miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

进展型脑梗死患者miRNA的表达水平及临床意义

目的探讨进展型脑梗死患者微小RNA(miRNA)的表达水平及临床意义。方法回顾性分析2016年7月至2018年7月期间我院收治的138例脑梗死患者病例资料。根据斯堪的那维亚卒中量表(SSS)将其分为对照组(稳定型脑梗死,82例)和观察组(进展型脑梗死,56例)。观察组患者按照高级中枢损伤严重程度评定标准(MESSS)评分为轻度进展(30例)、中度进展(17例)、重度进展(9例)三个亚组。对观察组出院两个月后进行预后随访,并将其分为预后不良组及预后良好组。分析进展型脑梗死患者miRNA的表达水平及临床意义。结果进展型脑梗死患者的miRNA-21、miRNA-223水平均显著高于稳定型脑梗死患者(P 0. 05); miRNA-21、miRNA-223的高表达均是进展型脑梗死的危险因素(P 0. 05),且进展型脑梗死的严重程度与血清miRNA-21、miRNA-223的表达水平均呈正相关(r=0. 834,P=0. 008;r=0. 896,P=0. 001)。预后不良组患者血清miRNA-21、miRNA-223表达水平显著高于预后良好组(P 0. 05);血清miRNA-21、miRNA-223表达水平预测进展型脑梗死预后的AUC面积分别为0. 805、0. 834,并分别得出截断值4. 45 (敏感度77. 14%,特异性82. 28%)、7. 06(敏感度82. 86%,特异性73. 42%)。结论进展型脑梗死患者miRNA-21、miRNA-223呈高表达,且其表达水平与脑梗死严重程度呈正相关,同时对预测进展型脑梗死预后均具有较高的敏感度和特异度,有可能成为一种早期诊断和预测进展型脑梗死生物标志物。     

脑梗死患者血清miR-497,TNF-α表达水平变化及其临床意义

目的 探讨急性脑梗死(Acute cerebral infarction,ACI)患者血清微小RNA-497(MicroRNA-497,miR-497)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平变化及其临床意义。方法 选取2016年1月-2019年11月本院收治的96例ACI患者,称ACI组,并选取本院同期98例体检健康者,称对照组; 采用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测所有研究对象血清miR-497表达水平; 采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测所有研究对象血清肿瘤坏死因子-α水平; 评估ACI患者神经功能缺损程度、计算脑梗死体积,比较不同神经功能缺损程度/脑梗死体积的ACI患者血清miR-497、TNF-α水平; Pearson法分析ACI患者血清miR-497、TNF-α水平与神经功能缺损程度评分(National institutes of health stroke scale,NIHSS)、脑梗死体积的关系; 采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)评价血清miR-497、TNF-α对ACI的诊断价值。结果 ACI组血清miR-497、TNF-α水平均明显高于对照组(P<0.05); ACI患者血清miR-497、TNF-α水平随神经功能缺损程度加重、脑梗死体积增加均呈递增趋势(P均<0.05); ACI患者血清miR-497、TNF-α水平与脑梗死体积、NIHSS评分均呈正相关(r=0.423,0.514,0.542,0.399,P均<0.05); 血清miR-497、TNF-α对ACI诊断的曲线下面积(Area under curve,AUC)为0.848、0.806,截断值分别为1.29、1.27,相应灵敏度分别为82.3%、81.3%,特异度分别为76.5%、77.6%; 两者联合诊断ACI的AUC为0.907,其灵敏度、特异度分别为81.3%、90.8%。结论 miR-497、TNF-α在ACI患者血清中表达均上调,且与神经功能缺损程度、脑梗死体积有关,均可能在ACI进展中起一定作用,两者联合可有效提高ACI的诊断效能,有助于诊断、评估ACI患者的病情。     

高危型HPV阳性宫颈癌患者miRNA-34a-5p的表达及临床意义

目的　探讨高危型人乳头状瘤病毒（high risk-human papilloma virus, HR-HPV）阳性宫颈癌患者组织及血清中微小RNA（microRNA, miRNA）-34a-5p的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法　将100例HR-HPV阳性宫颈癌患者（宫颈癌组）、70例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）患者（CIN组）、70例HR-HPV阳性子宫良性病变或者HPV单纯阳性的健康体检者（对照组）作为研究对象。采集上述研究对象的血清标本及70例行手术治疗的宫颈癌组患者癌组织及癌旁组织。使用实时荧光定量PCR技术测定组织及血清中miRNA-34a-5p水平，并分析miRNA-34a-5p与宫颈癌临床、病理指标的关联及血清miRNA-34a-5p对宫颈癌的诊断价值。结果　①对照组血清中miRNA-34a-5p的相对表达量高于CIN组和宫颈癌组：（0.933±0.097）vs.（0.554±0.099）vs.（0.369±0.099），差异有统计学意义（F=741.401，P=0.000）；宫颈癌组患者术前血清中miRNA-34a-5p相对表达量低于术后1周，差异有统计学意义（t=8.305，P=0.000）。有无淋巴结转移和有无远处转移的宫颈癌患者血清中miRNA-34a-5p相对表达量的差异有统计学意义（P均＜0.05）。②宫颈癌组患者癌旁组织中miRNA-34a-5p的相对表达量高于癌组织，差异具有统计学意义（t=40.313，P=0.000）。③宫颈癌组患者癌组织中的miRNA-34a-5p表达水平与血清中的表达水平呈正相关（r=0.908，P=0.000）。④以0.508为miRNA-34a-5p相对表达量的最佳临界值诊断宫颈癌，其灵敏度为83.6%，特异度为79.4%，AUC为0.860，95%置信区间为0.803～0.917。结论　HR-HPV阳性宫颈癌患者癌组织和血清中miRNA-34a-5p表达下调，对宫颈癌诊断及预后监测具有一定的参考价值。     

miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤中的表达及意义

目的miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤的表达及其诊断意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术分别检测11例MB患者癌组织(实验组)和癌旁组织(对照组)的miRNA-9和miRNA-218表达水平并进行统计分析。结果MB患者组织中miRNA-9相对表达量(0.44±0.40)低于癌旁组织,miRNA-218相对表达量(0.55±0.32)低于癌旁组织,两者差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-9和miRNA-218的表达与肿瘤大小、分期、是否转移无关(P>0.05)。结论MB患者组织中miRNA-218和miRNA-9均表达下降,提示其参与了MB的发病机制并在其中发挥重要作用,且两者可成为MB有效治疗靶点。     

Inhibition of miR-93 promotes interferon effector signaling to suppress influenza A infection by upregulating JAK1

Type I interferons play a critical role in host defense against influenza virus infection. Interferon cascade induces the expression of interferon-stimulated genes then subsequently promotes antiviral immune responses. The microRNAs are important regulators of innate immunity, but microRNAs-mediated regulation of interferon cascade during influenza infection remains to be fully identified. Here we found influenza A virus (IAV) infection significantly inhibited miR-93 expression in alveolar epithelial type II cells through RIG-I/JNK pathway. IAV-induced downregulation of miR-93 was found to upregulate JAK1, the target of miR-93, and then feedback promote antiviral innate response by facilitating IFN effector signaling. Importantly, in vivo administration of miR-93 antagomiR markedly suppressed IAV infection, protecting mice form IAVs -associated death. Hence, the inducible downregulation of miR-93 feedback suppress IAV infection by strengthening IFN-JAK-STAT pathway via JAK1 upregulation, and in vivo inhibition of miR-93 bears considerable therapeutic potential for suppressing IAV infection.     

粪便SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化检测在大肠肿瘤筛查中的临床应用

目的 评估检测大肠肿瘤患者粪便中SEPT-9和微RNA（miRNA）-34b/c基因甲基化对大肠肿瘤筛查的临床性能。方法 采用病例对照研究方法,使用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法检测大肠肿瘤患者（大肠癌组35例、大肠腺瘤组47例）和正常对照人群（正常对照组52名）粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因是否存在甲基化,来评估其筛查大肠肿瘤的性能。结果 大肠癌组SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率分别为68.6%、71.4%,大肠腺瘤组分别为57.4%、63.8%,正常对照组分别为9.6%、11.5%。3组的SEPT-9、miRNA-34b/c基因甲基化阳性率比较差异均有统计学意义（²_SEPT-9 = 37.185,²_miRNA-34b/c = 40.040,P均< 0.001）,利用Bonferroni法进行两两比较,大肠癌组和大肠腺瘤组的甲基化阳性率比较差异无统计学意义,两者与正常对照组比较差异均有统计学意义（P均< 0.001）。3组联合检测SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率为88.6%、76.6%、13.5%,大肠癌组和大肠腺瘤组联合检测的甲基化阳性率均高于SEPT-9单基因检测和miRNA-34b/c单基因检测（P均< 0.05）。结论 检测粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化具有效好的大肠肿瘤筛查性能,或许可作为大规模人群筛查大肠肿瘤新的生物标志物组合;多基因甲基化联合检测筛查的性能优于单基因。     

血清miRNA155、孕激素表达水平与乳腺癌发生的意义

目的探讨血清miRNA155、孕激素表达水平与乳腺癌发生的相关性。方法选择本院2015年1月日至2017年12月31日期间接受手术切除治疗的病理确诊的乳腺癌患者224例和同期于我院体检科行检查,经乳腺钼靶和超声检查结果显示正常的健康女性作为健康对照,于确诊后收集患者外周静脉血与新鲜标本及健康对照的外周静脉血提取miRNA,进行RT-PCR检测血浆及组织miRNA-155表达水平;用放射免疫方法测定血清孕酮(P4)水平;用免疫组织化学染色法检测孕激素受体(PR)表达阳性率。结果乳腺癌患者的癌组织中miRNA-155表达呈现上调(8.72±1.17),显著高于癌旁组织(2.11±0.66),差异有统计学意义(t=78.968,P<0.001);患者血清miRNA-155表达也呈现上调(5.98±2.50),与癌组织中的表达水平呈现相关关系,有统计学意义(r=0.673,P=0.028),相对于健康对照组的血清miRNA表达(2.30±0.96)也表现出升高的差异,有统计学意义(t=20.540,P<0.001);两组人群的PR表达与血清miRNA-155呈现负相关关系(r=-0.096,P=0.043);miRNA-155在≥50岁患者、淋巴结未转移者、ER阴性者,HER2阳性者及TMN分期早期患者中,表达水平明显较高,且差异有统计学意义(P<0.05);PR表达水平明显呈现出与miRNA-155表达水平相反的趋势。结论miRNA-155及PR表达负相关,与乳腺癌发生显著相关,可以作为诊断预测的标志物。