lncRNA CYTOR靶向调控miR-503/CCNE1信号轴促进上皮性卵巢癌细胞增殖北大核心

目的:探讨细胞骨架调节剂(lncRNA cytoskeleton regulator,CYTOR)是否通过靶向调控miR-503来促进细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)影响上皮性卵巢癌增殖。方法:实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测CYTOR在不同临床分期、病理分级和有无淋巴结转移患者人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;starBase数据库(网址:http://starbase.sysu.edu.cn/)预测分析CYTOR和miR-503以及miR-503与CCNE1之间的关系,同时荧光素酶实验进行验证;RT-qPCR和免疫荧光分别检测miR-503与CCNE1在人上皮性卵巢癌组织、癌旁组织和正常组织以及不同卵巢癌细胞中的表达;RNA转染技术在A2780中细胞分别沉默CYTOR、过表达miR-503和沉默CCNE1表达,CCK-8检测各组细胞增殖能力变化;RT-qPCR和免疫荧光检测沉默CYTOR后miR-503和CCNE1的表达以及过表达miR-503后CCNE1的表达。结果:CYTOR和CCNE1在上皮性卵巢癌组织中表达增加,同时在临床分期III-IV期、病理分级G_(3)级、淋巴结转移阳性患者肿瘤组织中表达同样显著增加且导致卵巢癌患者术后预后较差;通过数据库分析CYTOR可直接靶向抑制miR-503,而miR-503可直接靶向抑制CCNE1表达,双荧光素酶实验结果与之相同;CYTOR和CCNE1促进上皮性卵巢癌增殖,而miR-503抑制上皮性卵巢癌增殖作用。结论:lncRNA CYTOR通过调控miR-503/CCNE1轴促进上皮性卵巢癌的增殖。     

Out of the boxes,out of the silos: The need of interdisciplinary collaboration to reduce poor-quality medical products in the supply chain

In this paper, we argue that understanding and addressing the problem of poor-quality medical products requires a more interdisciplinary approach than has been evident to date. While prospective studies based on rigorous standardized methodologies are the gold standard for measuring the prevalence of poor-quality medical products and understanding their distribution nationally and internationally, they should be complemented by social science research to unpack the complex set of social, economic, and governance factors that underlie these patterns. In the following sections, we discuss specific examples of prospective quality surveys and of social science studies, highlighting the value of cross-sector partnerships in driving high-quality, policy-relevant research in this area.     

LncRNA ANRIL靶向miR-195对HCT116细胞及裸鼠移植瘤放射增敏实验研究

目的 探究LncRNA ANRIL对结直肠癌HCT116细胞体外体内放射增敏作用及机制。方法 qPCR检测ANRIL表达。将阴性对照siRNA、ANRIL siRNA、miR-NC mimic、miR-195 mimic、miR-NC inhibitor、miR-195 inhibitor转染至HCT116细胞中分别记为阴性对照、沉默ANRIL、过表达miR-NC、过表达miR-195、抑制miR-NC、抑制miR-195组,以不做任何处理的HCT116细胞为空白对照组。克隆形成实验检测放射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡,StarBase预测ANRIL下游miRNAs,双荧光素酶报告基因实验进一步验证。裸鼠皮下移植瘤实验检测ANRIL对照射后移植瘤生长影响。结果 沉默ANRIL组细胞存活分数较阴性对照组降低(P<0.05),其放射增敏比为1.52。沉默ANRIL+4Gy组细胞凋亡率较阴性对照+4Gy组增加[(27.86±2.78)%︰(12.06±1.46)%,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤实验结果显示在13、16、19、22、25天时阴性对照组肿瘤体积比沉默ANRIL组降低[(234±66)、(273±63)、(296±72)、(321±85)、(403±94) mm³与(357±79)、(485±124)、(617±143)、(764±174)、(985±221) mm³,P<0.05]。miR-195是ANRIL靶基因,抑制miR-195可逆转沉默ANRIL对HCT116细胞放射增敏和凋亡促进作用及移植瘤生长抑制作用。结论 LncRNA ANRIL通过调控miR-195表达来调节HCT116细胞放射敏感性,可能为临床结直肠癌放疗提供一个新的增敏靶点。     

miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的机制研究

目的:探讨miR-145调控肝癌腹水模型Th9细胞升高的作用机制。方法:构建小鼠H22肝癌腹水模型。造模两周后处死小鼠并分离出脾脏组织，流式细胞术分析肝癌腹水组（MA组）与正常对照组（Control 组）小鼠脾脏Th9细胞表达水平。ELISA法检测脾脏IL-9表达水平。RT-PCR法检测脾脏miR-145表达水平。Western Blot法检测脾脏中PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α相关蛋白表达水平。分选小鼠脾脏CD4+T细胞，随机分为miR-145 mimics组和NC组，分别应用miR-145-5P mimics、阴性对照寡核苷酸（negative control，NC）进行转染，RT-PCR检测各组miR-145、HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达水平。结果:与Control 组相比，MA组Th9细胞及其细胞因子IL-9表达均升高（P<0.05），miR-145表达降低（P<0.05），p-PI3K、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p-P70S6K、HIF-1α蛋白均升高（P<0.05）。与NC组相比，miR-145 mimics组miR-145显著升高，HIF-1α mRNA及IL-9 mRNA表达下降。结论:肝癌腹水中Th9细胞升高可能与miR-145下降导致的PI3K/Akt/mTOR/P70S6K/HIF-1α通路激活有关。     

miR-513a-5p慢病毒载体的构建及其对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响

目的:构建miR-513a-5p慢病毒过表达载体，转染人骨肉瘤细胞株，观察miR-513a-5p对人骨肉瘤细胞放疗敏感性的影响。方法:PCR法扩增人miR-513a-5p基因，克隆入pLentis-CMV-GFP-MCS-PGK-PURO载体获得重组质粒pLentis-miR513a，双酶切鉴定并测序后将正确的重组质粒和对照质粒转染293FT细胞制备慢病毒，分别转染骨肉瘤HOS和U2OS细胞，qRT-PCR法及荧光显微镜鉴定转染结果。克隆形成实验、MTT法检测miR-513a-5p高表达HOS和U2OS细胞在X射线照射下细胞存活情况。结果:双酶切及测序结果确定成功构建miR-513a-5p慢病毒载体pLentis-miR513a。qRT-PCR结果提示，转染骨肉瘤细胞株后miR-513a-5p表达显著升高。克隆形成实验结果显示miR-513a-5p高表达后骨肉瘤细胞在X射线照射下细胞增殖减慢。MTT结果提示miR-513a-5p高表达骨肉瘤细胞经X射线照射后细胞存活减少。结论:成功构建了miR-513a-5p慢病毒载体，建立了高效稳定表达miR-513a-5p的骨肉瘤细胞株，高表达miR-513a-5p能显著增加X射线照射后骨肉瘤细胞的放疗敏感性。     

circRNA_001569通过miR-145/HBXIP轴影响乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨 circRNA_001569 通过 miR-145/HBXIP 轴在乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移中发挥的作用。方法:收集2016年1月至2019年1月期间衡水市人民医院收治的30例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织。qPCR检测circRNA_001569在乳腺癌组织、癌旁组织以及细胞系中的表达。生物信息学工具预测miR-145的靶基因，RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation，RIP）和双荧光素酶报告基因实验检测 miR-145 或靶基因之间的相互作用 ；向乳 腺 癌 MDA-MB-231 和 MCF-7细胞中转染si-circRNA_001569、miR-145 mimics或miR-145 inhibitor，建立基因过表达或沉默的细胞模型，qPCR和Western blotting分别检测转染对相关基因和蛋白表达的影响，CCK-8法、Transwell实验检测转染对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中，circRNA_001569 和 HBXIP 均呈高表达、miR-145 呈低表达。RIP 分析和双荧光素酶实验证实了 miR-145 与circRNA_001569和HBXIP之间的靶向关系；circRNA_001569或HBXIP过表达促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移（均 P<0.01），而 miR-145 过表达起相反的作用（均 P<0.01）。结论:circRNA_001569 可能通过下调 miR-145 的表达、上调HBXIP的表达从而促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

LncRNA UCA1对肺癌细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究长链非编码RNA (LncRNA) UCA1对肺癌细胞增殖、凋亡及放射敏感性影响及其机制。方法 运用qRT-PCR法检测肺癌细胞A549、H1299和人正常肺细胞HBE中UCA1、miR-513a-5p表达。将si-con组(转染si-con)、si-UCA1组(转染si-UCA1)、miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、IR+si-con组(转染si-con+照射)、IR+si-UCA1组(转染miR-NC+照射)、IR+miR-513a-5p组(转染miR-513a-5p mimics+照射)、IR+miR-NC组(转染miR-NC+照射)、IR+si-UCA1+anti-miR-513a-5p组(共转染si-UCA1和anti-miR-513a-5p+照射)均用脂质体法转染至A549、H1299细胞,然后部分组进行4Gy照射。MTT法检测各组细胞增殖,克隆形成实验检测细胞增敏比,流式细胞术检测各组细胞凋亡,双荧光素没报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果 与HBE细胞相比,A549、H1299细胞中UCA1表达显著升高(P<0.05),miR-513a-5p表达显著降低(P<0.05)。抑制UCA1、过表达miR-513a-5p均可明显抑制A549、H1299细胞增殖、促进凋亡、提高放射敏感性(放射增敏比为1.897、2.146和1.615、1.872)。miR-513a-5p可抑制野生型UCA1细胞的荧光活性,且UCA1可负向调控miR-513a-5p的表达。抑制miR-513a-5p可逆转抑制UCA1对细胞的放射敏感性的增强作用。结论 抑制LncRNA UCA1可增强放射对肺癌细胞敏感性,其机制可能与靶向抑制miR-513a-5p有关。     

miR-9通过靶向E盒结合锌指蛋白2调控小细胞肺癌的恶性生物学行为及其可能的机制

目的：探讨 miR-9 通过靶向 E 盒结合锌指蛋白 2（zinc finger E-box binding homeobox 2，ZEB2）对小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）细胞生物学行为的调控作用，分析miR-9在SCLC中的作用及其工作机制。方法：采用qPCR、WB和免疫组化方法检测于2018年2月至2019年11月于河北医科大学第四医院肿瘤内科接受手术治疗的67例SCLC患者癌组织及癌旁组织中ZEB2的表达。采用TargetScan预测miR-9的潜在靶基因并通过双荧光素酶报告基因试验、qPCR和WB法进行验证。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验检测miR-9和ZEB2 过表达对 NCI-H446 的生物学行为影响，WB法检测对细胞中E-cadherin，N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响。利用miR-9过表达NCI-H446细胞构建SCLC裸鼠移植瘤模型，观察miR-9对裸鼠移植瘤生长的影响。结果：SCLC组织中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织（P<0.01）。miR-9在ZEB2的3'' UTR上具有潜在的结合位点，与对照组相比，miR-9过表达组NCI-H446细胞中ZEB2的mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.01），细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降（P<0.05或P<0.01），促EMT蛋白表达减少，而同时过表达ZEB2能够逆转上述影响。体内实验中，miR-9过表达组移植瘤体积、重量均明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）。miR-9组裸鼠肿瘤组织中和ZEB2蛋白的表达均较对照组明显降低（P<0.01）。结论：miR-9通过靶向调控ZEB2从而抑制SCLC细胞的生物学行为以及NCI-H446裸鼠移植瘤的生长。     

miR-21的功能分析及其在结肠癌中的临床意义

目的:分析miR-21的功能及其在结肠癌中的临床意义。方法:采用miRWalk在线工具预测和筛选miR-21的靶基因，并使用DAVID分析靶基因的功能和信号通路；检测结肠癌患者和健康对照人群血清以及癌组织和癌旁组织标本的miR-21的表达水平；使用TCGA数据库中结肠癌的数据，分析miR-21表达水平与临床病理参数的关系以及与患者预后的关系。结果:共筛选出429个miR-21的靶基因，靶基因功能分析提示这些基因主要参与了正性调节代谢过程、蛋白结合等。结肠癌患者血清miR-21表达水平显著高于健康对照人群，差异有统计学意义（P<0.05）。TCGA数据显示，结肠癌组织中的miR-21表达水平与肿瘤的临床分期、肿瘤侵袭程度、淋巴结转移分期、远处转移分期无显著差异（P>0.05）。生存分析显示组织中高表达miR-21的患者其生存时间较低表达者短（P<0.05）。结论:miR-21调控多个肿瘤发生相关的基因，在结肠癌发生过程中具有重要的调控作用。结肠癌患者miR-21表达水平显著高于健康人群，且miR-21高表达的患者预后差。