基于UPLC特征图谱和Q-Marker量值传递评价经典名方半夏白术天麻汤颗粒剂的关键生产工艺

目的 基于特征图谱相关性和质量标志物（quality markers,Q-Marker）转移率评价半夏白术天麻汤（Banxia Baizhu Tianma Decoction,BBTD）颗粒剂的生产环节,明确关键控制点。方法 采用Acclaim^TM RSLC Lot Validation-120 C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,2.2 μm）进行分离,流动相为乙腈-水溶液,梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,检测波长235 nm,柱温30℃。以BBTD基准样品为参比,建立3批中试样品的UPLC指纹图谱,并进行相似度评价,分析Q-Marker在各生产环节的损失,评价生产工艺的合理性。结果 与BBTD基准样品相比,提取液、浓缩液、干膏粉、颗粒剂中均存在对应特征峰,以10种指标性成分及其总量表征的3批BBTD中试样品关键质量属性与其基准样品基本保持一致。结论 基于特征图谱和Q-Marker在各环节之间的量值传递,为经典名方BBTD制备工艺评价和质量控制提供了的理论依据。     

HPLC同时测定甘蒲祛斑凝胶中甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A的含量

目的: 建立同时测定甘蒲祛斑凝胶中甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A含量的方法。方法: 采用高效液相色谱法,Agilent HC-C₁₈色谱柱 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相0.05%磷酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~4 min,80%A;4~18 min,80%~65% A;18~22 min,65%~62% A;22~25 min,62% A,25~30 min,62%~55% A;30~35 min,55% A,35～45 min,55%~50% A;45~50 min,50%~55% A;50~60 min,55%~80% A),柱温30 ℃,流速0.8 mL·min^-1,检测波长276,368 nm。结果: 甘草素、异甘草素、甘草查尔酮A的线性范围分别为0.050 4~0.403 2 (r=1),0.039 4~0.315 2 (r=1),1.638~8.192 μg (r=0.999 9);甘草素平均回收率为98.81%,RSD 1.7%;异甘草素平均回收率为99.16%,RSD 1.2%;甘草查尔酮A平均回收率为97.68%,RSD 1.0%。结论: 该方法简便、灵敏度高、专属性强,可用于甘蒲祛斑凝胶中3种指标性成分的含量测定。     

Pharmacokinetics,biodistribution and bioavailability of isoliquiritigenin after intravenous and oral administration

Context: Isoliquiritigenin (ISL) has been shown to exhibit a variety of biological activities. However, there is little research on the pharmacokinetic behavior and tissues distribution of ISL.

Objective: Pharmacokinetics, biodistribution and bioavailability of ISL after intravenous and oral administration were determined by systematic investigation in Sprague–Dawley rats.

Materials and methods: ISL was dissolved in medicinal ethanol-Tween 80–0.9% sodium chloride saline in a volume ratio of 10:15:75. The ISL solution was injected in rats via a tail vein at a single dose of 10, 20 and 50?mg/kg and administered orally in rats at a single dose of 20, 50 and 100?mg/kg, respectively. Blood samples were collected at time intervals of 0.08, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2, 3, 6, 8 and 12?h after intravenous injection. Tissues of interests in mice were collected immediately at each determined time point (0.5, 1, 2, 3 and 6?h) after cervical dislocation.

Results: The dose-normalized AUC values were 7.3, 7.6 and 8.7?μg?×?h/ml (calculated based on the dose of 10?mg/kg) for intravenous doses of 10, 20 and 50?mg/kg, respectively. The elimination half-lifes (t_1/2λ) were 4.9, 4.6 and 4.8?h at 10, 20 and 50?mg/kg intravenous doses, respectively. The F values were 29.86, 22.70, 33.62% for oral doses of 20, 50 and 100?mg/kg, respectively. Liver, heart and kidney were major distribution tissues of ISL in mice. The plasma protein binding of ISL in rats was 43.72%.

Conclusion: The work may useful for further study of the bioactive mechanism of ISL.     

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL0μg／mL组,差异具有统计学意义（P＜0．05）;Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

异甘草素-多壁碳纳米管复合物的体外缓释行为

 目的 以异甘草素为模型药物，研究多壁碳纳米管（MWNTs）作为缓释载体的可行性。方法 通过氧化处理MWNTs，改善其表面性质，利用SEM表征了氧化后的MWNTs（o-MWNTs）的表面形貌，借助全自动快速比表面积及孔隙度分析仪表征了MWNTs的比表面积和孔结构，并探讨o-MWNTs-异甘草素复合物在不同释放介质中的缓释行为。结果 MWNTs经过氧化后制备得到的o-MWNTs-异甘草素复合物在2%十二烷基硫酸钠水溶液（2% SDS-水）和pH 6.8的2%十二烷基硫酸钠磷酸盐缓冲液（2% SDS-PBS）中缓释效果良好，分别达到42.03%和34.21%。o-MWNTs-异甘草素复合物在该2种溶出介质中的释放动力学基本符合Higuchi模型，释放良好。结论 MWNTs可作为潜在缓释材料。     

痹祺胶囊治疗类风湿性关节炎的药效研究及网络机制预测

目的 基于Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠模型和网络药理学方法探讨痹祺胶囊的药效作用及作用机制。方法 SD大鼠采用Ⅱ型胶原蛋白造模,造模成功大鼠随机分为模型组,痹祺胶囊（0.05、0.10、0.20、0.40 g/kg）组及泼尼松（10 mg/kg）组和雷公藤总苷（10 mg/kg）组,连续给药15 d。持续监测大鼠体质量、足趾肿胀度和关节炎评分,苏木素-伊红染色考察大鼠踝关节病理变化,ELISA法测定血清细胞因子含量,初步评价痹祺胶囊治疗效果。选择痹祺胶囊中39个化合物为研究对象,依据反向药效团匹配方法和TCMSP、Uniprot等数据库预测化合物作用靶点,与通过OMIM、Dis Ge Net等数据库收集的RA相关靶点相互交互,将交互靶点借助Omicsbean、STRING等数据库平台对获得靶点进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,利用Cytoscape软件构建“药材-化合物-靶点-通路-功效-疾病”网络,预测其可能的作用机制...     

红芪中5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞和成骨细胞成骨分化的影响

目的研究红芪中毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷、异甘草素和美迪紫檀素5种黄酮类成分对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)和颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROBs)成骨性分化的影响。方法贴壁分离法培养rBMSCs;酶消解法分离培养ROBs;MTT法检测rBMSCs和ROBs细胞的增殖情况;试剂盒检测rBMSCs和ROBs的碱性磷酸酶(ALP)活性和Ca~(2+)含量;茜素红染色法检测矿化结节形成。结果 5种成分均能不同程度促进rBMSCs和ROBs的增殖,提高ALP活性,增加Ca~(2+)含量,增加钙化结节面积和数量(P0.05)。其中毛蕊异黄酮促进rBMSCs的成骨分化作用最佳,美迪紫檀素促进ROBs的成骨分化作用最佳,毛蕊异黄酮次之。结论这5种黄酮类成分对rBMSCs和ROBs的成骨功能均有一定程度地改善作用,而毛蕊异黄酮对2种细胞表现的成骨活性均较佳,可发展作为良好的骨诱导活性因子。     

异甘草素对人肾透明细胞癌786-O细胞抗癌作用及分子机制

目的:研究异甘草素(isoliquiritigenin,ISL)对人肾透明细胞癌786-O细胞的抗癌作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法:通过噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测ISL(0,10,25,50,75,100μmol·L~(-1))对786-O细胞增殖的作用;细胞划痕和Transwell实验检测ISL对786-O细胞迁移、侵袭能力的影响;吖啶橙染色,Ad-GFP-LC3转染实验观察细胞自噬状态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白的表达,并分析磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路变化,探讨其可能的作用机制。结果:MTT比色法结果显示,与空白组比较,ISL能够明显抑制786-O细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性(P0.05);划痕和Transwell实验结果表明,与空白组比较,ISL能够抑制785-O细胞的迁移和侵袭(P0.05);吖啶橙染色和Ad-GFP-LC3转染实验表明ISL能够诱导786-O细胞发生自噬。此外,与空白组比较,ISL能够诱导细胞内自噬标志物-Ⅱ(LC3-Ⅱ),自噬相关蛋白Beclin1,Atg5蛋白表达(P0.05),并显著下调p62蛋白表达(P0.05),当加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)可逆转上述现象(P0.05);同时ISL能够抑制Akt,m TOR的磷酸化水平(P0.05),加入抑制剂LY294002和雷帕霉素(rapamycin,Rap),LC3-Ⅱ,Beclin1,Atg5蛋白表达明显上调(P0.05),p62蛋白表达明显下调(P0.05)。结论:ISL能够抑制肾透明细胞癌786-O细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路诱导细胞发生自噬。     

异甘草素和Flutamide联合应用对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用

目的观察异甘草素(ISL)和Flutamide联合应用对人前列腺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析Bcl-2表达。结果ISL和不同浓度Flutamide联合用药比单独应用Flutamide对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用明显增强(P<0.01),同时显著下调Bcl-2基因表达,增加癌细胞凋亡。结论ISL和Flutamide联合应用对前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用明显增强,其机制可能与下调Bcl-2基因表达及增加癌细胞凋亡有关。