富氢水对γ射线照射Beagle犬淋巴细胞基因表达谱的影响

目的 利用基因芯片技术研究富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响.方法 将雄性Beagle犬随机分为对照组、单纯照射组和富氢水组(n=5),采用基因芯片技术对2.0 Gy60Coγ射线照射后6h各组Beagle犬外周血淋巴细胞的差异表达基因进行筛选,利用CGO (gene ontology)和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes andgenomes)数据库对差异表达基因进行生物信息学分析,并应用实时荧光定量PCR技术对基因芯片结果进行验证.结果 单纯照射组筛选出差异表达2倍以上的基因4 730条,富氢水组筛选出差异表达2倍以上的基因4 493条,单纯照射组与富氢水组共同差异表达2倍以上的基因有1 606条;单纯照射组的差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有10、9、3个功能簇,富氢水组差异表达基因对应的生物学过程、细胞组分及分子功能分别有15、3、4个功能簇.单纯照射组差异表达基因涉及19条生物学通路,富氢水组差异表达基因涉及24条生物学通路,单纯照射组与富氢水组的差异表达基因有5条共同生物学通路.选择2条差异表达基因进行mRNA水平的验证,PCR扩增结果与芯片结果具有良好的一致性.结论 富氢水对γ射线照射后Beagle犬外周血淋巴细胞基因表达的影响,可能涉及多种生物学过程、细胞组分、分子功能的改变及多条信号通路的激活.     

小鼠运动性疲劳相关基因筛选的初步研究

目的：运用基因芯片技术筛选运动性疲劳的相关基因。方法：将小鼠２３０４点阵的基因芯片中的２２０１条待研究基因，与对照组和疲劳组小鼠脑组织中抽提的ｍＲＮＡ并被Ｃｙ３和Ｃｙ５逆转录荧光标记制成的ｃＤＮＡ混合探针杂交，通过芯片扫描仪对其荧光强度进行扫描，经计算机进行分析。结果：在待研究的２２０１条基因中，与中枢疲劳相关的１１７条基因具有显著性表达差异，其中上调表达的基因有６３条，下调表达的基因有５４条。结论：应用基因芯片技术可同时检测与运动性中枢疲劳相关的多个基因的差异表达，具有高通量、并行性和快速准确等优点。     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。     

补阳还五汤延缓大鼠胫前肌失神经肌萎缩的基因筛选

目的 运用基因芯片技术筛选补阳还五汤延缓大鼠胫前肌失神经肌萎缩的靶基因,并对变化显著的PI3K基因进行验证。方法 建立大鼠腓总神经夹伤模型,将造模的20只SPF级SD大鼠随机分为补阳还五汤组与模型组,术后ig给药,18 d后芯片筛选差异表达基因。并运用RT-PCR与Western blotting法验证PI3K基因与蛋白的差异表达。结果 与模型组相比,补阳还五汤组基因表达谱有显著性差异,其中14条基因表达上调,10条基因表达下调,其中Angptl4与Pik3c2g基因表达变化较明显（上调5倍）;同时基因验证表明：与模型组相比,补阳还五汤中、高剂量（生药12.96、25.92 g/kg）组PI3K mRNA与蛋白表达均显著增加（P＜0.05、0.01）。结论 补阳还五汤对失神经肌萎缩的防治作用与其对多种相关基因的调控有关,其机制可能是通过促进能量合成与血管新生,保护神经,抑制细胞凋亡与胶原合成等方面来防治失神经肌萎缩的发生;补阳还五汤可能通过增加PI3K基因与蛋白表达,从而延缓肌萎缩的发生;PI3K/Akt信号转导通路的激活可能在补阳还五汤延缓失神经肌萎缩中发挥重要作用。     

人胎盘基因表达谱芯片的初步研究

目的 制备人胎盘基因表达谱芯片,前用于基因差异表达分析。方法用基因芯片点样仪将胎盘基因文库探针打印在氨基包被的玻片上制备表达谱芯片。分别提取对照组三氧化二砷处理的K562细胞总RNA,纯化mRNA后反转录成cDNA。再以限制性显示技术进行荧光标记,将两组荧光标记的样品混合后与芯片进行杂交。杂交后清洗芯片,干燥后对芯片进行扫描,分析杂交结果。结果 建立了较可靠的制备与检测基基表达芯片的方法,并筛选出45个差异表达基因片段。结论 制备的人胎盘基因表达谱芯片可有效地应用于基因的差异表达分析。     

单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术的探讨

目的 对在单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。方法 采用15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增(Primer extension preamplification,PEP)，取其产物5μl分别对β地中海贫血的目的基因片段进行巢式或半巢式扩增，然后来用反向斑点杂交(Reverse dot blot,RDB)技术检测β地贫突变型。结果 将这些技术应用于4例已经确定突变基因型的β地贫患者及1例正常女性，检测结果与预料的相符。结论 结合我们的实验结果，提示在单个细胞或微量DNA模板水平运用基因芯片技术进行遗传病检测是可行的，而且将来在胚胎植入前基因诊断和无创性产前诊断领域可能有一定的实用价值。     

基因芯片检测日本血吸虫及其现场应用

目的:建立敏感、特异的检测日本血吸虫的基因芯片并对其应用价值进行评价。方法:根据日本血吸虫高度保守的编码免疫原性毛蚴抗原5D基因,筛选、设计聚合酶链反应(PCR)的引物和基因探针,制成日本血吸虫基因芯片。采用基因芯片对江西、湖南和安徽三省现场采集的钉螺进行检测。检测时抽提待测钉螺的DNA,进行PCR扩增及不对称PCR荧光标记,然后与检测芯片杂交,最后进行扫描及分析。结果:建立的基因芯片能特异、敏感地检测出感染性钉螺,江西、湖南感染性钉螺的检出率为100％,安徽省品系的感染性钉螺检出率略低。结论:成功地建立了检测日本血吸虫的基因芯片,具有较高的实际应用价值。     

基因芯片检测慢性乙肝患者HBV-DNA变异的临床研究

目的应用新型基因芯片研究乙肝病毒多点基因变异在慢性乙肝患者中的意义，为临床诊断和治疗提供依据。方法对132例慢性乙肝患者采用DNA芯片技术，检测HBV—DNA基因6个位点的变异。结果132例慢性乙型肝炎患者均存在HBV—DNA位点的变异，其中前C区1896G—A变异率为23．5％。e抗原阳性者占4．O％（4／74）。e抗体阳性者占48．3％（28／58），后者变异株显著高于前者，此突变有助于HBV逃避免疫攻击而形成慢性感染状态；前C区1814变异率为3．8％；C区启动子1762变异率为56．1％，1764变异率为53．8％，且两种变异常同时出现，与重型肝炎、肝硬化和肝癌的发生相关；P区528变异率为9．8％，552M—I变异率38．6％，552M—V变异率为10．6％，552变异与核苷类似物耐药相关。结论HBV—DNA位点变异对于判定疾病的稳定与进展有重要作用。     

基因表达谱芯片筛选鼻咽癌相关基因

背景与目的：基因表达谱芯片是一种高通量,快速的检测基因表达量的手段.本研究利用这种新兴技术来研究鼻咽癌组织与鼻咽慢性炎症组织基因表达差异,以寻找鼻咽癌新的肿瘤相关候选基因和分子标志.方法：采用BioStarH-141s（2004）型含14112点的人类全长基因cDNA表达谱芯片对20例鼻咽癌组织及15例鼻咽慢性炎症组织进行检测,并用生物统计学及生物信息学方法分析它们之间的基因表达差异.结果：和鼻咽慢性炎症组织相比,20例放疗前鼻咽癌组织存在着大量的差异表达基因,涉及基因包括癌基因与原癌基因、免疫相关基因、细胞分裂、分化、增殖和凋亡相关基因、信号与蛋白传递相关基因、DNA结合转录和转录因子,一些生物酶的酶活调节等.结论：用基因表达谱芯片可以筛选出许多不同种类的参与鼻咽癌病变过程的重要基因,这为揭示鼻咽癌复杂的病变机理提供了研究的方向.