大黄酸对肾小球硬化肾皮质凋亡蛋白酶-3活性及细胞凋亡的影响

目的观察大黄酸对肾小球硬化及细胞凋亡的影响,以探讨大黄酸对肾小球硬化的保护作用。方法一侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制作肾小球硬化大鼠模型,随机分为对照组、肾病组、大黄酸治疗组和苯那普利治疗组,分别在第6、8、10、12周处死每组6只大鼠,免疫组织化学染色测定肾皮质凋亡蛋白酶3(caspase3),比色法测定caspase3活性,凝胶电泳迁移率转换实验(EMSA)检测核因子κB(NFκB)活性,原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾组织细胞凋亡,观察caspase3、NFκB的表达与肾组织细胞凋亡情况。结果肾病组出现明显蛋白尿,血白蛋白下降及胆固醇上升,肾小球硬化指数、细胞凋亡指数、NFκB活性及caspase3表达随时间延长均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。各时点比较,第10周肾病组见大量TUNEL阳性细胞,并略高于12周(9.3±2.3比8.4±1.2,P>0.05),caspase3表达也最为显著,明显高于12周(11.4±2.5比8.2±1.7,P<0.05),主要分布在肾皮质毛细血管周围,与凋亡细胞表达趋于一致。大黄酸或苯那普利治疗后,8周起TUNEL阳性细胞明显减少,并维持在一定水平,NFκB活性和caspase3表达均降低(P<0.05),肾脏病理变化及生化改变明显改善,肾皮质caspase3表达与细胞凋亡指数呈正相关(r=0.836,P<0.01)。结论大黄酸对肾小球硬化有明显防治作用,可能通过影响NFκB、caspase3活性在肾小球硬化早期调控病理改变,caspase3表达下降可能是大黄酸减轻肾小球硬化细胞凋亡的分子机制之一。  

检测肾病综合征患者尿中足细胞的临床意义

目的:探讨尿中肾小球上皮细胞(足细胞)检测在人局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)诊断中的意义.方法:病例选自我科经肾活检病理证实的FSGS患者12例,微小病变性肾小球病(minimal change disease,MCD)20例,8例健康人作对照.取晨尿离心,沉渣甩片,间接免疫荧光法检测尿中足细胞特异蛋白Podocalyxin(PCX)阳性染色细胞.采用免疫荧光法检测肾小球足细胞PCX的表达.结果:FSGS组尿中足细胞阳性8例(阳性率66.67%),MCD组和正常对照组中尿足细胞均为阴性.FSGS患者中,尿足细胞阳性者临床上呈肾病综合征表现.FSGS患者肾活检标本中,肾小球内均可见足细胞特异标记蛋白PCX表达呈节段性缺失,并与肾小球节段硬化部位一致;而MCD患者肾活检标本的肾小球中,上述标记蛋白表达完整.结论:在肾病综合征中,尿足细胞检测可作为FSGS与MCD鉴别的一项可靠、方便、无创性的辅助手段.  

实验性加速肾硬化大鼠动物模型的制备

目的:探讨单侧肾切除加重复注射阿霉素制作加速肾硬化大鼠动物模型的可行性。方法:3月龄雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组(18)和实验组(22)。实验组大鼠先行左肾摘除,其后第7天和第28天分别给予阿霉素5mg/Kg和3mg/Kg尾静脉注射,对照组则以假手术和生理盐水静脉注射代替。在第一次静脉注射阿霉素后第4周、8周和12周收集血标本和24小时尿液测定血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和24小时尿蛋白定量(TP/24h),并于第12周测定大鼠平均动脉压(MAP)。同时在各时间点处死6只大鼠取其残肾以行光镜及电镜组织病理学检查,测定第12周大鼠平均肾小球截面积(A_G)和肾小球体积(V_G)。结果:BUN、Scr和TP/24h在各时间点均较同期对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),随着实验的进展这种升高愈发明显且组内各时间点之间也有显著性差异。与对照组相比,实验组大鼠平均动脉压显著升高(106.5±9.75)mmHg vs(150.75±12.00)mmHg,P<0.01)。实验组大鼠肾脏组织病理损害进行性发展,4周时表现微小病变肾病,8周部分肾小球出现节段硬化,12周肾小球平均截面积和平均体积显著增大,大部分出现球性硬化。结论:单侧肾切除加重复注射阿霉素可成功诱导加速肾硬化大鼠动物模型,其病理学特点类似于人类局灶节段性肾小球硬化。  

成人特发性局灶节段性肾小球硬化症的临床及病理分析

目的:了解特发性局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)在肾脏疾病中的构成变化及其临床病理诊断要点和意义.方法:对1990年1月至2001年12月在我院肾科住院行肾活检确诊为特发性FSGS的65例患者的临床资料及病理改变进行总结分析.结果:(1)特发性FSGS占肾活检患者的2.2%,占原发性肾小球疾病的3.2%,占肾病水平蛋白尿患者的5.8%,12年中发病无上升趋势.(2)其病变类型为单纯门部病变占12.3%,单纯周缘部病变占23.1%,两者的混合型占60.0%,尖端型占1.5%,塌陷性占3.1%.同时伴随的病变有:足细胞增生、肥大和空泡变性(58.5%),球囊粘连(90.8%),肾小管间质病变(92.3%)以及节段性内皮和系膜细胞增生(20.0%).由于病变分布呈局灶节段的特点,且病变多样、重叠出现,在病理诊断中应警惕误、漏诊的可能.(3)伴节段性内皮和系膜细胞增生的患者常表现为肾病水平蛋白尿(92.3%).结论:在肾脏病理工作中,提高警惕性和检查方法对于正确诊断特发性FSGS具有重要意义.特发性FSGS不是构成本组肾活检患者的常见病理类型.足细胞病变以及节段性内皮和系膜细胞增生可能与节段性硬化形成有关.  

加速型肾小球硬化动物模型的建立

目的 建立一种病变稳定、制作周期短、重复性好、最接近人类肾小球硬化病理改变的动物模型。方法 在摘除一侧肾脏的基础上，通过两次尾静脉注射柔红霉素，定期观察血、尿及肾脏组织病理学改变。结果 模型组大鼠于用药后第４周时，出现水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症，病理形态上开始出现典型的节段性肾小球硬化；第９周时血清肌酐、尿素氮水平显著升高（Ｐ〈０．０５），８０％的肾小球出现节段性硬化。结论 此模型制作  

结缔组织生长因子在肾切除大鼠肾脏中的表达和氟伐他汀的调节作用

目的　观察结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA在 5 / 6肾切除大鼠肾皮质的表达特点和羟甲基戊二酰辅酶A(HMG CoA)还原酶抑制剂氟伐他汀的调节作用。方法　将 2 4只 5 / 6肾切除大鼠随机分为未治疗的 5 / 6肾切除组 (模型组 ,12只 )和氟伐他汀治疗的 5 / 6肾切除组 (治疗组 ,12只 ) ,另设6只假手术大鼠作为对照。氟伐他汀治疗 (7mg·kg-1·d-1) 13周后 ,检测尿蛋白排泄、血清尿素氮和肌酐含量 ,用RT PCR法检测肾皮质CTGFmRNA表达 ,免疫组织化学检测肾小球转化生长因子 β1(TGF β1)、IV型胶原和纤连蛋白的表达水平 ,并评价肾脏病变和肾小球硬化指数 (GSI)。 结果　实验终止时 ,模型组尿蛋白排泄 (30 5 4mg/ 2 4h)显著高于假手术组 (5 6mg/ 2 4h ,P <0 0 1) ,氟伐他汀治疗的大鼠尿蛋白排泄 (2 30 9mg/ 2 4h)明显低于模型组 (P <0 0 5 )。与假手术组相比 ,模型组血清尿素氮(P <0 0 1)和肌酐 (P <0 0 5 )水平均明显增高 ,氟伐他汀治疗使血清尿素氮和肌酐的含量明显降低。模型组GSI为 4 1 8± 11 5 ,明显高于假手术组 (2 2± 1 3,P <0 0 1) ,治疗组GSI(2 3 4± 6 1)明显低于模型组 (P <0 0 5 )。肾皮质CTGFmRNA表达水平约为假手术组的 3倍 (P <0 0 1) ,而在治疗组其表达水平减少 5 5 4 %。肾小球TGF  

缬沙坦对肾小球硬化大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的观察缬沙坦对肾小球硬化大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨血管紧张素转化酶Ⅱl-型受体拮抗剂(AT1RA)对肾脏的保护作用。方法雄性SD大鼠36只随机分为对照组、肾小球硬化组和缬沙坦治疗组,每组12只。切除肾小球硬化组和缬沙坦治疗组大鼠左肾,1周后按5 mg.kg-1的剂量于尾静脉注射阿霉素,对照组行假手术及尾静脉注射等量生理盐水,注射阿霉素后次日始缬沙坦治疗组予缬沙坦20 mg.kg-1的剂量每日晨灌胃1次,对照组和肾小球硬化组仅灌以2 mL自来水。灌胃12周后处死大鼠,切取右肾用于肾脏病理分析,免疫组织化学法测定肾组织MCP-1。结果(1)形态学改变:对照组大鼠肾小管结构正常;肾小球硬化组多数肾小球呈节段性硬化,许多肾小球及肾小管受累;缬沙坦治疗组肾脏病变轻于肾小球硬化组,且肾小球硬化指数明显低于肾小球硬化组(P<0.01);(2)MCP-1的表达:对照组肾小管中有少量MCP-1的表达,在肾小球内几乎不表达,在肾小球硬化组和缬沙坦治疗组肾小球及肾小管内表达皆强于正常对照组(P<0.01)。缬沙坦治疗组MCP-1表达较肾小球硬化组弱(P<0.01)。结论缬沙坦可能通过阻断肾小球硬化大鼠肾素-血管紧张素系统,降低MCP-1在肾脏中的表达,抑制或减轻了巨噬细胞浸润,进而延缓肾小球硬化的进展。  

通络方防治肾小球硬化的药效学研究

目的 探讨通络方对肾小球硬化大鼠模型的治疗作用及其作用机理.方法 观察治疗组大鼠肾功能、血脂、血液黏稠度、24h尿蛋白定量及血浆血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)浓度的变化.结果 与模型组比较,治疗组大鼠肾功能、血液黏稠度明显改善,血脂、24 h尿蛋白定量及血浆AngⅡ浓度明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 通络方可明显改善肾小球硬化大鼠肾功能,其作用机理可能与降低血脂、血液黏稠度和血浆AngⅡ浓度有关.  

细胞凋亡对慢性肾衰大鼠肾结构与肾功能影响的研究

目的探讨肾小球细胞凋亡对肾结构与肾功能的影响研究。方法建立阿霉素肾硬化大鼠模型，光镜和电镜观察肾小球结构变化，并检测其有核细胞记数。用原位检测肾小球细胞凋亡指数。结果疾病组各时间点调亡指数明显升高（P〈0．01），于12周达高峰。疾病组肾小球中有核细胞数与肾小球细胞凋亡指数之间存在明显负相关。肾小球内凋亡细胞数与肾功能恶化程度呈密切正相关，凋亡指数与BUN和Scr的相关系数分别为0．8543和0．9006。结论随病情进展，实验性肾硬化大鼠中肾小球细胞发生过度调亡，导致细胞数目减少，加重肾小球硬化进展。  

SIGNIFICANCE OF MMP-2 AND TIMP-2 mRNA EXPRESSIONS ON GLOMERULAR CELLS IN THE DEVELOPMENT OF GLOMERULOSCLEROSIS

Objective To study the expressions of MMP-2 and TIMP-2 mRNA on cultured rat mesangial cells (MsC) and in human diseased glomeruli, and to explore their significance in the development of glomerulosclerosis.Methods The expressions ofMMP-2, TIMP-2, and Col Ⅳ mRNA on cultured rat MsC stimulated by IL-1 or/and TGF-β1were investigated through Northern blot analysis. The levels of MMP-2 and TIMP-2 mRNA expressions and immunoreactivity of PCNA and Col Ⅳ in human diseased glomeruli from renal biopsies of lupus nephritis (LN) patients were examined by in situ hybridization and immunohistochemistry, respectively.Results The levels of MMP-2, TIMP-2, and Col Ⅳ mRNA expressions were markedly increased on cultured rat MsC stimulated by IL-1 or/and TGF-β1. Meanwhile, upregulation of MMP-2 and TIMP-2 mRNA expressions was confirmed in diseased glomeruli from patients with various subtypes of LN, and was closely related to the positive cell number of PCNA presentation and deposition of Col Ⅳ in glomeruli.Conclusion The results suggest that the over-expressions of MMP-2 and TIMP-2 mRNA on glomerular cells might play a critical role in the development of glomerulosclerosis.