Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的 建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响. 方法 构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Westernblot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响. 结果 成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力. 结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力.     

Pokemon基因干扰对泌乳素腺瘤细胞的影响及其分子机制

目的:探讨原癌基因pokemon干扰对泌乳素腺瘤细胞的影响及其分子机制,为可能的泌乳素腺瘤分子靶向治疗提供依据。方法:从泌乳素腺瘤患者手术切除的肿瘤组织中分离培养原代肿瘤细胞,利用siRNA技术构建pokemon稳定干扰泌乳素腺瘤细胞系(siRNA1、siRNA2和siRNA3),采用荧光定量PCR及Western blot验证pokemon的表达;同时运用CCK8检测pokemon基因干扰对泌乳素腺瘤细胞增殖的影响。采用Western blot检测在泌乳素腺瘤组织及siRNA稳定干扰细胞中pokemon对下游cyclin-A、p14ARF和p21蛋白表达的影响。结果:3株pokemon基因干扰泌乳素腺瘤细胞均构建成功。与空白质粒对照组比较,干扰组的细胞增殖能力均较对照组明显减弱(P均<0.05),且siRNA2干扰效率最高。与正常泌乳素腺组织比较,泌乳素腺瘤组织中pokemon蛋白表达明显增加(P=0.042),而其下游蛋白p14ARF、cyclin-A以及p21表达均显著降低(P均<0.05)。与空白质粒对照组比较,在siRNA2干扰组细胞中p14ARF、cyclin-A和p21蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:pokemon基因干扰可上调泌乳素腺瘤细胞中肿瘤相关抑制因子的表达,提示pokemon可能作为泌乳素腺瘤治疗的潜在靶位点。     

siRNA干扰Pokemon基因影响A549细胞增殖的实验研究

目的 研究siRNA干扰Pokemon基因对肺腺癌A549细胞增殖抑制效应的变化.方法 专业设计合成3条针对Pokemon的siRNA,分别转染A549细胞后,RT-PCR检测转录水平Pokemon mRNA表达的变化,筛选出其中最高效的1条siRNA;用MTT法检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞技术检测该siRNA干扰Pokemon对A549细胞凋亡的影响.结果 3条siRNA均成功转染A549细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞呈圆绿色.RT-PCR结果显示有2条siRNA使细胞中Pokemon的mRNA表达降低(P＜0.05).MTT法结果显示siRNA干扰Pokemon后对A549细胞增殖有抑制作用(P＜0.05),其中48 h抑制效率达(24.14±1.39)％.流式细胞技术检测结果显示该siRNA干扰Pokemon可增加A549细胞的凋亡,凋亡率为14.05％.结论 应用RNA干扰Pokemon基因能够抑制A549细胞的增殖,促进A549细胞的凋亡.Pokemon基因有可能成为肺癌治疗中的一个新靶点.     

白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中pokemon基因的定量检测

目的 建立检测pokemon基因表达的实时荧光定量PCR的方法,用以研究pokemon在白血病细胞、多种肿瘤细胞株及胃癌组织中的表达水平.方法 通过RT-PCR、T-A克隆、real-time PCR等方法精确测定并比较pokemon基因在白血病细胞、人结肠癌细胞株(SW480)、人胃癌细胞株(SGC)、人肺癌细胞株(LTEP)、人髓系白血病细胞株(U937)、人前列腺癌细胞株(PC3)、人宫颈癌细胞株(HELA)、人内皮细胞株(UEVC-304)、健康人外周血单个核细胞(PBMC)、胃癌组织中的表达水平.绘制pokemon基因real-time PCR的标准曲线.结果 急性淋巴细胞白血病(ALL)中pokemon的表达显著高于急性粒细胞白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)及健康人PBMC(P＜0.05);SW480中的表达量明显高于SGC、LTEP、U937、PC3、HELA和UEVC-304(P＜0.05);胃癌组织表达量高于胃癌旁组织,阳性率为5/7.结论 建立的测定pokemon基因表达的real-time PCR方法稳定、准确,pokemon基因可以作为某些肿瘤的一个新的靶点,其表达水平的检测可作为判断某些肿瘤发生的参考指标.     

特殊的原癌基因pokemon

pokemon基因位于染色体19p13.3区域,是转录抑制因子POK(POZ and Kruppel)家族的一员,现已被确认为原癌基因,与肿瘤发生密切相关。它不仅参与细胞周期和细胞凋亡的调控,还能阻制关键的抑癌基因可变阅读框基因(ARF),在人类多种肿瘤中过度表达,并且缺少pokemon的细胞对致瘤转化不敏感。它还能控制其他癌基因的活性,并对肿瘤细胞的一些重要特性产生影响,可能是其他癌基因引发癌症所必需的。pokemon还在脂肪形成及人类免疫缺陷病毒(HIV)发生和发展中具有重要作用。     

Pokemon蛋白在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌中Pokemon(POK erythroid ontogenic factor)蛋白的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测52例乳腺癌、20例癌旁正常组织、20例乳腺增生组织Poke-mon蛋白的表达,并对其与临床病理特征的关系进行分析。结果①Pokemon蛋白表达于乳腺癌细胞核和细胞质。乳腺癌细胞核Pokemon蛋白高表达率为71.2%(37/52),显著高于癌旁正常乳腺组织40%(8/20)、乳腺增生组织25%(5/20),P<0.05。②乳腺癌组织中有腋窝淋巴结转移组细胞核Pokemon蛋白高表达率(82.8%)显著高于无腋窝淋巴结转移组(56.5%),P<0.05。结论Pokemon蛋白高表达可能在乳腺癌发生中起重要作用且与腋窝淋巴结转移相关。