枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱及10种指标成分含量测定研究

目的建立枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱分析方法和复方中10种指标成分(辛弗林、槲皮素、桂皮酸、厚朴酚、柚皮苷、腺苷、香豆素、橙皮苷、和厚朴酚、新橙皮苷)含量测定方法,开展相关评价分析。方法采用HPLC法建立枳实薤白桂枝汤指纹图谱,开展相似度评价研究;测定复方中10个指标成分,分析复方中药材不同配伍对其量的变化影响;采用聚类分析等化学计量学方法,对获取相关数据进行分析,评价枳实薤白桂枝汤的质量控制相关指标的影响和价值。结果 10批样品的相似度在0.376～0.990,部分批次相似度大于0.9(5批),说明10批样品相似度差异较大。10批样品中S1～S3、S5、S6、S8、S10为一组,S4、S9为一组,S7单独为一组。共标定了30个特征峰,经主成分分析,主成分1～6是影响药材样品质量评价的主要因子;30个特征峰中对样品分组起关键作用的成分为21(新橙皮苷)、26、29(和厚朴酚)、3、23、17、30(厚朴酚)、5、24(香豆素)、28和7。含量测定结果显示,除槲皮素外,其余9种成分在测定的质量浓度范围内线性关系、精密度、稳定性和重复性良好;不同配伍会对药材中相关成分产生增加或抑制溶出的作用。结论所建立的HPLC方法可用于同时测定枳实薤白桂枝汤中10种化学成分的含量,该方法高效、准确、重复性好,可用于枳实薤白桂枝汤的质量控制和评价。     

厚朴超临界CO_2提取工艺优化及提取物抗氧化活性研究

目的优选超临界CO_2提取厚朴有效成分的工艺并探讨厚朴超临界CO_2提取物的抗氧化活性。方法采用HPLC法测定厚朴超临界CO_2提取物中厚朴酚与和厚朴酚的含量,正交试验优选厚朴超临界CO_2提取工艺,MTT法检测提取物抗氧化活性。结果厚朴酚优化工艺为萃取压力25 MPa,萃取温度55℃,CO_2用量30 kg;和厚朴酚最佳提取工艺压力15 MPa、萃取温度50℃、CO_2用量25 kg。厚朴超临界CO_2提取物具有抗氧化活性,且分离参数不同,抗氧化活性有显著差异。结论在所优选的提取工艺条件下,厚朴酚、和厚朴酚的提取效率较高,重复性较好,工艺稳定可行,提取物具有良好的抗氧化活性。     

载和厚朴酚介孔二氧化硅包覆聚吡咯纳米粒的制备研究

目的制备载和厚朴酚(HK)介孔二氧化硅(MSN)包覆聚吡咯纳米粒(PPy@MSN-HK),考察其体外释放特性。方法首先制备聚吡咯纳米粒,然后在其表面包裹MSN壳层,再吸附HK,即得PPy@MSN-HK。依次从透射电镜图、粒径、Zeta电位、载药量、包封率、红外光谱分析、体外光热研究及体外释放度等方面进行评价,采用相似因子(f2)法分析释放曲线,并运用多种常用数学模型拟合溶出曲线。结果透射电镜图显示,制备的MSN包覆聚吡咯纳米粒(PPy@MSN)粒径大小均一,分布均匀,平均粒径为(220.4±4.2)nm,多分散系数为0.042±0.010,Zeta电位为(-21.1±0.8)m V,载药量为(2.58±0.53)%,包封率为(75.04±0.95)%。体外光热实验结果表明,在照射激光功率密度不变的情况下,随着纳米粒质量浓度逐渐增大,纳米粒混悬液温度变化值明显增大,说明PPy@MSN具有良好的光热效应。体外释放实验表明,PPy@MSN-HK与HK原料药的释放曲线不相似,分别以Ritger-Peppas、Logistic方程拟合最佳。原料药释放曲线最接近Ritger-Peppas方程(R2=0.997 32);PPy@MSN-HK释放曲线用Logistic方程拟合最好(R~2=0.997 88)。结论采用水溶液法成功制备了PPy@MSN-HK,为肿瘤治疗提供新的给药策略。     

和厚朴酚对哮喘小鼠肺组织炎症反应的干预作用及其机制

目的：探讨和厚朴酚（HNK）对哮喘小鼠肺组织炎症反应的影响,阐明其干预作用及相关机制。方法：选取健康雌性C57BL/6J小鼠20只,随机分为对照组、模型组、地塞米松（DXM）组和HNK组,每组5只。采用鸡卵清蛋白（OVA）联合氢氧化铝[Al（OH）₃]悬液腹腔注射致敏和OVA滴鼻激发构建哮喘小鼠模型,在激发前30 min分别对DXM组和HNK组小鼠予以腹腔注射DXM和HNK溶液,模型组小鼠予以等量生理盐水。处死小鼠后取小鼠肺组织,HE染色观察评估肺组织病理形态表现;收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行快速迪夫染色,观察炎性细胞浸润程度;ELISA法检测各组小鼠血清中白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素17（IL-17）水平,比色法检测各组小鼠肺组织匀浆中丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性,Western blotting法检测各组小鼠肺组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、核因子κB（NF-κB）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和H2AX组蛋白（γH2Ax）表达水平,检测各组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度。结果：与对照组比较,模型组小鼠气道上皮细胞脱落坏死数量明显增多,气道管壁增厚及气道旁炎症细胞浸润程度明显增加;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠上述表现减轻,而HNK组和DXM组小鼠肺组织病理改变表现相似。与对照组比较,模型组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平升高（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平降低（P<0.05）;而HNK组小鼠血清中IL-4、IL-6和IL-17水平与DXM组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织匀浆中MDA水平升高（P<0.05）,而SOD和GSH-Px活性降低（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织匀浆中MDA水平降低（P<0.05）,而SOD和GSH-Px活性升高（P<0.05）;HNK组小鼠MDA水平和SOD及GSH-Px活性与DXM组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3和γH2Ax蛋白表达水平降低（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平升高（P<0.05）;HNK组小鼠肺组织中p-JNK、NF-κB、Caspase-3、γH2Ax和Bcl-2蛋白表达水平与DXM组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较,模型组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度明显增强;与模型组比较,DXM组和HNK组小鼠肺组织中γH2Ax免疫荧光强度减弱,HNK组小鼠γH2Ax免疫荧光强度与DXM组接近。结论：HNK可在一定程度上抑制哮喘小鼠的肺组织损伤及炎症反应,其机制可能与其抑制氧化应激反应及DNA损伤有关。     

Honokiol,a Lignan Biphenol Derived from the Magnolia Tree,Inhibits Dengue Virus Type 2 Infection

Dengue is the most widespread arbovirus infection and poses a serious health and economic issue in tropical and subtropical countries. Currently no licensed vaccine or compounds can be used to prevent or manage the severity of dengue virus (DENV) infection. Honokiol, a lignan biphenol derived from the Magnolia tree, is commonly used in Eastern medicine. Here we report that honokiol has profound antiviral activity against serotype 2 DENV (DENV-2). In addition to inhibiting the intracellular DENV-2 replicon, honokiol was shown to suppress the replication of DENV-2 in baby hamster kidney (BHK) and human hepatocarcinoma Huh7 cells. At the maximum non-toxic dose of honokiol treatment, the production of infectious DENV particles was reduced >90% in BHK and Huh7 cells. The underlying mechanisms revealed that the expression of DENV-2 nonstructural protein NS1/NS3 and its replicating intermediate, double-strand RNA, was dramatically reduced by honokiol treatment. Honokiol has no effect on the expression of DENV putative receptors, but may interfere with the endocytosis of DENV-2 by abrogating the co-localization of DENV envelope glycoprotein and the early endosomes. These results indicate that honokiol inhibits the replication, viral gene expression, and endocytotic process of DENV-2, making it a promising agent for chemotherapy of DENV infection.     

基于多指标质量差异关键属性优化厚朴产地加工“发汗”工艺

目的基于厚朴"发汗"前后多指标质量差异关键属性优化厚朴"发汗"工艺。方法采用HPLC法同时测定"发汗"厚朴中紫丁香苷、木兰花碱、厚朴苷A、和厚朴酚及厚朴酚含量,采用CRITIC-层次分析法(CRITIC-AHP)复合加权法计算权重系数,多指标综合评分,结合Box-Behnken响应面法考察水煮时间、堆积天数、干燥温度及干燥时间对"发汗"厚朴质量的影响,优选厚朴"发汗"工艺。结果厚朴较佳发汗工艺为取厚朴药材,沸水水煮2min,堆积发汗1d,晾晒7 d后于45℃烘箱内干燥36 h。结论采用多指标含量测定、CRITIC-AHP复合加权法结合响应面法优厚朴"发汗"工艺,为厚朴产地加工"发汗"工艺考察提供参考。     

和厚朴酚对小鼠背根神经节河豚毒素敏感型钠电流的影响

采用全细胞膜片钳技术,观察和厚朴酚(honokiol,Hnk)对急性分离的小鼠背根神经节上河豚毒素敏感型(TTX-S)钠电流及其通道动力学的影响,探讨Hnk可能的镇痛机制及作用靶点。结果显示:和厚朴酚浓度依赖性地抑制TTX-S钠电流,30 μmol/L和厚朴酚可以使稳态激活曲线向较正电压方向偏移达10.2 mV,通道失活后恢复时间明显延长,但对稳态失活动力学特征无明显的影响。