The alteration and potential relationship of vaginal microbiota and chemokines for unexplained recurrent spontaneous abortion

The diagnosis and treatment of unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA) is an important and hot topic in the field of obstetrics and gynecology. During our clinical investigation (observation), we have found that URSA patients usually experience recurrent vaginitis or vaginal dysbacteriosis during periods of non-pregnancy, pregnancy, and post-abortion. However, there is no research on vaginal dysbacteriosis''s influence on URSA. Using women with normal induced abortion as a control group, and using 16S rRNA sequencing, which helps to screen differentially expressed flora, this study discusses the relevance between differential bacteria at the genus level and the incidence of URSA. Another aim of this study is to determine whether certain pathogenic genera can cause an imbalance in immune tolerance of the maternal and fetal interface through regulatory chemokines, which leads to recurrent spontaneous abortion. This article has explored URSA pathogenesis from the perspective of differentially expressed vaginal flora, which has great theoretical significance for the early diagnosis and treatment of URSA.     

URSA患者子宫蜕膜树突状细胞的体外培养与鉴定

目的建立成熟、完善的不明原因性习惯性流产（unexplainedrecurrentspontaneousabortion,URSA）患者子宫蜕膜树突状细胞（dendriticcell,DC）的体外培养体系。方法选取2008年7月至2009年4月就诊于本院的妊娠早期流产的URSA患者（孕7～14周）,将其子宫蜕膜组织初步机械破碎,经混合酶（Ⅳ型胶原酶/DNA酶Ⅰ）消化法分离,梯度离心获得单个核细胞,以粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）和白介素4（IL-4）体外诱导培养,光镜观察,于第10天收集的悬浮细胞用FITC-HLA-DR、PE-Lin小鼠抗人抗体顺序标记,采用流式细胞术鉴定。结果从蜕膜组织可获取足够数量蜕膜树突状细胞,体外培养24h细胞聚集成大小不等葡萄串状,逐渐悬浮,长出突起,第9天悬浮细胞增多,单个悬浮为主,细胞仍小而圆、表面突起少等未成熟DC的形态特征,培养过程中夹杂有少许细长梭状巨噬细胞培养。流式细胞术鉴定培养到第10天的悬浮细胞中DC纯度达80%以上。结论混合酶消化合并梯度离心法能成功分离URSA患者蜕膜树突状细胞的前体细胞单个核细胞,经GM-CSF联合IL-4培养可以成功诱导具有未成熟特性的DC,为研究树突状细胞在URSA患者母胎免疫耐受中的作用奠定基础。     

白介素-12B基因多态性与原因不明复发性流产的易感性研究

目的:探讨IL-12B基因启动子区多态性与山东潍坊地区汉族育龄期妇女原因不明复发性流产(URSA)的相关性。方法:采用直接测序法检测83例原因不明复发性流产孕妇和90例正常孕妇IL-12B基因的启动子区的多态位点,并分析IL-12B基因多态性与原因不明复发性流产的关系。结果:IL-12B的启动子区检测到2个单核苷酸多态性(SNPs)(-671G/T和-405G/T)。2个SNPs紧密连锁,多态性分布符合Hardy-Weinberg平衡。URSA组和对照组的基因型和等位基因频率分布比较,差异无统计学意义(P0.05)。单体型分析显示,-671T/-405G频率在URSA组和正常对照组分别为0.65和0.41,URSA组显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:正常孕妇IL-12B基因启动子区存在多态性变异,其中-671G/T和-405G/T构成的单体型-671T/-405G可能与URSA的易感性有关。     

URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与miR-155表达的关系

目的:探究URSA患者绒毛组织中细胞凋亡及血管新生异常与miR-155表达的关系.方法:选择2014年1月~2015年1月来我院妇产科行清宫术后的孕妇的标本64例,其中URSA患者38例,剩余26例,将64例患者按照是否为URSA患者分为两组,即URSA组、对照组.对miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl及血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表达量记录,并与miR-155的表达量进行对比.结果:miR-155的表达量与细胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表达量呈正相关,与血管新生分子VEGF、HIF-1α的表达量呈正相关,与sFlt-1的表达量呈负相关,且两组患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表达量不同,URSA组显著低于对照组,且URSA组miR-155、VEGF、HIF-1α的表达量显著低于对照组,sFlt-1的表达量则显著高于对照组.结论:URSA绒毛组织中细胞的凋亡及血管新生与miR-155存在关系,且miR-155的表达量下降则会导致绒毛组织中的细胞过度凋亡.     

let-7f-5p在不明原因复发性流产绒毛组织中的表达及其功能研究

目的：筛选与不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion, URSA)相关的微小RNA（miRNA）,探讨其在URSA发生中的作用及其可能机制。方法：通过对URSA绒毛组织进行miRNAs测序,初步筛选差异表达的miRNAs;利用实时荧光定量PCR,验证筛选所得miRNAs表达水平;利用DAVID软件对靶基因进行Pathway分析;利用实时荧光定量PCR,检测p53通路中靶基因及其下游基因的表达水平。结果：let-7f-5p在URSA绒毛组织中表达水平显著上升;let-7f-5p的靶基因富集于p53通路,通路中靶基因MDM-X和其下游靶标促生长基因MDM2水平显著下降,促凋亡基因p53表达水平显著上升。结论：let-7f-5p可能调控p53信号通路中MDM-X/MDM2/p53基因,促进细胞凋亡,最终导致URSA发生发展。     

PEG10在不明原因复发性流产患者绒毛组织及配偶精子中的甲基化状态及表达情况

目的研究不明原因复发性流产(URSA)绒毛组织与配偶精子PEG10的甲基化水平及其蛋白和mRNA表达情况。方法收集2014年1月-2016年10月在广东医科大学附属医院生殖中心就诊的URSA患者100例为G2组,其配偶100例为G4组;早期妊娠自愿人工流产者100例为G1组,其配偶100例为G3组。免疫组化法及蛋白免疫印迹法检测PEG10印记基因的蛋白水平,RT-PCR法检测PEG10 mRNA水平。在所有队列中严格匹配URSA患者及配偶和早期妊娠自愿人工流产患者及配偶各3例,包括6份绒毛样本及6份精液样本行甲基化芯片检测PEG10的甲基化水平。结果 PEG10基因的DMR区平均甲基化水平在URSA绒毛组织和早期妊娠自愿人工流产绒毛组织间比较,差异有统计学意义(P0.05);PEG10基因的DMR区平均甲基化水平在URSA患者配偶精子和早期妊娠自愿人工流产患者配偶精子间比较,差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,PEG10在URSA绒毛组织的表达水平与早期妊娠自愿人工流产绒毛组织比较表达较弱。蛋白免疫印迹法结果显示,PEG10蛋白在URSA绒毛组织中的表达水平与早期妊娠自愿人工流产绒毛组织比较明显降低(P0.001)。RT-PCR法结果显示,PEG10mRNA在URSA绒毛组织中的表达水平与早期妊娠自愿人工流产绒毛组织比较明显降低(P0.001)。结论父本印记基因PEG10与胚胎早期的发育有相关性,其低表达是URSA的可能原因之一,通过检测精子PEG10的甲基化水平不能推断早期胚胎发育的情况。     

药物治疗对不明原因复发性流产患者Th_1、Th_2细胞因子的影响

目的:通过观察安胎种子丸治疗对不明原因复发性流产(URSA)患者Th1、Th2细胞因子的影响,探讨其治疗URSA的机理。方法:33例URSA患者用安胎种子丸治疗,每次6克,3次/日,3个月为一疗程。采用酶联免疫吸附法分别检测33例URSA患者治疗前后和正常妇女(30例)血清Th1(IL-2)细胞因子、Th2(IL-10)细胞因子水平,观察治疗前后患者血清中Th1(IL-2)、Th2(IL-10)水平的变化。结果:治疗前URSA患者IL-2水平明显高于正常妇女,IL-10水平明显偏低,差异均有显著性(P<0.05);治疗后与治疗前相比,IL-2水平明显降低,IL-10水平明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。结论:安胎种子丸可能通过调节细胞因子平衡而达到保胎作用,初步揭示其安胎的机理。     

Efficacy and Safety of "URSA Complex" in Subjects with Physical Fatigue: A Multicenter,Randomized, Double-blind,Placebo-controlled Trial

Background:

Fatigue is a common symptom both in diseases status and in healthy subjects. Various supplements and nutraceuticals for relieving of fatigue have been used. However, there are a few studies to evaluate the efficacy and the safety of the drug for fatigue alleviation, we conducted using URSA Complex to evaluate the efficacy on physical fatigue via score changes in the checklist individual strength (CIS).

Methods:

The study was designed as a multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled trial, with subjects randomized to one of the two arms, receiving either placebo or URSA Complex administered as identical capsules. The primary efficacy endpoints of this clinical trials are the ratio of improving CIS scores < 76 points in patients at the end (4 weeks). Secondary efficacy variables are as follows one is an improvement of fatigue and the other is an improvement of the liver enzyme.

Results:

The fatigue recovery rate in who had improved CIS scores of < 76 points were 70.0%, 50.9% in the therapy group and placebo group, respectively (P = 0.019). The fatigue recovery rate in CIS score was higher in URSA Complex therapy group than placebo group. The difference between therapy group and placebo group was statistically significant at 4 weeks later, but not 2 weeks.

Conclusions:

Our results provided that the URSA Complex was effective in alleviating physical fatigue. The adverse event frequency in the therapy groups was similar to that in the placebo group.     

不明原因复发性流产的体质类型分布的调查研究

近几年,不明原因的复发性流产有逐渐上升的趋势,发病率为1%～5%,是妇科中较难处理的疾病,直接影响患者的生殖健康。本文探讨关于不明原因复发性流产患者的体质类型分布。以此为依据,通过中医辨质调体指导用药,预防或减少复发性流产。     

男性少、弱、畸、精子症与不明原因复发性流产的关系

目的探讨少、弱、畸、精子症与不明原因反复自然流产的关系。方法 307对不明原因反复自然流产夫妇按照男方精液特征分别分为：A组（n=38）;B组（n=26）;C组（n=141）;D组（n=102）,正常生育组男性组为E组（n=126）,比较各组精子浓度,精子活力,正常精子形态,精子染色质分析实验检测精子损伤,流式细胞术检测精子凋亡情况。分别比较精子DNA损伤及精子凋亡。结果 A组及B组精子浓度、活力、正常精子形态比例均低于其他组,精子DNA损伤、精子凋亡均高于其他各组。结论少弱畸精子症组及少弱精子症组精子DNA损伤明显增加,精子凋亡增多,提示凋亡参与了精子DNA损伤的发生;少弱畸精子症及少弱精子症患者DNA损伤增高可能是导致不明原因反复自然流产的原因之一。