基于Cyclin D1基因敲减探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的机理

目的验证Cyclin D1及其下游信号蛋白对成骨细胞增殖的调控作用,探讨健骨颗粒促进成骨细胞增殖的作用机制。方法培养成骨样细胞株UMR-106,运用CRISPR/Cas9技术敲减Cyclin D1基因后,将细胞分为基因敲减+生理盐水组(组1)、基因敲减+健骨颗粒组(组2)、病毒空载体细胞(组3,阴性对照)。未行基因敲减的细胞分为正常细胞+生理盐水组(组4)和正常细胞+健骨颗粒组(组5)。分别用生理盐水血清或健骨颗粒含药血清干预各组细胞24、48、72 h,通过CCK8法检测细胞增殖情况,利用Real time PCR检测Cyclin D1、Cyclin E、CDK 2、CDK 4、Rb及E2F-1基因的表达水平。结果经Western-bolt检测表明基因敲减的成骨细胞Cyclin D1蛋白表达明显下降。CCK8法检测结果显示,与组4相比,组5增殖速度变快(P0. 05),组3增殖速度无差异(P0. 05),组1和组2增殖速度均减慢(P0. 05);与组5相比,组2增殖速度减慢(P0. 01);与组1相比,组2增殖速度无统计学意义(P0. 05)。Real time PCR检测结果显示,与组4相比,组5 Cyclin D1、CDK2、CDK4、Cyclin E、Rb及E2F-1 mRNA的表达明显增高(P0. 05或P0. 01),组3表达无统计学意义(P0. 05),组1和组2表达明显降低(P0. 05或P0. 01);与组5相比,组2增殖速度减慢(P0. 01);与组1相比,组2无统计学意义(P0. 05)。结论 Cyclin D1及其下游信号蛋白是调控成骨细胞增殖的关键因素;健骨颗粒可以通过调节Cyclin D1及其下游信号蛋白促进成骨细胞增殖。     

仲黄颗粒配合手术治疗骨量减少的腰椎间盘突出症临床疗效及对BMD、血清OPG水平的影响

目的观察仲黄颗粒配合腰椎后路椎间融合术(posterior lumbar interbody fusion,PLIF)治疗合并骨量减少的肝肾亏虚型腰椎间盘突出症的临床疗效,进一步探讨该方法的临床作用机理。方法选取自2014年5月至2017年6月,日照市中医医院共收治的合并骨量减少的肝肾亏虚型腰椎间盘突出症患者96例,其中治疗组48例采用PLIF术后配合仲黄颗粒口服治疗;对照组48例采用PLIF术治疗。分别记录治疗前和治疗后6个月、12个月Oswestry功能障碍指数(oswestry disability index,ODI)评分、骨密度T值及血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)水平三方面的变化及末次随访时不融合、融合器沉降及螺钉松动不良事件。结果治疗组和对照组分别有42例、40例患者获得随访,两组患者对临床疗效均较为满意,但治疗组满意度高于对照组,两组间差异有统计学意义(P0.05)。结论仲黄颗粒可能通过升高血清OPG提高患者骨密度及术后长期临床疗效,从而减少术后植骨不融合、融合器沉降和螺钉松动不良事件的发生。     

木丹颗粒联合甲钴胺对2型糖尿病周围神经病变气虚络阻证的疗效及对神经电生理和氧化应激指标的影响

目的探究木丹颗粒联合甲钴胺对2型糖尿病周围神经病变气虚络阻证的疗效及对神经电生理和氧化应激指标的影响,为2型糖尿病周围神经病变的诊疗提供临床指导。方法前瞻性选择自2016年1月至2018年3月衡水市第五人民医院收治的160例2型糖尿病周围神经病变(气虚络阻证)患者作为研究对象。按随机数表法,将患者随机分成观察组100例和对照组60例。对照组采用甲钴胺结合常规降糖治疗,观察组在对照组基础上加用木丹颗粒,疗程4周。比较两组治疗前后的多伦多临床评分系统(TCSS)和患者下肢神经的传导速度,血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)等氧化应激指标,观察两组肌电图疗效。结果治疗前,两组患者TCSS评分、运动神经传导速度和血清SOD、MDA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者上述各指标均显著改善(P<0.05)。与对照组相比,观察组患者TCSS评分显著降低,SOD水平显著上升,MDA水平显著降低,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组患者下肢神经传导速度(MCV、SCV)和肌电图疗效明显优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论木丹颗粒联合甲钴胺治疗2型糖尿病周围神经病变气虚络阻证效果显著,可明显改善患者临床症状,提高神经传导速度和抗氧化应激能力,值得临床推广。     

益肾化湿颗粒辅助治疗慢性肾小球肾炎的效果研究

目的 探究慢性肾小球肾炎患者应用益肾化湿颗粒辅助治疗的临床疗效。方法 选择2017年3月1日—2019年3月1日在河南科技大学第一附属医院接受治疗的慢性肾小球肾炎患者120例作为临床研究对象,随机投掷硬币法分组。对照组60例患者应用氯沙坦钾片治疗,观察组60例患者应用氯沙坦钾片与益肾化湿颗粒联合治疗,比较所有患者治疗后的临床疗效以及对血清中白细胞诱素-1(LKN－1)、肿瘤坏死因子α(TNF－α)和白细胞介素13(IL－13)水平的影响情况。结果 经治疗后,观察组患者的治疗总有效率为96.67%,高于对照组患者的73.33%(P<0.05);观察组患者的尿红细胞为(4.09±1.01)个/HP、24 h尿蛋白定量为(0.79±0.35)g/L、血尿素氮(BUN)为(9.11±2.65)mmol/L以及血肌酐(Scr)为(119.44±48.99)umol/L,均低于对照组患者水平(P<0.05):尿红细胞(6.20±1.98)个/HP、24 h尿蛋白定量(1.25±0.39)g/L、血尿素氮(BUN)(10.60±3.18)mmol/L以及血肌酐(Scr)(137.01±55.43)umol/L;观察组患者血清中IL-13水平为(12.08±2.24)ng/L、TNF-α为(13.57±4.34)ng/L、LKN－1为(70.43±33.88)pmol/L,均低于对照组患者水平,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 应用益肾化湿颗粒治疗慢性肾小球肾炎患者,可有效消除炎症,改善肾功能,提高临床治疗效果,值得推广应用。     

稳心颗粒联合尼可地尔治疗缺血性心肌病房性心律失常临床观察

目的探讨缺血性心肌病伴房性心律失常采用稳心颗粒联合尼可地尔治疗的临床效果。方法选择2017年1月—2019年1月收治的缺血性心肌病伴房性心律失常患者114例,遵照不同治疗原则分组标准分为对照组和研究组,各57例,2组入院后均采用常规基础治疗,对照组在基础治疗的基础上给予稳心颗粒进行治疗。研究组在对照组的基础上联合应用尼可地尔进行治疗,比较2组治疗效果、心功能情况、P波离散程度、6 min步行试验距离以及不良反应。结果研究组治疗总有效率为96.49%,显著高于对照组(80.70%),差异有显著性意义(P<0.05)。研究组心功能、P波离散程度、6 min步行距离以及脑钠素水平均显著好于对照组,差异均存在统计学意义(P<0.05),但2组患者用药后不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论稳心颗粒联合尼可地尔应用于缺血性心肌病伴房性心律失常患者的治疗中,能够显著提高治疗效果,改善心脏功能,且未见明显不良反应,好于单一用药,值得推广。     

扶正解毒抗癌方治疗晚期非小细胞肺癌的临床效果

目的:探讨扶正解毒抗癌方对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的疗效及对患者化疗后骨髓抑制的影响。方法:选取2016年1月至2019年3月滁州市第一人民医院收治的NSCLC患者100例,按照随机数字表法分为对照组和研究组,每组50例。对照组患者采用常规化疗,研究组患者在对照组的基础上加用扶正解毒抗癌方,两组患者连续治疗2个化疗周期。观察两组患者的临床疗效,分别于治疗前后测定白细胞计数、血小板计数及血红蛋白水平,比较两组患者治疗后骨髓抑制发生情况和卡氏(Karnofsky,KPS)评分的差异。结果:研究组患者的总有效率为62.00%(31/50),明显高于对照组的36.00%(18/50),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者白细胞计数、血小板计数及血红蛋白水平均明显低于治疗前,但研究组患者上述指标水平明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。研究组患者骨髓抑制发生率为38.00%(19/50),明显低于对照组的68.00%(34/50),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组患者KPS评分提高率和稳定率分别为34.00%(17/50)、46.00%(23/50),明显优于对照组的14.00%(7/50)、16.00%(8/50),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:扶正解毒抗癌方联合常规化疗治疗晚期NSCLC的疗效显著,能够减轻患者化疗后骨髓抑制情况,提高患者生活质量。     

Qingjie Fuzheng Granules regulates cancer cell proliferation,apoptosis and tumor angiogenesis in colorectal cancer xenograft mice via Sonic Hedgehog pathway

BackgroundSonic Hedgehog (SHh) signaling pathway plays a critical role in cell proliferation, apoptosis, and tumor angiogenesis in various types of malignancies including colorectal cancer (CRC). Qingjie Fuzheng Granules (QFG) is a traditional Chinese medicinal formula, which has been clinically used in various cancer treatments, including CRC. In this study, we explored the potential molecular mechanisms of QFG treatment effects on CRC via the SHh pathway.MethodsA CRC HCT-116 xenograft mouse model was utilized for all experiments. Mice were treated with intra-gastric administration of 1 g/kg of QFG or saline 6 days a week for 28 days (4 weeks). Body weight, length and shortest diameter of the tumor were measured every 3 days. At the end of the treatment, the tumor weight was measured. TUNEL staining assays were used to detect tumor apoptosis. Western blot and immunohistochemistry (IHC) assays were used to detect the expression of relative proteins.ResultsIn our results, QFG inhibited the increase of tumor volume and weight, and exhibited no impact on mouse body weight. Furthermore, QFG significantly decreased the expression of SHh, Smo and Gli proteins, indicating the action of SHh signaling. Consequently, the expression of pro-proliferative survivin, Ki-67, Cyclin-D1 and CDK4 were decreased and expression of anti-proliferative p21 was increased. The pro-apoptotic Bax/Bcl-2 ratio, cle-caspase-3 and TUNEL-positive cell percentage in tumor tissues were increased. Meanwhile, the pro-angiogenic VEGF-A and VEGFR-2 expression was down-regulated.ConclusionsQFG inhibited CRC cell proliferation and promoted CRC cell apoptosis and tumor angiogenesis in vivo through the suppression of SHh pathway, suggesting that QFG could be a potential therapeutic drug for CRC.     

基于网络药理学挖掘溃疡性结肠炎“扶正”治则的潜在机制

目的:通过数据库检索与网络药理学方法探讨溃疡性结肠炎"扶正"治则的潜在机制。方法:从中医E百数据库检索溃疡性结肠炎相关方剂,检索方式为"主治肠澼/久痢/痢疾",筛选所检索到的处方并进行药物种类、用药频次统计分析,选择溃疡性结肠炎治疗的常用扶正药物。将选择后的扶正药物输入中药系统药理学分析平台检索所有化学成分和作用靶点,构建化合物-靶点相互作用网络图;通过Digsee数据库筛选溃疡性结肠炎相关靶点,构建疾病-靶点相互作用网络图;筛选两个网络图的核心靶点,利用DAVID工具对核心靶点进行富集分析。结果:数据库共检索到溃疡性结肠炎相关方剂731首,根据纳入、排除标准筛选后获得处方304首,中药220味,经用药频次统计后,以甘草、人参、白术为溃疡性结肠炎扶正治则的代表药物。基于药代动力学ADME参数对上述药物的化学成分进行筛选和靶标预测,共得到136个蛋白靶点;将化合物-靶点、疾病-靶点的蛋白质—蛋白质相互作用网络图合并,以"节点连接度""节点介度"和"节点紧密度"为评价标准,筛选共有靶点129个;对入选靶标进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,以P值筛选出前20条通路在溃疡性结肠炎方面具有作用。结论:扶正药物治疗溃疡性结肠炎作用的发挥是多靶点、多通路的整体效应,挖掘了溃疡性结肠炎扶正治则的潜在机制,为进一步实验研究提供了理论基础。     

温阳解毒化瘀颗粒对肝衰竭IETM大鼠TLR4 mRNA,TNF-α及肝细胞凋亡的影响

目的:研究Toll样受体4(TLR4) mRNA及其下游炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与肝衰竭肠源性内毒素血症(IETM)大鼠肝细胞凋亡的关系,并探索温阳解毒化瘀颗粒对内毒素介导的肝细胞凋亡的调控机制。方法:SPF级雄性SD大鼠85只,随机分为正常组,模型组,TLR4单克隆抗体组和温阳解毒化瘀颗粒组(8.925 g·kg^-1)。采用D-半乳糖胺(D-Gal)腹腔注射建立肝衰竭IETM模型,TLR4单克隆抗体组和温阳解毒化瘀颗粒组在造模前5 d给予温阳解毒化瘀颗粒溶液灌胃,正常组、模型组以等容积蒸馏水代替,直至处死。各组分别在24,48,72 h随机处死大鼠并采集标本。检测24,48,72 h各组时间点血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织TLR4 mRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肝组织TNF-α表达,流式细胞仪检测肝细胞凋亡率。结果:与正常组比较,模型组ALT,AST升高,肝组织病理损伤程度明显加重,TLR4mRNA,TNF-α表达均增高(P<0.05,P<0.01),肝细胞凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,温阳解毒化瘀颗粒组ALT,AST显著降低(P<0.01),肝组织病理损伤程度明显减轻(P<0.05),TLR4 mRNA,TNF-α表达显著下降(P<0.01),肝细胞凋亡率亦显著降低(P<0.01)。结论:TLR4 mRNA,TNF-α在肝衰竭时与肝细胞凋亡呈正相关,温阳解毒化瘀颗粒能够改善肝衰竭IETM大鼠肝功能,减轻肝细胞损伤,减少肝细胞凋亡,其机制可能与其下调肝脏TLR4 mRNA表达,抑制TNF-α释放,降低肝细胞凋亡率有关。