HPLC同时测定归芍疏肝散中芍药苷阿魏酸和甘草酸铵的含量

目的:建立同时测定归芍疏肝散中芍药苷、阿魏酸和甘草酸铵含量的高效液相色谱法。方法:采用Amethyst C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为237 nm,柱温为30℃。结果:在线性范围内3种成分线性良好(r≥0.9998),精密度RSD均<2%;重复性RSD均<3%;平均回收率98.81%~100.25%,RSD均<2%。结论:该方法快捷,操作简便,结果可靠,可用于归芍疏肝散的质量控制。     

基于指纹图谱及网络药理学的白芍质量标志物(Q-marker)预测分析

目的基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测当归四逆汤中单味药白芍潜在的质量标志物(Q-marker)。方法建立白芍水煎液和当归四逆汤指纹图谱,明确成分传递规律;进一步通过网络药理学方法,构建"成分-靶点-通路"网络,预测白芍的Q-marker。结果建立了15批白芍水煎液和15批当归四逆汤指纹图谱,并各指认其中5个色谱峰,分别为没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖和苯甲酰芍药苷;经网络药理学分析,筛选出潜在的2个活性成分、8个核心靶点、13条关键通路,表明白芍主要通过这些成分、靶点、通路发挥作用,初步预测芍药苷、芍药内酯苷为白芍潜在的Q-marker。结论研究分析预测的Q-marker,为白芍质量的全面控制提供参考,同时也为白芍功效关联物质的研究及作用机制的阐释奠定基础。     

在体皮肤微透析分析制川乌-白芍配伍对芍药苷局部药代动力学的影响

目的:考察制川乌对白芍中芍药苷经皮转运的影响,从经皮转运角度研究制川乌-白芍配伍协同增效作用机制。方法:以昆明种清洁级小鼠为实验对象,分别经皮给予白芍凝胶、制川乌-白芍凝胶和白芍-氮酮凝胶,采用皮肤微透析取样技术,建立HPLC测定透析液中芍药苷的浓度,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(14∶86),检测波长230 nm;利用DAS 2.0软件计算局部药动学参数,采用扫描电镜考察药物对小鼠皮肤角质层的影响。结果:白芍凝胶组的药时曲线下面积(AUC_(0-t)),平均滞留时间(MRT_(0-t)),半衰期(t_(1/2)),达峰时间(T_(max))和药峰浓度(C_(max))分别为(3.28±1.01)mg·L~(-1)·h,(3.95±0.32)h,(0.92±0.44)h,(2.00±0)h和(0.72±0.24)mg·L~(-1);白芍-制川乌凝胶组MRT_(0-t),AUC_(0-t),t_(1/2),T_(max)和C_(max)分别为(3.35±0.08)h,(10.64±1.24)mg·L~(-1)·h,(1.32±0.67)h,(1.00±0)h和(3.06±0.38)mg·L~(-1),白芍-氮酮凝胶组AUC_(0-t),MRT_(0-t),t_(1/2),T_(max),C_(max)分别为(59.82±13.51)mg·L~(-1)·h,(3.67±0.08)h,(0.89±0.16)h,(2.67±0.29)h和(13.24±4.14)mg·L~(-1)。与白芍凝胶组比较,制川乌-白芍凝胶组AUC_(0-t)和C_(max)均显著增大,T_(max)明显缩短。扫描电镜观察结果表明制川乌作用皮肤后,角质层细胞间隙明显增加,且与氮酮对皮肤的作用类似。结论:制川乌-白芍配伍能显著提高芍药苷的透皮吸收,达到配伍"增效"的目的,这可能与制川乌降低角质层的屏障作用有关。     

高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量

目的建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。方法药物提取物样品经甲醇-水(1∶1,V/V)溶液溶解、离心、净化后过0.45μm滤膜,血清样品适当稀释、过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm),茯苓酸流动相为乙腈-0.5mmol/L乙酸铵水溶液(9∶1,V/V),阿魏酸和芍药苷以乙腈-5mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,采用电喷雾离子源,负离子模式,干燥气温度350℃,干燥气流速12L/min,检测方式为多反应监测。结果当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别在0.1~20.0μg/mL、1~100μg/mL、0.1~20.0μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率高,重复性好。当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为(127.6±14.9)μg/g、(6081.8±468.0)μg/g和(14.7±0.75)μg/g,当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为(0.026±0.004)μg/g和(0.61±0.07)μg/g。结论本研究建立的方法样品处理简单,方法特异性强,精确度高,重复性偏差小,回收率高,可用于当归芍药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。     

经典名方当归四逆汤指纹图谱及功效关联物质预测分析

目的基于指纹图谱及网络药理学对当归四逆汤(Danggui Sini Decoction,DSD)进行全过程质量控制和温经散寒、养血通脉功效关联物质预测分析。方法建立DSD物质基准对应实物的指纹图谱,匹配共有峰,进行共有峰的归属分析;基于可测性和可追溯性进行DSD活性成分的筛选,采用网络药理学构建"成分-靶点-通路"网络,预测DSD温经散寒、养血通脉功效关联物质。结果建立了DSD物质基准对应实物的指纹图谱,标定25个共有峰,指认了芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、肉桂酸、邻甲氧基桂皮醛、甘草酸、藁本内酯、细辛脂素9个色谱峰,相似度均0.90。根据各共有峰的归属分析,主要药效物质群可以从饮片到物质基准对应实物较为完整的传递,归属关系清晰明确;采用网络药理学对筛选出的9个活性成分进行"成分-靶点-通路"网络构建与分析,富集的通路中包括癌症信号通路、磷脂酰肌醇-3-羟激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-hydroxykinase-proteinkinaseB,PI3K-Akt)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路、瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道的炎性介质调节等,DSD的9个活性成分可能通过调节这些信号通路达到温经散寒、养血通脉的作用。结论建立了经典名方DSD的指纹图谱并对其进行归属分析,明确DSD的色谱峰归属,对经典名方DSD进行整体化、过程化的质量控制;并结合网络药理学发现DSD的9个活性成分具有传递性和溯源性,且与DSD温经散寒、养血通脉功效属性密切相关,可作为其潜在的功效关联物质,为DSD的进一步研究提供依据。     

经典名方当归四逆汤物质基准量值传递分析

目的 建立经典名方当归四逆汤物质基准的HPLC特征图谱及指标性成分含量测定方法,阐明当归四逆汤物质基准关键质量属性,为后续复方制剂的开发奠定基础。方法 制备18批当归四逆汤物质基准,建立HPLC特征图谱,进行特征峰归属及相似度评价;测定指标性成分的含量,对物质基准进行量值传递分析。结果 18批物质基准的特征图谱的相似度均大于0.90,共确定19个特征峰,分别来自方中当归（峰4、5、19）、桂枝（峰10、11、14）、白芍（峰6、9）、细辛（峰1、3、13、15、18）和炒甘草（峰7、8、12、16、17）;各指标成分从饮片到物质基准的转移率分别为芍药苷78.47%～96.01%、甘草苷43.79%～94.62%、阿魏酸81.20%～131.24%、肉桂酸70.03%～106.75%、桂皮醛3.17%～5.50%、甘草酸31.08%～52.43%、细辛脂素9.63%～13.37%。结论 采用特征图谱结合多指标性成分含量测定对当归四逆汤物质基准进行量值传递研究,该方法科学合理,为当归四逆汤物质基准的质量控制及复方制剂的开发提供科学依据。     

HPLC-DAD法同时测定固本益肠片中5种成分含量

目的 建立HPLC-DAD同时测定固本益肠片中儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素含量的方法并为监测该药风险成分提供参考。方法 色谱柱采用依利特Hypersil ODS2柱(4.6mm×300mm,5μm);流动相：乙腈(B)-水(A),梯度洗脱,检测波长：240nm;流速：1.0mL/min;柱温：30℃。结果 5种成分均能达到基线分离,且在相应范围内线性关系良好;儿茶素、表儿茶素、芍药苷、补骨脂素及异补骨脂素的平均加样回收率分别为98.22%、96.93%、101.46%、98.60%和100.24%,RSD分别为1.5%、2.1%、2.0%、1.4%和1.0%(n=6)。结论 该方法简便易行,稳定高效,可为进一步完善固本益肠片质量控制标准,并为监测该药风险成分提供参考。     

Paeoniflorin ameliorates ischemic neuronal damage in vitro via adenosine A1 receptor-mediated transactivation of epidermal growth factor receptor

Aim:

Paeoniflorin from Chinese herb Paeoniae Radix has been shown to ameliorate middle cerebral artery occlusion-induced ischemia in rats. The aim of this study was to investigate the mechanisms underlying the neuroprotective action of PF in cultured rat cortical neurons.

Methods:

Primary cultured cortical neurons of rats were subjected to oxygen-glucose deprivation and reoxygenation (OGD/R) insult. Cell survival was determined using MTT assay. HEK293 cells stably transfected with A₁R (HEK293/A₁R) were used for detailed analysis. Phosphorylation of the signaling proteins was evaluated by Western blot or immunoprecipitation. Receptor interactions were identified using co-immunoprecipitation and immunofluorescence staining.

Results:

Paeoniflorin (10 nmol/L to 1 μmol/L) increased the survival of neurons subjected to OGD/R. Furthermore, paeoniflorin increased the phosphorylation of Akt and ERK1/2 in these neurons. These effects were blocked by PI3K inhibitor wortmannin or MEK inhibitor U0126. Paeoniflorin also increased the phosphorylation of Akt and ERK1/2 in HEK293/A₁R cells. Both A₁R antagonist DPCPX and EGFR inhibitor AG1478 not only blocked paeoniflorin-induced phosphorylation of ERK1/2 and Akt in HEK293/A₁R cells, but also paeoniflorin-increased survival of neurons subjected to OGD/R. In addition, paeoniflorin increased the phosphorylation of Src kinase and activation of MMP-2 in HEK293/A₁R cells. Both Src inhibitor PP2 and MMP-2/MMP-9 inhibitor BiPs not only blocked paeoniflorin-induced phosphorylation of ERK1/2 (and Akt) in HEK293/A₁R cells, but also paeoniflorin-increased survival of neurons subjected to OGD/R.

Conclusion:

Paeoniflorin promotes the survival of cultured cortical neurons by increasing Akt and ERK1/2 phosphorylation via A₁R-mediated transactivation of EGFR.     

HPLC测定气血双补口服液中芍药苷与淫羊藿苷含量

目的改进气血双补口服液的质量标准,为制剂质量提供保障。方法采用高效液相色谱法同时测定制剂中芍药苷和淫羊藿苷的含量。色谱柱为Agiltnt TC-C18(2)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温为25℃,检测波长为232 nm。结果芍药苷、淫羊藿苷分别在0.542~8.677μg(r=0.999 9)、0.185~2.963μg(r=0.999 9)范围内有良好的线性关系,平均回收率分别为99.29%、98.91%,RSD分别为1.06%、1.97%(n=6)。结论该方法准确易行,便于该制剂的质量控制。     

RP-HPLC法同时测定清热止嚏颗粒中黄芩苷、芍药苷和葛根素

目的:建立清热止嚏颗粒中黄芩苷、芍药苷和葛根素含量的测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80),采用等度洗脱,改变体积流量以及波长:在1~12分钟内,流量1.0 m L/min,检测波长230 nm;在12.01~20.0分钟,流量1.5 m L/min,检测波长278 nm;柱温为30℃,进样量20μL。结果:黄芩苷、芍药苷和葛根素线性范围分别为6~100μg/m L、30~350μg/m L、12~150μg/m L;平均回收率分别为100.3%,99.91%和99.93%;RSD为0.54%、0.47%和0.48%。结论:该方法准确、简便、重复性好,可用于清热止嚏颗粒中黄芩苷、芍药苷和葛根素的定量测定。