补肺活血胶囊对肺纤维化模型小鼠的治疗作用及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探索补肺活血胶囊治疗特发性肺纤维化的作用及其机制。方法 将60只C57BL/6J雄性小鼠分为对照组、模型组、吡非尼酮组及补肺活血胶囊高、低剂量组,每组各12只。除对照组外,其余各组小鼠气管滴注博来霉素建立肺纤维化模型。造模后第1天开始干预治疗,补肺活血胶囊低、高剂量组分别ig 315、630 mg/(kg∙d)的补肺活血胶囊溶液,吡非尼酮组ig吡非尼酮200 mg/(kg∙d),对照组、模型组ig等剂量生理盐水。连续给药28 d后取材,收集小鼠的肺组织,分别运用苏木精–伊红染色（HE）和马松（Masson）法观察小鼠的肺组织病理学变化,酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织羟脯氨酸（HYP）含量,实时荧光定量（qRT-PCR）法检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白（COL-I）、纤连蛋白1（Fn1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA相对表达水平,免疫组化法检测肺组织磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（p-PI3K）和磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织结构明显被破坏、炎症细胞渗出及胶原纤维沉积增多,肺组织中HYP含量明显升高,COL-I、Fn1、α-SMA mRNA相对表达量均明显升高,p-PI3K和p-Akt蛋白的表达量显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,补肺活血胶囊高剂量组、吡非尼酮组小鼠肺组织结构改善明显、炎症细胞渗出以及胶原纤维沉积明显减少,肺组织中HYP含量明显降低,COL-Ⅰ、Fn1、α-SMA mRNA相对表达量均明显降低,p-PI3K和p-Akt蛋白的表达量显著降低（P＜0.01）。结论 补肺活血胶囊具有抗纤维化的作用,可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

隐丹参酮对胰腺癌细胞生物学行为的影响及作用机制

背景与目的:胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,尽管目前针对胰腺癌的治疗方式在不断发展,患者预后仍然很差。隐丹参酮(CPT)是从植物丹参中提取的具有多种活性的单体,已被证实对宫颈癌、前列腺癌等有抗癌作用,但其对胰腺癌的作用尚不清楚,本研究通过体外实验探讨CPT对胰腺癌细胞生长和迁移的影响及相关机制,为相关的临床治疗药物研发提供理论和实验依据。方法:采用人胰腺癌BxPC-3细胞和SW1990细胞为研究对象,用3个浓度(10、20、40 μmol/L)的CPT处理该两种胰腺癌细胞不同时间(0、1、2、3 d)后,用CCK-8法检测CPT对细胞活力影响的浓度与时间效应;用以上3个浓度的CPT处理两种胰腺癌细胞24 h后,分别用克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验检测对细胞克隆形成能力、迁移能力、侵袭能力的变化;用20 μmol/L CPT处理BxPC-3和SW1990细胞1、2、3 d后,用Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)以及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、E-cadherin与细胞周期相关蛋白CDK4、cyclin D1的表达。对照组细胞均只采用溶剂(DMSO)处理。结果:与各自对照组比较,CPT处理后的两种胰腺癌细胞的生长被明显抑制,且呈时间与浓度依赖性(均P0.05);划痕愈合程度、相对克隆形成率、侵袭细胞数均明显降低,且呈浓度依赖性(均P0.05);Akt、p-Akt、vimentin、E-cadherin、CDK4、cyclin D1蛋白的表达均明显下调,且呈时间依赖性(均P0.05)。结论:CPT能有效抑制胰腺癌细胞的生长和迁移,其作用机制可能与其下调Akt的表达,并进一步导致胰腺癌细胞生长周期阻滞及抑制EMT过程有关。     

双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7增殖及凋亡的影响

目的建立乐伐替尼肝细胞肝癌(简称"肝癌")细胞耐药模型,以研究双硫仑联合铜离子对乐伐替尼耐药细胞Huh7增殖和凋亡的影响。方法通过CCK8法检测乐伐替尼作用下Huh7细胞的半抑制浓度(IC50),采用浓度递增法诱导Huh7细胞乐伐替尼耐药。各组细胞处理:对照组为Huh7细胞加普通培养液培养后的细胞;敏感组为Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;耐药组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼培养后的细胞;联合组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+1μmol/L双硫仑+0.5μmol/L铜离子培养后的细胞;抑制剂组为耐药Huh7细胞加10μmol/L乐伐替尼+10μmol/L Akt抑制剂MK2206培养后的细胞。CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的存活率和凋亡率;Western blot法检测磷酸化-Akt(p-Akt)和半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)和B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)蛋白表达;Transwell法检测细胞侵袭性。结果乐伐替尼耐药细胞系成功建立,选取10、20、40、60、80及160μmol/L 6个乐伐替尼浓度对Huh7细胞作用48 h后计算得出细胞IC50为12.35μmol/L。耐药组细胞存活率明显高于敏感组(P<0.01),联合组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.01),抑制剂组细胞存活率明显低于耐药组(P<0.05)。与耐药组比较,联合组及抑制剂组p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.01)、caspase-9明显升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白在耐药组和联合组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。联合组细胞凋亡率明显高于耐药组(P<0.01)。Transwell结果显示联合组的肿瘤细胞侵袭数明显少于耐药组(P<0.01)。结论双硫仑联合铜离子能增加乐伐替尼对乐伐替尼耐药肝癌细胞Huh7的敏感性,同耐药组相比其细胞抑制率明显提高,其机制可能与抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt通路及促进caspase-9蛋白表达有关。     

尖锐湿疣皮损中Caspase 8与p-Akt的表达

目的 探讨Caspase 8与p-Akt在尖锐湿疣皮损中的表达及意义.方法 收集尖锐湿疣30例、宫颈癌20例、正常皮肤(包皮)20例,采用免疫组化检测以上组织中Caspase 8及p-Akt的表达及分布.结果 Caspase 8在尖锐湿疣皮损、宫颈癌、正常皮肤中阳性率分别为23.33%、80%、90%.Caspase 8在尖锐湿疣中的表达强度显著低于正常皮肤(P<0.01)和宫颈癌组织(P<0.001).p-Akt在尖锐湿疣皮损、宫颈癌组织、正常皮肤组织中的阳性率分别为93.33%、95%、90%.p-Akt在尖锐湿疣皮损的表达强度显著高于正常皮肤组织(P<0.001),低于宫颈癌组织(P<0.001).在尖锐湿疣皮损和正常皮肤组织中,Caspase 8与p-Akt的表达无相关性.在宫颈癌中,Caspase 8与p-Akt的表达存在显著的正相关(r=0.369,P<0.05).结论 Caspase 8的凋亡启动受抑制及p-Akt的抗凋亡作用可能参与了尖锐湿疣的发生发展.     

MicroRNA-21 promotes bone mesenchymal stem cells migration in vitro by activating PI3K/Akt/MMPs pathway

MicroRNA-21 (miR-21) contributes to anti-apoptosis in bone marrow mesenchymal stem cells (BMSC), but its role in the migration of BMSCs remains vague. The aim of this study was to determine the possible effect of miR-21 on regulating BMSCs directional migration and the expression of MMP-2/MMP-9 in BMSCs in vitro. BMSCs were successfully infected with miR-21-up lentivirus. Cell migration using Transwell assay indicated that upregulated expression of miR-21 could significantly promote BMSCs migration. Western blot analysis indicated that miR-21 significantly upregulated the expression of MMP-2 and MMP-9, which were related to metastasis-associated genes. GM6001, the specific MMPs inhibitor, abrogated the upregulated expression of MMP-2/MMP-9 and abolished the positive effect of miR-21 on promoting BMSCs migration. Meanwhile, miR-21 significantly enhanced Akt phosphorylation, as measured by Western blot analysis. LY294002, an inhibitor of Akt activation, abrogated the phosphorylation of Akt and abolished the positive effect of miR-21 on promoting BMSCs migration and upregulating MMP-2/MMP-9 expression. These results suggest that miR-21 contributes to BMSCs migration by upregulating MMP-2/MMP-9, potentially via the PI3K/Akt pathway.     

胰腺癌中p-Akt、HSP90的表达及其临床意义

目的 探讨胰腺癌组织中p-Akt与HSP90蛋白的表达及其与胰腺癌临床病理参数和预后的相关性及意义.方法 应用高通量的组织芯片技术免疫组织化学方法检测88例无术前放化疗史的胰腺癌手术标本和11例非肿瘤性胰腺组织中p-Akt和HSP90蛋白的表达情况,运用Spearman秩相关分析两者之间的相关性,并对随访2个月～6年的53例病例作生存分析.结果 88例胰腺癌组织中,p-Akt、HSP90高表达率分别为46(52.3%)、65(73.9%).p-Akt、HSP90高表达和胰腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移存在相关性(P<0.01),与肿瘤病理分级、部位和大小无关(P>0.05).经Spearman秩相关分析显示p-Akt、HSP90在胰腺癌中有协同表达(P<0.05).在有随访结果的53例病例中,单因素Cox分析显示,p-Akt表达均与胰腺癌预后有关(P<0.05).结论 p-Akt、HSP90的表达与胰腺癌临床病理参数相关,并且p-Akt表达可作为胰腺癌的预后指标.     

p-Akt在胰腺癌组织芯片中的表达及临床意义

目的用高通量的组织芯片技术,探讨胰腺癌组织中p-Akt蛋白的表达及其与胰腺癌临床病理特征和预后的相关性及意义。方法将88例胰腺癌组织和11例正常胰腺组织制成组织芯片,采用EnVision免疫组化方法检测p-Akt蛋白在胰腺癌中的表达,并对随访2个月～6年的53例病例作了生存分析。结果胰腺癌中p-Akt高表达率为52.3%(46/88)。p-Akt表达和胰腺癌的临床TNM分期、淋巴结转移存在相关性(P<0.01),与肿瘤病理分级、部位和大小无关(P>0.05)。在有随访结果的53例病例中,单因素、多因素Cox分析显示,p-Akt表达与预后有关(P<0.05)。结论组织芯片技术是大规模检测基因蛋白表达的一种有效方法。p-Akt在胰腺癌中过表达可能参与了胰腺癌的发生、发展和转移。p-Akt是胰腺癌有意义的预后指标。     

结直肠癌原发及转移灶中PI3K、p-Akt及mTOR的表达及意义

背景与目的:随着对PI3K/Akt信号通路在结直肠癌发生、发展中研究的不断深入,人们发现该通路在结直肠癌发生、发展及治疗药物开发中有重要价值.本研究旨在探讨PI3K、p-Akt及mTOR在结直肠癌原发灶及转移灶中的表达变化及临床意义.方法:应用免疫组织化学EnVison法检测60例结直肠癌患者原发灶及其转移灶中PI3K、p-Akt及mTOR的表达.结果:PI3K在转移灶中的阳性率显著高于原发灶中的阳性率(46.7% vs 30%,χ2=13.890,P<0.05),mTOR在转移灶中的阳性率显著高于原发灶中的阳性率(55.0% vs 41.7%,χ2=10.823,P<0.05);而p-Akt在原发及转移灶中的表达差异无统计学意义(53.3% vs 50.0%,χ2=0.267,P>0.05).PI3K和mTOR在结直肠癌原发及转移灶中表达均具有相关性,且呈正相关.结论:PI3K和mTOR的表达与结直肠癌转移密切相关,而且转移灶癌细胞PI3K的表达明显增强,mTOR的表达明显下降,可作为临床判断结直肠癌恶性程度、转移及预后的重要参考指标.