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1.
目的 探讨失血性休克引起的急性肺损伤与肿瘤坏死因子-α(TNF—α)在肺组织表达的相关性。方法通过心腔穿刺对C57小鼠采取30%全血容量复制失血性休克模型。肺组织TNF-α表达采用酶联免疫吸附法方法进行测定。肺组织中性粒细胞(PMN)浸润采用数字荧光显微镜免疫荧光技术进行检测。肺微血管通透性(肺水肿)采用伊文氏蓝方法进行测定。结果(1)虽然失血性休克仅引起肺组织,TNF—α水平轻度和短暂的升高,且肺组织中性粒细胞(PMN)浸润时相上早于TNF-α水平的升高。但在,TNF基因剔除(K0)小鼠,失血性休克引起的肺组织PMN浸润和肺损伤明显轻于C57野生型小鼠;(2)给予失血前,TNF KO小鼠低水平的重组TNF-α即可导致失血性休克引起肺组织PMN浸润和急性肺损伤;(3)失血性休克引起的肺组织PMN浸润和急性肺损伤在p55TNF受体KO动物显著减轻,而在p75TNF KO动物则不产生影响。结论肺组织低水平TNF—α足以介导失血性休克引起的PMN浸润和急性肺损伤;p55TNF受体在失血性休克引起的肺部急性炎症反应中起主导作用。  相似文献
2.
后基因组时代的基因工程小鼠   总被引:5,自引:3,他引:2  
基因工程小鼠是当今生命科学中集成度最高的综合性研究体系之一,在认识“基因-蛋白质-生命现象”、制备人类疾病研究的实验动物模型,以及新药开发的评价体系等领域中具有重要作用。随着生命科学中功能基因组学的兴起和模式生物时代的到来,使得生物医药研究对基因工程小鼠的需求日趋增加,同时也促使基因工程小鼠技术体系得到了快速的发展。然而,在基因工程小鼠的产生中,仍存在着一些问题。它们的解决,则需加强一些与基因工程小鼠直接相关的基础问题和有潜在应用价值的基础问题的研究。  相似文献
3.
重组酶Cre的逆转录病毒载体的构建及鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 构建表达重组酶 Cre的逆转录病毒载体并进行初步的体外感染研究 .方法 将 Cre基因片段插入到逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP中 ,转染包装细胞系获得表达Cre的病毒颗粒 ,体外感染 NIH- 3T3细胞 ,通过绿色荧光蛋白GFP测定病毒滴度 .结果 构建了表达 Cre的逆转录病毒载体 p Mx- IRES- GFP- Cre.通过包装细胞系得到的含有病毒颗粒的培养上清 ,这种培养上清具有体外感染细胞的能力 ,病毒滴度为 10 5cfu·m L- 1 .结论 用逆转录病毒体系表达重组酶Cre并能有效地进行体外感染 .为用这一方法在体外研究特异基因对细胞生物学行为的影响奠定基础  相似文献
4.
骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的研究我国自行开发的骨保护素(OPG)基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据。方法将野生型OPG(OPG^-WT)小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠(OPG^-/-)分成3组(每组6只),分别检测其血清碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)及骨钙素(OC)水平,并行骨密度测定、X线摄片、扫描电镜检查和生物力学测试,将所得数据进行统计学分析。结果OPG^-/-小鼠的骨密度、股骨刚度和最大折断负荷均显著降低(P〈0.01),血清ALP和ACP明显升高(P〈 0.01),OC在早期与对照组无明显差异。OPG^-/-小鼠在X线平片上表现为骨量减少,骨小梁稀疏或塌陷,骨皮质变薄。扫描电镜观察到OPG^-/-小鼠骨小梁变细、变尖,骨小梁间隙增大,部分骨小梁塌陷。结论OPG^-/-小鼠骨吸收活性增强伴继发性成骨活性提高,符合高转换型骨质疏松的特征,具有明显的优点,为研究OPG/OPGL/RANK体系提供了新的平台,有可能成为一种新的模型用于高转换型骨质疏松症的实验研究。  相似文献
5.
辣椒素受体在内皮素-1引起热痛觉过敏中的作用   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 研究辣椒素受体对内皮素-1(ET-1)引起热痛觉过敏的影响.方法 选用辣椒素受体基因敲除小鼠(KO小鼠)及其野生型C57BL/6J小鼠(WT小鼠),分为KO组与WT组,两组分别按3、10、30、100 pmol剂量足底注射ET-1(溶于10 μl磷酸盐缓冲液,n=6).测量注药前和注药后15、30、45及60min时逃避时间(PWT).结果 ET-1引起两组动物PWT降低,在WT组降低幅度更明显,WT组PWT随着ET-1剂量的增加而降低,而KO组PWT在剂量为30 pmol时降低最为明显.结论 ET-1引起的热痛觉过敏部分通过辣椒素受体起作用.  相似文献
6.
βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型的建立   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
目的:建立βB2晶体蛋白基因敲除小鼠模型.方法:采用美国iGTL实验室的技术构建打靶载体,建立基因敲除小鼠模型.采用PCR对小鼠基因型进行鉴定,Western印迹法对晶体蛋白的表达进行鉴定.结果:PCR成功检测出3种基因型;纯合子基因敲除的小鼠未检测到βB2晶体蛋白的表达.结论:成功构建了βB2晶体蛋白基因敲除的小鼠模型.  相似文献
7.
目的 研究在四氧嘧啶诱导小鼠糖尿病发病过程中维生素D受体的作用。方法 采用维生素D受体基因敲除小鼠研究维生素D受体在小鼠糖尿病发病过程中的作用。四氧嘧啶尾静脉注射诱导小鼠糖尿病,PCR法鉴定基因型,自动生化分析仪测定血钙,血糖仪法测定血糖,试纸法尿糖定性。结果 维生素D受体基因敲除小鼠和野生型小鼠血钙水平无显著差别;维生素D受体敲除小鼠血糖和糖尿病发病率高于同窝野生型(P〈0.05)。结论 维生素D受体基因敲除增加了小鼠糖尿病的发病率,但其详细机理需要进一步研究。  相似文献
8.
载脂蛋白E基因剔除小鼠冠状动脉外膜炎症的演变过程   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨载脂蛋白E基因剔除眼apolipoproteinEgene鄄knockout,apoE穴鄄/鄄雪演小鼠冠状动脉外膜炎性细胞在粥样硬化病灶发生、发展过程中的变化规律。方法:取30、60和120周apoE(鄄/鄄)小鼠心脏做连续切片,分别用HE染色、免疫组化、透射电镜鉴定冠状动脉外膜炎性细胞类型。结果:30周小鼠冠状动脉外膜以中性粒细胞浸润为主,构成比是66.04%,明显高于60周(6.49%)和120周(3.86%)的小鼠,P均<0.05;60和120周小鼠冠状动脉外膜以淋巴细胞浸润为主,构成比分别是59.74%和72.03%,明显高于30周(21.38%),P均<0.05。结论:在动脉粥样硬化病灶形成的过程中,外膜炎症经历了由急性炎症向慢性炎症病理变化的过程。  相似文献
9.
卡介苗ERP基因置换型打靶载体的构建   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:构建ERP基因打靶载体。方法:卡介前菌体外培养,扩增ERP基因两侧序列.连接载体与目的片段.筛选阳性克降并鉴定。结果:PCR扩增捕入片段大小与预期相符.鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段。结论:成功构建了用于卡介苗菌基因打靶的置换型载体,为今后构建ERP基因敲除株的卡介苗突变株的研究奠定基础。  相似文献
10.
弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体构建方法探讨   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体的方法,为建立基因敲除弓形虫基因突变株打下基础。方法 用PCR方法扩增弓形虫SAG3基因同源序列,将所获得的1.53kb和2.81kb序列连接克隆插入TUB5/CAT质粒中,构建置换型打靶载体,采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果 将SAG3基因中1.53kb和2.81kb两个同源序列分别插入TUB5/CAT质粒中,构建了弓形虫RH株5’SAG3-TUB5/CAT-3’SAG3置换型载体,经鉴定所获得的打靶载体结构准确。结论 建立了弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体,并获得了弓形虫RH株SAG3基因置换型打靶载体,为分析弓形虫基因功能提供了可行的方法。  相似文献
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