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1.
目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果:测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt(H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 kD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT(H247A)的酶活性降低了约5~10倍。结论:成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NA...  相似文献
2.
哺乳动物尼克酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,NAMPT),参与NAD的合成,也是一种细胞因子,参与调控糖代谢、炎症反应、应激耐受等多种生物学效应.研究表明,NAMPT与衰老及衰老相关疾病(例如糖尿病、肥胖、肿瘤、神经退行性疾病以及心脑血管疾病等)密切相关.这些研究成果将为临床防治衰老相关疾病提供新的思路和方法.  相似文献
3.
[目的]研究烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyl transferase,Nampt)在大鼠涎腺的表达和分布。[方法]应用半定量逆转录聚合酶链法(RT-PCR)和免疫印迹法检测大鼠正常腮腺、颌下腺和大舌下腺组织Nampt mRNA及蛋白质的表达。采用免疫组织化学法检测大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺组织Nampt的分布。[结果]大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺组织均有Nampt的mRNA及蛋白质表达,RT-PCR结果显示其表达相对光密度值分别为:腮腺82.04%,颌下腺50.89%,大舌下腺30.53%(与actin比较,P〈0.05);Western Blot结果显示其表达相对光密度值分别为:腮腺77.34%,颌下腺47.61%,大舌下腺31.78%(与actin比较,P〈0.05)。Nampt均主要分布于浆液性腺泡细胞的胞浆和胞核,以及闰管和纹状管的胞核中。[结论]大鼠腮腺、颌下腺和大舌下腺均存在Nampt的mRNA和蛋白质表达,为深入研究Nampt在涎腺生理及病理状态下的功能意义提供初步实验依据。  相似文献
4.
热量限制可以引起细胞、生物体寿命延长和降低衰老相关疾病的发生。沉默信息调节因子2在酵母和果蝇中已被证实是热量限制引发长寿效果的关键,在哺乳类动物中的名字是沉默信息调节因子1(SIRT1)。最近,SIRT1的激活物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)成了研究中心,因为它很可能是连接细胞及生物体的能量代谢和热量限制导致延缓衰老中枢。与NAD+相关的还有NAD+的限速酶尼克酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)和细胞能量调节因子腺苷酸活化蛋白激酶及NAD+下游因子Sir2-相关酶类(sirtuins)家族成员。它们之间的关系研究的最终结果就很可能解释在哺乳类动物中热量限制的奥秘,从而为今后以此为靶点的药物开发奠定良好的基础。  相似文献
5.
目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)在扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)中的表达及其与DCM发生发展的关系。方法 收集2010~2013年期间经四川大学华西医院确诊的131例中国汉族DCM患者外周血,随机选择在四川大学华西医院体检中心体检的中国汉族健康人137例作为对照组。利用ELISA和Real time-PCR检测DCM组及对照组各样本NAMPT血浆蛋白及细胞内NAMPT mRNA表达水平。同时构建细胞内NAMPT过表达及空质粒转染大鼠心肌细胞系H9C2细胞,通过WST-1、细胞周期及流式细胞术检测NAMPT对H9C2细胞增殖、H2O2诱导氧化应激前后细胞凋亡的影响。结果 DCM组血浆细胞外NAMPT蛋白水平高于对照组(P<0.05),且不同心衰程度及左室大小之间患者血浆NAMPT蛋白水平差异有统计学意义(P 均< 0.05)。DCM组细胞内NAMPT mRNA水平低于对照组(P<0.05)。体外实验中,转染NAMPT过表达质粒后H9C2细胞增殖能力较空质粒组显著增强,S期比例增加。直接转染或转染后用H2O2诱导氧化应激前后,NAMPT过表达组H9C2存活细胞比例高于空质粒组,晚期凋亡及坏死细胞比例降低。结论 细胞外NAMPT血浆蛋白水平的高表达与外周血细胞内NAMPT mRNA水平的低表达是DCM的生物学特征之一。细胞内NAMPT降低可能是DCM发病机制中的重要因素。  相似文献
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