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1.
目的研究喉癌肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)外泌体表达下调的miRNA-656-3p对喉癌细胞生长和侵袭能力的影响以及丹参酮ⅡA对其调控作用。方法将CAFs外泌体miRNA-656-3p表达上调,制备外泌体上清,检测其对喉癌细胞体外增殖、侵袭能力及细胞周期的影响。检测中药提取物丹参酮ⅡA是否具有类似的上调CAFs外泌体miRNA-656-3p表达的作用,其作用后的CAFs外泌体上清是否具有类似的抑制喉癌增殖和侵袭能力的功效。结果过表达miR-656-3p的CAFs外泌体上清能抑制喉癌细胞的体外增殖和侵袭能力,抑制CCND2的表达,并将喉癌细胞阻滞在G0/G1期。而丹参酮ⅡA也可以上调CAFs外泌体中miR-656-3p的表达水平,其作用后的CAFs外泌体能发挥类似的抑制喉癌细胞体外增殖和侵袭的功效。结论喉癌CAFs外泌体miRNA-656-3p的表达下调促进喉癌细胞的生长和侵袭能力,丹参酮ⅡA可上调CAFs外泌体miR-656-3p的表达,通过后者抑制喉癌细胞的生长和侵袭能力。  相似文献   
2.
目的:探究miR-145 对血管平滑肌细胞(VSMC)的生物活性及对SM22α mRNA 表达的作用。方法: VSMC分为3 组,增殖VSMC组( 增殖组)、增殖VSMC + 转染miR-145-NC 组( 空载体组)、增殖VSMC+转染 miR-145 组( 增殖转染组)。采用RT-PCR 检测VSMC中SM22α mRNA、miR-145 的表达;免疫印迹检测cyclin E、p27 蛋白水平;Transwell 小室检测VSMC侵袭能力;MTT检测VSMC活力;流式细胞术检测VSMC凋亡率。 结果:增殖组VSMC中SM22α mRNA、miR-145 水平与空载体组相比数值较为接近;与增殖组及空载体组相比, 增殖转染组VSMC中miR-145、SM22α mRNA 表达升高。增殖组VSMC中cyclin E、p27 蛋白水平与空载体组相 比无差异;增殖转染组cyclin E 蛋白水平低于空载体组、增殖组,p27 蛋白水平高于空载体组、增殖组。增殖组 VSMC迁移数量与空载体组相比无差异;增殖转染组VSMC迁移数量明显低于空载体组、增殖组。增殖组与空载 体组VSMC在不同时间点的OD 值均较为接近;增殖转染组OD 值在不同时间点均低于空载体组、增殖组。增殖 组VSMC凋亡率与空载体组数值接近,组间比较差距较小;增殖转染组VSMC凋亡率较空载体组和增殖组升高。 结论:过表达miR-145 通过促进SM22α 水平增加,抑制血管平滑肌细胞的增殖,并促进其凋亡。  相似文献   
3.
目的:探讨miRNA调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖的潜在机制。方法:纳入2019年06月至2020年06月在我院接受治疗的食管癌患者6例,采集其食管癌组织和癌旁组织后抽取总RNA进行miRNA高通量测序。在食管癌细胞CaES-17中过表达食管癌组织和癌旁组织中的差异miRNA,检测食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖情况。通过TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验分析miRNA的靶标mRNA。结果:6例患者的食管癌组织和癌旁组织通过高通量测序发现hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-6818-5p、hsa-miR-525-5p、hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-586、hsa-miR-1286、hsa-miR-365b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-4317在食管癌组织和癌旁组织中的表达差异在8倍以上,并且食管癌组织均高于癌旁组织。干扰上述miRNA后,发现干扰miR-586能够抑制食管癌细胞CaES-17的增殖水平和迁移水平,提高凋亡水平。过表达miR-586后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验发现miR-586靶向TLR7的3' 端非编码区。敲低TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。过表达TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平上升,增殖水平和迁移水平下降。但是,同时干扰miR-586和敲低TLR7后,相比于对照食管癌细胞,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平和增殖水平无显著差异。结论:miR-586通过靶向TLR7的3' 端非编码区,降解了TLR7的mRNA,抑制了TLR7的蛋白翻译,最终抑制了食管癌细胞CaES-17的凋亡、促进了食管癌细胞CaES-17的增殖。  相似文献   
4.
目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2(FGF2)对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达。将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA 空转组(miR-NC组)、miR-152 过表达组(miR-152 mimics组)、miR-152 抑制组(miR-152 inhibitor组)、FGF2过表达空转组(pcDNA3.1-NC组)、FGF2过表达组(pcDNA3.1-FGF2组)和miR-152过表达+FGF2过表达组(miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组)。通过qPCR检测A549细胞系中miR-152和FGF2的表达水平;细胞克隆和Transwell小室实验分别检测A549细胞系的增殖和侵袭能力;采用双荧光报告基因法验证miR-152与FGF2结合情况;Western印迹法检测A549细胞系中FGF2、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ/Ⅰ、beclin1和p62的表达量。结果:qPCR结果显示,与正常上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌A549细胞中miR-152的表达量显著降低(P<0.01),而FGF2的表达量显著增加(P<0.01)。TargetScan生物信息学软件预测显示miR-152与FGF2的3′UTR结合,双荧光报告基因检测结果显示,miR-152与FGF2直接结合。细胞克隆和Transwell小室实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimics组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著减低(P<0.05),miR-152 inhibitor组的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组中A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05)。Western印迹结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimic组FGF2和p62蛋白表达显著降低(P<0.05),但LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著增加(P<0.05),而miR-152 inhibitor组结果与之相反。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),而LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达量显著降低(P<0.05)。与miR-152 mimics组比较,miR-152+ pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),LC3B Ⅱ/Ⅰ和beclin1蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论:miR-152靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系自噬,从而降低增殖侵袭能力,可成为肺癌临床治疗的新靶点。  相似文献   
5.
6.
Background: Triple negative breast cancer (TNBC) is associated with poor prognosis, aggressive phenotype(s) of tumours, partial chemotherapy response, and lack of clinically proven therapies. MicroRNAs (miRNAs) can target and modulate key genes that are involved in TNBC chemotherapy. Deregulated miRNA expression is highly involved in anti-cancer drug resistance phenotype and thus, miRNAs tend to be promising candidates for prediction of chemotherapy response and recurrence. Aim: This study aimed to investigate the expression levels of selected miRNAs (miR-21, miR-27b, miR-34a, miR-182, miR-200c and miR-451a) in cancerous and normal adjacent tissues of TNBC patients and to correlate with the clinicopathological data. Methods: Forty-one (41) FFPE tissue block of histopathologically confirmed TNBC patients was collected. Total RNA from the cancerous and adjacent non-cancerous tissues were isolated, transcribed, and pre-amplified. The relative expression level of miRNAs in tumour and normal adjacent tissues of TNBC patients was analysed using qRT-PCR. Results: Out of six miRNAs studied, the relative expression of miR-27b and miR-451a were found to be significantly lower in cancerous as compared to normal adjacent tissues of TNBC patients. In addition, a significant down regulation of miR-451a was also observed in infiltrating ductal carcinoma subtype, stages I and II, in both grade II and III, premenopausal and postmenopausal as well as in those with positive axillary lymph node metastases. Conclusion: The results suggest the possible utilization of miR-27b and miR-451a expression levels as potential predictive risk markers for TNBC patients undergoing TAC chemotherapy.  相似文献   
7.
目的:探究微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对卵巢癌(ovarian cancer, OC)HO8910细胞侵袭、迁移及TβR-Ⅱ蛋白水平的影响。方法:将某大学研究实验室细胞库提供的OC细胞HO8910分为ZW组(无转染HO8910细胞)、ZN组(转染miR-145-NC)、YJ组(转染miR-145 mimics)。采用qRT-PCR、MTT、Hoechst33258荧光染色、Transwell小室、细胞划痕、Western blot检测miR-145、转化生长因子βⅡ型受体(transforming growth factorβtypeⅡreceptor, TβR-Ⅱ)表达、细胞活力、凋亡、侵袭、迁移能力以及TβR-Ⅱ蛋白量。结果:YJ组HO8910细胞中miR-145的表达量最高,提示转染成功。YJ组TβR-Ⅱ表达量较其他两组对比明显提高(P<0.05),ZW组、ZN组miR-145、TβR-ⅡmRNA表达水平无明显差异(P>0.05);培养48、72、96 h, YJ组细胞活力较ZW组、ZN组比较明显减弱(P<0.05),随着时间的延续,培养96 h三组细胞活力均优于48、72 h(P<0.05);YJ组与ZW组、ZN组对比细胞凋亡率明显提高(P<0.05);ZW组HO8910细胞荧光强度最弱,细胞凋亡率最低,ZW组与ZN组对比无明显差异(P>0.05);三组细胞侵袭、迁移数量相比差异较大(P<0.05),其中YJ组侵袭、迁移数量少于其他两组(均P<0.05),ZN组与ZW组的细胞侵袭、迁移数量无明显差异(P> 0.05);YJ组TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZU组、ZN组对比明显升高(P<0.05),YJ组转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)蛋白表达量与其他两组对比均降低(P<0.05),ZW组TGF-β、TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZN组对比差异较小(P> 0.05)。结论:通过上调miR-145对抑制OC细胞迁移、侵袭等生物活性发挥积极作用,分析原因可能与靶向调控TβR-Ⅱ蛋白相关。  相似文献   
8.
目的:探讨丹皮酚对Hela细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法:使用不同浓度(50、100、200 和400 mg/L)丹皮酚处理Hela细胞株,分为正常对照组(NC组)、不同浓度丹皮酚组、miR-NC组、miR-21组、丹皮酚+miR-NC和丹皮酚+miR-21组。PI3K的激动剂740Y-P (25 μg/mL)加入丹皮酚组、 NC组,分别定义为丹皮酚+740Y-P组、740Y-P组。MTT检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞miR-21表达水平;Western blot检测细胞PI3K/AKT信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、MMP9水平。结果:丹皮酚可抑制Hela细胞增殖能力(P<0.05),抑制作用与浓度呈正相关。选择200 mg/L的丹皮酚进行后续研究。与NC组比较,丹皮酚组侵袭及迁移细胞数量、MMP2蛋白、MMP9蛋白、miR-21表达水平明显降低(P<0.01)。与NC组比较,丹皮酚组细胞凋亡率增加,G1期延长,S期、G2期缩短(P<0.01)。与NC组、miR-NC组相比,48、72 h 时miR-21组细胞活力明显升高(P<0.05),克隆、侵袭及迁移细胞数量明显升高(P<0.05)。与丹皮酚组、丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组克隆、侵袭及迁移细胞数升高(P<0.05)。与NC组比较,丹皮酚组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显下降(P<0.01);与丹皮酚+miR-NC组比较,丹皮酚+miR-21组细胞p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与丹皮酚组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数升高(P<0.01),与740Y-P组比较,丹皮酚+740Y-P组克隆、侵袭及迁移细胞数降低(P<0.01)。结论:丹皮酚可下调miR-21,抑制PI3K/AKT通路,进而抑制宫颈癌细胞的增殖、侵袭及迁移。  相似文献   
9.
目的 旨在探究涤痰活血舒痹汤(Ditan Huoxue Shubi Decoction,DHS)与microRNA-148a(miR-148a)的调控关系以及其在心肌缺血再灌注损伤中的分子作用机制。方法 将H9c2细胞培养后分为对照组、缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)组、H/R+空白血清组、H/R+DHS含药血清组、H/R+DHS含药血清+miR-148a拮抗剂组、H/R+DHS含药血清+OE-NC组和H/R+DHS含药血清+TXNIP过表达质粒组。采用CCK-8检测H9c2细胞增殖,TUNEL染色检测H9c2细胞凋亡。运用Western blot检测H9c2细胞中凋亡和自噬相关蛋白表达。利用 qRT-PCR检测miR-148a的表达。Western blot检测靶蛋白TXNIP的表达。结果 与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力下降[(97.75±5.58)%比(69.72±8.80)%,P < 0.01]、细胞凋亡和自噬水平上升。与H/R+空白血清组比较,H/R+DHS含药血清组miRNA-148a表达上调[(1.04±0.25)比(2.45±0.39),P < 0.01],H9c2细胞活力增加[(97.75±7.94)%比(135.98±10.45)%,P < 0.01]并且细胞凋亡和自噬显著下降(P < 0.05)。H/R+DHS含药血清+miR-148a拮抗剂组细胞内miRNA-148a表达下调[(2.18±0.25)比(0.66±0.12),P < 0.001],同时靶基因TXNIP表达上调。与H/R+DHS含药血清+OE-NC组比较,H/R+DHS含药血清+TXNIP过表达质粒组的TXNIP表达水平、细胞凋亡和自噬水平显著上升(P < 0.05)。结论 涤痰活血舒痹汤能够减轻H/R引起的心肌细胞H9c2细胞的损伤,其作用机制可能是通过升高miR-148a水平而减低TXNIP表达来降低损伤的心肌细胞自噬和凋亡水平来实现的。  相似文献   
10.
目的:探讨鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p的表达水平及临床意义。方法:选取2017年01月至2020年09月我院收治的95例鼻咽癌患者和45例健康对照组作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141-3p及miR-155-3p表达水平。应用受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平对鼻咽癌的诊断价值。Pearson相关分析分析鼻咽癌患者血清中miR-141-3p与miR-155-3p表达水平的相关性。结果:鼻咽癌组血清中miR-141-3p(3.25±1.28 vs 0.64±0.17)及miR-155-3p(1.47±0.83 vs 0.35±0.08)表达水平均明显高于对照组(P均<0.001)。鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平升高与临床分期高、分化程度低、淋巴结转移及远处转移相关(P均<0.001)。ROC曲线显示,血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平诊断鼻咽癌的最佳截断值分别为2.18、0.97,两项联合诊断鼻咽癌的曲线下面积(0.940,95%CI:0.877~0.998)最大,其敏感度和特异度为97.0%和86.2%。相关分析显示,鼻咽癌患者血清中miR-141-3p与miR-155-3p表达水平呈正相关(r=0.853,P<0.001)。结论:鼻咽癌患者血清中miR-141-3p及miR-155-3p表达水平明显升高,有望作为鼻咽癌诊断的潜在标志物。  相似文献   
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