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1.
目的:构建前列腺癌PSA特异性树突状细胞(PSADC)瘤苗,并观察其体外免疫活性,为后续研究奠定基础。方法:分离骨髓前体细胞,大量制备骨髓DCs(bone marrow derived DC,BMDC);分别以PSA、癌细胞裂解产物(lysate,Lys)、无关蛋白卵清蛋白(Ova)冲击DC制备PSADC、LysDC、OvaDC瘤苗。ELISA法检测PSADC瘤苗培养上清中细胞因子(IL12 p70和IL1β)水平的变化;观察PSADC瘤苗刺激抗原特异性T细胞增殖活性和诱导抗原特异性CTL杀伤活性,并与LysDC、OvaDC瘤苗及未加入抗原冲击的DC(NonDC)组作比较。结果:成功获得成熟DC,纯度可以达到>95%。ELISA法检测结果表明,PSADC、LysDC和OvaDC组培养上清中IL12 p70和IL1β水平均较NonDC组明显升高(P<0.05)。混合淋巴细胞培养(MLR)显示:PSADC、LysDC组DCs刺激CD4+T细胞增殖的能力明显优于OvaDC、NonDC组(P<0.01);PSADC、LysDC组培养上清中IL2、IFNγ水平明显高于后两者(P<0.01),而IL10和IL4水平下调(P<0.05)。PSADC、LysDC组可产生针对PSA和肿瘤裂解物的DTH反应,而对无关抗原无效(P<0.05)。与OVADC、NonDC组相比,LysDC、PSADC组体外诱导的CTL细胞对LNCaP细胞的杀伤活性较强 (P<0.05),且具有抗原特异性。结论:利用PSA蛋白冲击DC可成功制备PSA特异性DC瘤苗,该瘤苗体外具有较强的免疫活性,能有效杀伤LNCaP细胞。  相似文献
2.
HLA-A^*0201限制性AFP抗原决定簇肽特异性肝癌疫苗的制备   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的探讨人HLA-A^*0201限制性AFP抗原决定簇肽(含MHC—I类分子HLA-A^*0201)作为原发性肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗的可行性。方法应用14佃AFP抗原决定簇肽片段分别体外脉冲刺激健康人血液树突状细胞(DC),将DC与自体T淋巴细胞共同培养并扩增其数量,使AFP抗原决定簇肽导入CD8’阳性T淋巴细胞(CD8^+-CTL)并对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞(人慢性髓原性白血病细胞株K562转染人HLA-A^*0201基因)产生特异性杀伤并释放gamma-干扰素(ELISPOT测定)。结果有4个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞杀伤能力较强,称之为免疫决定簇肽(Immunodominant);另有10个AFP抗原决定簇肽对表达相应AFP抗原决定簇肽的K562/A2.1细胞杀伤能力较弱,称之为亚免疫决定簇肽(Subdominant)。结论AFP抗原决定簇肽可以作为肝癌特异性抗原制备肝癌肿瘤疫苗,K562/A2.1细胞可以作为有效的抗原提呈细胞(APC)用于实验研究。  相似文献
3.
编码hGM-CSF基因的慢病毒包装及表达   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的:构建编码人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)慢病毒载体转染小鼠结肠癌细胞CT26,建立持续高表达hGM-CSF基因的CT26细胞株。方法:采用PCR法获得hGM-CSF DNA片段,插入转移载体L166;用CaCl2法将载体L166-hGM CSF、L205和L311共同转染到慢病毒包装细胞293T中,72h后收集上清液。测定慢病毒的滴度;用ELISA法检测慢病毒感染后的CT26细胞上清液中hGM CSF的表达。结果:通过酶切电泳证实重组转移载体L166-hGM-CSF含有预期的hGM-CSF片段。收集慢病毒转染CT26细胞,滴度达4.69×105IU/ml。ELISA法检测慢病毒转染的CT26细胞上清液中有hGM-CSF的表达超过2个月。终浓度15μg/ml的嘌呤霉素成功筛选出单克隆CT26细胞株。结论:收集的慢病毒能够有效的将其所携带的目的基因导入CT26细胞并使其在细胞中高效持续表达2个月以上。  相似文献
4.
目的探讨表皮因子受体为靶向,重组T7噬菌体疫苗在体诱导的免疫活性。方法用构建的重组T7噬菌体疫苗免疫动物,Dot-Blot和流式细胞仪检测产生的特异性抗体,MTT法检测产生的特异性杀伤肿瘤细胞活性。结果实验组动物均产生特异性抗体,与A431细胞结合的阳性细胞率分别为37.6%、47.6%和35.1%;T7415-1b-90和T7415-1b-132实验组均诱导产生对A431细胞的特异性杀伤作用,检测的ODE+T与对照组相比具有显著性差异(P<0.01);T710-3b-638实验组对肿瘤细胞无杀伤作用。结论异源EGFR分子构建的重组T7噬菌体疫苗可以诱导机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应。  相似文献
5.
化疗是肿瘤治疗最常见的手段之一,副作用强且易产生耐药性.纳米技术能够靶向输送有效剂量的化疗药到达肿瘤细胞,而不损伤正常细胞,同时克服肿瘤耐药.肿瘤免疫治疗具有其独特的低毒副作用、高效、预防转移的优势.基于肿瘤疫苗或抗体等免疫刺激因子的免疫疗法将有望在消灭肿瘤的同时预防肿瘤的转移.采用纳米技术能够保护抗原、刺激因子等不被降解,同时靶向作用于肿瘤细胞、肿瘤间质、免疫细胞,从而提高疗效.新型的肿瘤化学免疫制剂引起了广泛的关注,有望在有效地杀死肿瘤的同时刺激肿瘤免疫抗原的暴露以激活免疫系统.本文综述了肿瘤化疗、免疫治疗联合应用的潜能,以及展望纳米技术用于靶向运输化学免疫制剂的未来希望.  相似文献
6.
目的:研究MUC1-MBP联合TLR7/8激动剂R848对小鼠T细胞免疫活性的诱导作用,为寻找重组MUC1-MBP融合蛋白的合适佐剂提供实验依据.方法:21只C57BL/6小鼠随机分为对照组(注射生理盐水)、MUC1-MBP+ R848组(注射MUC1-MBP+ R848)和MUC1-MBP+卡介苗(BCG)组(注射MUC1-MBP+ BCG),每组7只.第2次免疫后第4~7天无菌取脾脏组织,测定脾指数;淋巴细胞增殖反应测定各组小鼠的刺激指数(SI);ELISA法测定小鼠脾细胞培养上清中肿瘤坏死因子γ(TNF-γ)和 白细胞介素4(IL-4)水平;流式细胞术检测小鼠脾细胞中T淋巴细胞亚群比例.结果:与对照组比较,MUC1-MBP+R848组和MUC1-MBP+BCG组小鼠脾指数均升高(P<0.01),SI升高(P<0.05),TNF-γ水平升高(P<0.05或P<0.01);且MUC1-MBP+R848组小鼠上述指标高于MUC1-MBP+BCG组(P<0.05或P<0.01);IL-4水平略微升高,但差异无统计学意义(P>0.05).与对照组比较,MUC1-MBP+ R848组和MUC1-MBP+ BCG小鼠脾细胞中CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞比例明显升高(P<0.05或P<0.01).结论:MUC1-MBP 融合蛋白联合R848或BCG均能诱导小鼠倾向于Th1的细胞免疫应答反应,R848是良好的MUC1-MBP候选佐剂分子.  相似文献
7.
与以往的手术、化疗、放疗和靶向治疗不同,肿瘤免疫治疗是一种通过激活人体自身免疫系统来对抗肿瘤的治疗手段。近年来,针对免疫检查点的单抗在抗癌治疗中取得的成绩已成为癌症治疗史上里程碑式的事件,使人们认识到癌症的基因问题不是故事的全部,驱使研究者转而关注免疫治疗。肿瘤免疫治疗有多种治疗策略,包括非特异性免疫刺激剂、肿瘤疫苗、过继性免疫细胞疗法以及单抗治疗。由于肿瘤具有极大的异质性和遗传不稳定性,其发病机制复杂,单独依靠某一种治疗手段难以达到理想的抗肿瘤效果,因此在深入研究不同治疗手段之间相互作用机制的基础上,联合包括肿瘤靶向治疗、细胞毒化合物治疗、以及不同类型免疫治疗的抗肿瘤策略可能是未来的方向。  相似文献
8.
9.
人类树突状细胞(DC)是连接先天性免疫反应和获得性免疫反应的桥梁。做为一种抗原提呈细胞(APC),DC可以提呈肿瘤抗原并激活抗肿瘤的免疫反应。许多的研究和临床试验都证实了DC在肿瘤治疗上面的巨大潜能。不断提高对DC的认识,有助于改进和提高其临床应用的方法。  相似文献
10.
欧霞 《医学综述》2012,18(17):2844-2846
治疗性疫苗主要是通过打破机体的免疫耐受,提高机体的特异性免疫反应,对一些目前尚无有效治疗药物的疾病起到治疗作用。它不仅具有传统疫苗的一般功能,而且能够用于临床患者的治疗,因此治疗性疫苗研究近年来得到了很大的发展,临床数据表明治疗性疫苗在肿瘤、高血压和乙型肝炎等慢性复发性感染等疾病方面具有不同程度的疗效。现从治疗性疫苗的概念以及与传统疫苗的比较、作用机制、研究应用等方面进行介绍。  相似文献
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