可溶性单链MHC-肽四聚体的构建研究

目的:构建检测抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的单链MHC-肽四聚体.方法:通过在MHC重链基因中引入生物素化位点.并在轻链和重链基因中引入同一限制性酶切位点连接MHC轻链和重链构建可生物素化的单链MHC分子.结果:重组子以包涵体形式表达得到单链MHC分子.重折叠、生物素化、荧光标记后得到活性单链MHC-肽四聚体.结论:单链MHC分子操作简便,提高了四聚体构建效率.     

使用三态模型选择基因重组蛋白质的复性条件

论述了使用蛋白质复性过程中的三态模型来选择基因重组蛋白质的复性条件,并对以往使用的复性条件和新的复性方法进行了合理的解释,为从理论上选择蛋白质的复性条件提供了依据。     

蓝氏贾第鞭毛虫沉默信息调节因子2重组蛋白复性方法比较

目的采用3种不同复性方法获得具有生物活性的重组蛋白蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,Gl)沉默信息调节因子2(GlSir2),并比较3种方法的复性效率,为研究其活性和生物学功能奠定基础。方法表达并纯化GlSir2的包涵体,分别采用稀释复性、透析复性和柱上复性等3种方法对GlSir2包涵体进行复性,并通过检测复性蛋白的活性,比较3种复性方法的特点。结果蛋白活性回收以柱上复性较高,为1 712Flu,透析复性和稀释复性法分别为758Flu和206Flu。结论 3种复性方法均能获得有活性的融合蛋白GlSir2,其中以柱上复性方法处理的蛋白活性回收值最高。     

新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化

工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa),并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体,经过一系列透析后,通过离子交换柱和分子排阻层析进行纯化,并使用高效液相色谱技术对纯化后的rhG-CSFa进行纯度分析。利用G-CSF依赖细胞株(M-NFS-60)测定纯化后的rhG-CSFa体外活性效价。结果表明,rhG-CSFa表达量占全菌蛋白的31.2%,通过优化复性条件,rhG-CSFa复性率达到11.36%,纯化后rhG-CSFa的纯度达到99.11%。体外活性实验显示,与野生型G-CSF相比,rhG-CSFa在相同浓度下能诱导NFS-60细胞株获得更高的细胞增殖率。rhG-CSFa工程菌株能够高表达rhG-CSFa,可用于工业化大规模生产,生产的rhG-CSFa具有较高的生物活性、稳定性和纯度。rhG-CSFa大规模生产的成功为该药物未来的临床运用打下了良好的基础。