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1.
[目的]研究强力霉素对糖尿病小鼠肌肉转染人胰岛素基因表达的调控作用。[方法]构建prTA—tet4-rhlNS质粒;以链脲佐茵素(streptozotocin,STZ)诱导昆明小鼠成糖尿病模型。采用电穿孔法转移质粒prTA—tet4-rhINS,通过强力霉素(doxcycline,Dox)水给药/撤除以评价四环素系统调控人胰岛素表达的可行性。检测末梢血糖,血清人真胰岛素及小鼠肌肉组织人胰岛素原基因mRNA表达情况。[结果]电穿孔转染目的质粒胰岛素后,立即予饮Dox水,可在小鼠肌肉组织中检测到mRNA表达,第2周降糖效果最佳,撤除强力霉素后,血糖回升,于48h升至转染前水平,再次予饮Dox水后,血糖逐渐下降,72h内达到撤药前水平。重复给药/撤药两次结果一致。[结论]通过给药/撤除Dox可以实现对人胰岛素原基因表达的开关调控。  相似文献
2.
[目的]研究用电穿孔转染强力霉素调控的人胰岛素原基因表达对糖尿病小鼠的降糖作用.[方法]构建prTA-tet4-rhINS质粒;以链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导昆明小鼠成糖尿病模型.成模小鼠分为3组:①ET-ptetINS组(42只):为强力霉素调控的胰岛素质粒INS(prTA-tet4-rhINS)电穿孔组,②ET-pLNCX组(35只):为不含INS基因的空质粒pLNCX电穿孔对照组;③Nake-ptetINS组(48只):为强力霉素调控的胰岛素质粒INS单纯肌肉注射组.各组转染后立即予饮浓度为2 mg/mL 强力霉素(Doxycycline,Dox)水.检测末梢血糖,血清人真胰岛素及小鼠肌肉组织中人胰岛素原基因mRNA表达情况.[结果]胰岛素基因肌肉转移后使糖尿病小鼠血糖下降,体重稳定增加,尿量减少,血清中检测到较高水平真胰岛素;质粒停止表达后重复注射仍然有效.电穿孔转染降糖作用可达9周,而直接注射组约为7周.电穿孔组转染成功率较直接肌肉注射更高(59.52% vs 12.50%),降糖作用更稳定(鼠间血糖变化差值变异更小),真胰岛素水平更高,为(55.67±1.37)μU/L vs(53.33±0.58)μU/L.采用电穿孔法小鼠的肌肉组织人胰岛素原基因mRNA的表达程度较强.禁食24 h后电穿孔法小鼠血糖水平接近非糖尿病小鼠(5.2±1.2)mmol/L vs (4.9±0.2)mmol/L,且没有出现低血糖.[结论]与质粒直接注射相比,电穿孔介导人胰岛素基因转移的降糖作用更持久,个体差异更低,转移有效率及胰岛素水平更高.  相似文献
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