细胞经诱导后增殖速度变慢 ,但合成 AL P的能力明显增强 (P<0 .0 5 ) ;Vonkos-sa和 AL P染色呈阳性 .结论 骨髓基质干细胞取材方便 ,易于诱导为成骨细胞 ,作为骨组织工程的种子细胞应用前景良好 .  相似文献
6.
人间充质干细胞体外成骨诱导培养及其生物学特性变化   总被引:20,自引:1,他引:19  
目的 确定人间充质干细胞 (MSCS)体外扩增培养、向成骨细胞表型转化的方法 ,了解其生物学特性变化。方法 分离人骨髓细胞 ,按不同种植密度、首次换液时间进行原代培养 ,对传代培养细胞用化学药物或生长因子进行成骨诱导培养 ,并检测成骨细胞表型、生长曲线、贴壁率。结果 人MSCS 原代培养种植细胞密度为 1× 10 5~ 3× 10 5/cm2 ,48h后半量换液 ,以后每 3d全量换液的方法较合理。经化学药物 (如地塞米松、β 甘油磷酸、维生素C)或生长因子 (rh BMP2 、BMPS)作用后 ,MSCS 表达碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和骨钙素 ,细胞增殖速度减慢 ,贴壁率略降低。未诱导MSCS 形成细胞团后 ,可自动分化表达碱性磷酸酶活性。结论 合理的人MSCS 培养方法及可靠的诱导条件 ,可为体外构建组织工程化骨提供自体种子细胞。  相似文献
7.
Reconstruction of rabbit urethra using urethral extracellular matrix   总被引:18,自引:0,他引:18       下载免费PDF全文
Background Urethral reconstruction for both congenital and acquired etiologies remains a challenge for most urologic surgeons. Tissue engineering has been proposed as a strategy for urethral reconstruction. The purpose of this study was to determine whether a naturally derived extracellular matrix substitute developed for urethral reconstruction would be suitable for urethral repair in an animal model.Methods A urethral segmental defect was created in 20 male rabbits. The urethral extracellular matrix, obtained and processed from rabbit urethral tissue, was trimmed and transplanted to repair the urethral defect. Then, the regenerated segment was studied histologically by haematoxylin-eosin staining and Van Gieson staining at 10 days, 3 weeks, 6 weeks, and 24 weeks postoperation.Retrograde urethrography was used to evaluate the function of the regenerated urethras of 4 rabbits 10 and 24 weeks after the operation. The urodynamics of 4 rabbits from the experimental group and control group I were assessed and compared. In addition, 4 experimental group rabbits were examined by a urethroscope 24 weeks after the operation.Results At 10 days after operation, epithelial cells had migrated from each side, and small vessels were observed in the extracellular matrix. The matrix and adjacent areas of the host tissue were infiltrated with inflammatory cells. The epithelium covered the extracellular matrix fully at 3 weeks postoperation. Well-formed smooth-muscle cells were first confirmed after 6 weeks, at which point the inflammatory cells had disappeared. At 24 weeks postoperation, the regenerated tissue was equivalent to the normal urethra. Urethrography and urodynamic evaluations showed that there was no difference between normal tissue and regenerated tissue.Conclusions Urethral extracellular matrix appears to be a useful material for urethral repair in rabbits. The matrix can be processed easily and has good characteristics for tissue handling and urethral function.  相似文献
8.
以液态胶原为支架构建组织工程化心肌组织的实验研究   总被引:17,自引:1,他引:16  
目的 探索以液态胶原作为支架材料于体外构建组织工程化心肌组织。方法 将分离并培养的新生大鼠心肌细胞与添加了基质因子的液态Ⅰ型胶原混合,在环形槽中铸成环状心肌细胞/胶原条带。构建的条带在环形槽中培养7d后取出,在对其施加10%的静态拉伸的情况下,再培养7d。通过光学显微镜、常规HE染色、免疫组织化学染色和透射电镜观察等对构建的组织工程化心肌组织进行评价。结果 构建的工程化心肌组织在施加静态拉伸的第2天可观察到局部跳动的区域,随时间的延长跳动的区域逐渐增多,强度逐渐增大,并最终形成一致跳动。组织学和免疫组织化学染色研究结果显示,在构建的工程化心肌组织中,心肌细胞比较均匀地分布在整个条带中,且多数沿拉伸方向伸展,胞核呈长梭形,其形态类似于天然成熟心肌组织。透射电镜观察显示,条带中心肌细胞含有排列整齐的肌原纤维,并沿着细胞的长轴方向伸展,肌小节结构和Z带清晰可见。结论 用液态Ⅰ型胶原可以构建类似天然心肌组织的工程化心肌组织。  相似文献
9.
组织工程构建人工食管的初步实验研究   总被引:16,自引:1,他引:15  
目的:初步探讨组织工程制备可降解人工食管的可行性。方法:体外分离、培养、扩增新生牛食管上皮细胞,接种于海绵状胶原蛋白-壳聚糖膜上,然后移植入裸鼠背阔肌表面,通过组织学及扫描、透射电镜观察食管上皮细胞在体内外的增殖与分化情况。结果:培养的新生牛食管上皮细胞在胶原蛋白-壳聚糖膜表面生长良好,食管上皮细胞-胶原蛋白-壳聚糖膜复合物植入裸鼠背阔肌表面2周,食管上皮细胞可进一步分化至10层,术后4周胶原蛋白-壳聚糖膜已被降解吸收。结论:海绵状胶原蛋白-壳聚糖膜是组织工程构建可降解人工食管的优良基质材料。  相似文献
10.
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