WTAP基因在胃癌组织中低表达

目的探讨WTAP基因在胃癌组织样本中的表达变化情况,并检测其对胃癌细胞表型的影响。方法用RTq PCR的方法检测45例胃癌组织及其对应的癌旁组织中WTAP mRNA的表达量,并结合临床病理资料进行分析;使用RNA干扰方法敲低内源性WTAP在胃癌细胞系MGC-803中的表达,再通过CCK-8实验、划痕迁移实验和transwell实验,检测WTAP表达降低后对MGC-803细胞功能的影响。结果 WTAP mRNA在胃癌癌症组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.05),且其表达与胃癌样本的临床分期密切相关(P0.05);在MGC-803细胞系中敲低WTAP,可促进胃癌细胞增殖、促进细胞迁移和侵袭。结论 WTAP在胃癌组织中低表达,可能与其发生发展有关,有望成为胃癌诊治的靶标。     

WTAP在肿瘤中作用的研究进展

N⁶-甲基腺嘌呤(N⁶-methyladenosine,m⁶A)是真核生物信使RNA中最普遍的一种修饰。Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(Wilms'tumor 1-associating protein,WTAP)作为m⁶A甲基化转移酶的调控亚基,与 甲基转移样蛋白3(methyltransferase-like protein 3,METTL3)、甲基转移样蛋白14 (methyltransferase-like protein 14,METTL14)组成WMM复合物,催化m⁶A的产生。大量证据表明,WTAP可以通过调控RNA代谢,影响肿瘤的发生和进展,并与肿瘤的预后有着显著的相关性。本篇综述将关注WTAP的生物学功能和肿瘤中的作用,以及其作为肿瘤治疗潜在靶点的可行性。     

WTAP在肝母细胞瘤增殖和进展中的作用

  目的  探讨RNA甲基化酶WTAP在肝母细胞瘤细胞中的生物学功能。  方法  收集2016年8月至2020年6月同济大学附属第十人民医院手术治疗的肝母细胞瘤患者的肿瘤组织和正常对照组织13对,采用Western blot检测组织中WTAP的表达,在肝母细胞瘤细胞系中转染siRNA敲减WTAP,慢病毒包装WTAP过表达载体WTAP过表达,使用qPCR和Western blot检测敲减和过表达效率,采用CCK8实验检测细胞增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡。裸鼠皮下成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力。  结果  WTAP在肝母细胞瘤组织中高表达（P=0.000 7）;Huh6细胞（P=0.000 2）和HepG2细胞（P=0.003 0）中的WTAP表达水平与QSG-7701细胞相比显著升高,Huh6细胞（P< 0.000 1）和HepG2细胞（P=0.003 5）中的WTAP表达水平与HL-7702细胞相比也显著升高。在肝母细胞瘤细胞中敲减WTAP后,细胞增殖活性和克隆形成能力受到显著抑制,而过表达WTAP则显著增强了细胞增殖活性和克隆形成能力。流式细胞术检测结果显示,Huh6细胞MOCK组的凋亡细胞百分比（10.93±0.260 3）%显著低于siWTAP-1组[（16.43±0.633 3）%,P=0.001 3]和siWTAP-2组[（20.27±0.7535）%,P=0.000 3],HepG2细胞MOCK组的凋亡细胞百分比（4.733±0.1764）%显著低于siWTAP-1组[（14.33±0.272 8）%,P < 0.000 1]和siWTAP-2组[（15.33±0.272 8）%,P < 0.000 1]。WTAP稳定敲减细胞株形成的移植瘤的体积（701±82.31）mm3显著小于对照组[（200.2±31.59）mm3,P=0.000 1];WTAP稳定敲减细胞株形成的移植瘤的重量（0.636 8±0.083 91）g显著小于对照组[（0.135 6±0.033 29）g,P < 0.000 1];WTAP稳定敲减细胞株形成的移植瘤的Ki-67阳性细胞数（108±13.05）显著少于对照组[（406±14.73）,P=0.000 1]。  结论  WTAP在肝母细胞瘤细胞中发挥着促进增殖抑制凋亡的重要生物学功能,可能是肝母细胞瘤诊疗的一个潜在靶点。      

WTAP基因DNA甲基化与广西汉族儿童乙肝疫苗低/无应答水平的关联性

目的 探讨WTAP基因DNA甲基化与广西汉族儿童乙肝疫苗（HepB）应答水平的关联性,以期了解其他可能影响乙肝疫苗应答水平的遗传因素,为新型HepB的研发提供新的科学依据。方法 选取在2016年1月至12月间至广西3家医院就诊的8~9月龄且全程接种HepB的263名汉族儿童作为研究对象。对研究对象进行乙肝两对半检测,根据排除和纳入标准筛选符合要求的研究对象纳入本次研究。根据乙肝表面抗体浓度（抗-HBs）将研究对象分成无应答 （<10 mIU/mL）、低应答（10 mIU/mL≤抗-HBs<100 mIU/mL）、正常应答（100 mIU/mL≤抗-HBs<1 000 mIU/mL）和高应答 （≥1 000 mIU/mL）组,使用非匹配病例对照研究的方法,将抗-HBs<100 mIU/mL作为无/低应答组,≥100 mIU/mL作为正常/高应答组。采用Panel多重PCR技术、重亚硫酸盐转化技术和通过illumina平台进行高通量测序技术,分析研究WTAP基因38个CpG位点DNA甲基化与HepB免疫应答水平的关系。结果 经Mann-Whitney U检验比较无/低应答组和正常/高应答组WTAP基因的DNA甲基化水平后发现,无/低应答组WTAP_2基因43位点DNA甲基化水平低于正常/高应答组DNA甲基化水平（P<0.05）。非条件Logistics回归分析结果显示,WTAP_2基因的43位点DNA甲基化水平和HepB应答水平存在关联性（OR=0.73,95%CI： 0.538~0.995）,43位点DNA低甲基化水平降低了HepB低/无应答的风险。结论 WTAP_2基因的43位点的DNA低甲基化水平可能是广西汉族儿童HepB免疫低/无应答水平的保护因素,可为提高HepB低/无应答人群提高疫苗应答水平提供理论性参考依据。     

敲低WTAP表达抑制脑胶质瘤干细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨敲低Wilms肿瘤抑制因子（WTAP）表达对脑胶质瘤干细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制。方法 从手术切除胶质瘤标本中提取胶质瘤干细胞（GSC），应用lipofectamine2000转染WTAP shRNA质粒敲低WTAP表达，以shRNA为阴性对照；PCR检测WTAP mRNA水平分析敲低效率；MTT法检测细胞增殖能力，Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力，免疫印迹法检测细胞AKT磷酸化水平。结果 从胶质瘤标本中成功提取GSC，其SOX2表达显著降低（P<0.001），而α-SMA和PDGFRb的表达上调（P<0.001）。与阴性对照组相比，WTAP敲低组GSC细胞WTAP mRNA水平明显降低（P<0.05），细胞增殖、迁移和侵袭能力均显著下降（P<0.05），细胞AKT的磷酸化水平显著降低（P<0.05）。结论 敲低WTAP表达可抑制GSC的增殖、迁移和侵袭能力，其机制可能与抑制AKT磷酸化有关。