胶质瘤中MKK7与c-Jun磷酸化的表达及其相关性

目的 探讨胶质瘤中MKK7和c-Jun磷酸化（p-c-Jun）的表达及意义，分析两者表达的相关性。方法 选取弥漫型星形细胞瘤（15例）、少突胶质细胞瘤（5例）、间变性星形细胞瘤（11例）、间变性少突胶质细胞瘤（8例）、胶质母细胞瘤（53例）及其瘤旁正常脑组织（25例）共117例，采用免疫组织化学法检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达。体外培养神经胶质瘤细胞株U87，用脂质体转染MKK4-siRNA、MKK7-siRNA和对照siRNA，48 h后Western blot检测MKK7、c-Jun及p-c-Jun的表达水平。结果 胶质母细胞瘤中p-c-Jun及MKK7的表达均明显高于其他组织学类型胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中的表达（P=0.000, P=0.000）。随着胶质瘤WHO分级的升高，p-c-Jun及MKK7的表达增高，且与WHO分级呈明显正相关（r=0.494, P=0.000; r=0.606, P=0.000）。胶质瘤及胶质母细胞瘤瘤旁正常脑组织中MKK7与p-c-Jun的表达存在正相关关系（r=0.387, P=0.000）。沉默神经胶质瘤细胞株U87 MKK7表达抑制了c-Jun磷酸化水平。结论 MKK7可以通过调控JNK/c-Jun活性进而促进胶质母细胞瘤的发生。     

柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响，并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响，LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用，MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬，表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多（P＜0.05）。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生（P＜0.05），且3-MA抑制自噬后，SSD对SW480的增殖抑制效应减弱（P＜0.05），提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。     

MAGE-A1 和MAGE-A3在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

[摘要] 目的：探讨黑色素瘤抗原基因-A1（MAGE-A1）和MAGE-A3 在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义。方法：选取2006 年1 月至2010 年1 月河北医科大学第四医院神经外科手术切除的78 例脑胶质瘤组织标本和15 例车祸死亡捐献者的正常脑组织标本。用RT-PCR法检测胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 的表达，分析其表达水平与患者预后的关系；用MSP-PCR术检测MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区的甲基化状态，分析两者表达与甲基化之间的关系；用RT-PCR法检测胶质瘤U251 和U87 细胞中MAGE-A1 和MAGE-A3 表达以及经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2''-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）联合作用后两者的表达水平。结果：78 例胶质瘤组织中MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA阳性表达率分别为65.34%和38.46%，而在15 例正常脑组织中未发现2 种mRNA表达。MAGE-A1 阳性组患者5 年生存率较阴性组低（P<0.05）。MAGE-A1 和MAGE-A3 基因启动子区去甲基化水平与其在mRNA水平上的表达均有显著的相关性（均P<0.01）。未经5-Aza-CdR 和TSA处理的U87 细胞未见MAGE-A1 和MAGE-A3 mRNA的表达，U251 细胞则有少量表达。单独给予TSA不能引起MAGE-A1 和MAGE-A3 基因的表达激活，单独给予5-Aza-CdR 或与TSA合用可以引起该2 个基因的表达激活，且两者合用的作用优于单独给药。结论：脑胶质瘤组织中有不同程度的MAGE-A1 和MAGE-A3 基因表达，MAGE-A1 基因表达与患者的预后不良相关。DNA启动子区甲基化和组蛋白乙酰化是MAGE-A1和MAGE-A3基因表达激活的重要机制。     

榄香烯联合中频交变微电流抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的探索榄香烯联合中频交变微电流对胶质瘤U251细胞活力、凋亡和周期的影响。方法中频交变微电流作用胶质瘤U251细胞,筛选最佳作用参数;运用CCK-8法分析榄香烯不同药物浓度对U251细胞活力的影响;将U251细胞分为对照组、中频交变微电流组(50 kHz、150 mA、30 min)、榄香烯组(IC_(50):235μmol/L)、中频交变微电流与榄香烯联合组,连续作用3天后,观察细胞形态,利用CCK-8、流式细胞术分析中频交变微电流、榄香烯对胶质瘤U251细胞活力、凋亡和周期的影响。结果中频交变微电流的最佳作用参数为:50 kHz、150 mA、30 min,榄香烯的IC_(50)为235μmol/L;与对照组比较,中频交变微电流组、榄香烯组、联合组细胞存活率降低,分别为[(86.5±0.3)%、(51.7±2.3)%、(36.2±1.0)%,P0.05]。中频交变微电流组、榄香烯组、联合组的凋亡率分别为(17.2±2.7)%、(47.5±2.2)%、(68.5±1.7)%,均高于对照组[(4.4±1.2)%,P0.05];中频交变微电流组、联合组均将细胞阻滞于G_2/M期。结论榄香烯联合中频交变微电流可抑制U251细胞的活力、促进细胞凋亡、改变细胞周期,能够协同抗肿瘤。     

lncRNA MLK7-AS1通过抑制miR-375的表达促进胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）MLK7-AS1在人脑胶质瘤组织中表达及其对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响。方法 选择2016~2017年手术切除的脑胶质瘤组织标本45例，2007版WHO分级Ⅰ级8例，Ⅱ级15例，Ⅲ级10例，Ⅳ级12例。另选择其中10例瘤旁正常脑组织作对照。体外培养U251细胞和人正常星形胶质细胞（NHA）。U251细胞根据转染质粒分成四组:转染miR-375 mimic组、转染si-MLK7-AS1组、同时转染miR-375 inhibitor和si-MLK7-AS1组以及只转染miR-375 inhibitor组。RT-qPCR检测MLK7-AS1和miR-375的表达水平；荧光素酶报告基因实验验证MLK7-AS1与miR-375之间的关系；CCK-8法检测U251细胞增殖活性，Transwell实验检测U251细胞侵袭能力。结果 高级别胶质瘤组织MLK7-AS1表达水平明显高于低级别胶质瘤组织（P<0.05），而后者明显高于瘤旁正常脑组织（P<0.05）；高级别胶质瘤组织miR-375表达水平明显低于低级别胶质瘤组织（P<0.05），而后者明显低于瘤旁正常脑组织（P<0.05）。U251细胞MLK7-AS1表达水平明显高于NHA（P<0.05），miR-375表达水平明显低于NHA（P<0.05）。序列分析显示MLK7-AS1和miR-375 存在特异性结合序列，荧光素酶报告基因实验表明U251细胞MLK7-AS1负调控miR-375表达。沉默MLK7-AS1表达通过上调miR-375表达明显抑制U251细胞增殖和侵袭（P<0.05）。结论 lncRN AMLK7-AS1可能通过调节miR-375的表达水平在人脑胶质瘤中发挥着促癌的作用     

全自动尿沉渣分析仪Sysmex UF-1000i的性能评价

目的评价Sysmex UF-1000i全自动尿沉渣分析仪(简称Sysmex UF-1000i)的性能,以探讨其是否符合临床要求。方法按照实验室ISO15189要求,检测白细胞(WBC)计数、红细胞(RBC)计数、上皮细胞(EC)计数、管型(CAST)计数及细菌(BACT)计数5项指标的批内精密度、批间精密度、携带污染率、线性范围、准确度并验证生物参考区间。结果 Sysmex UF-1000i对白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、上皮细胞(EC)、管型(CAST)、细菌(BACT)的低值质控批内精密度、高值质控批内精密度、低值质控批间精密度、高值质控批间精密度、低值质控准确度、高值质控准确度,以及RBC、BACT的携带污染率(分别为0.02%和0.00%)均符合厂家要求。WBC、RBC、BACT的线性相关系数r2分别为0.999 4,0.999 8,0.999 8,r2均不低于0.95,线性良好。结论 UF-1000i各项性能均符合ISO15189对性能评价的要求,可应用于临床尿液沉渣的检验。     

氯丙嗪协同斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞的增殖抑制作用

目的探讨盐酸氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6对人喉癌Hep-2细胞株的增殖抑制作用及其对细胞周期进程的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测单独斑蝥酸钠维生素B6制剂及盐酸氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6制剂对Hep-2细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期进程的变化。结果单独斑蝥酸钠维生素B6组对Hep-2细胞增殖有明显的抑制作用,而斑蝥酸钠维生素B6联合氯丙嗪效果明显高于单独斑蝥酸钠维生素B6组。流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,且细胞凋亡率升高。结论斑蝥酸钠维生素B6对Hep-2细胞生长、增殖及其对细胞周期进程均有抑制作用,尤其是氯丙嗪联合斑蝥酸钠维生素B6组效果显著。     

大蒜素抑制肝癌MHCC97H细胞的迁移、侵袭

目的:观察大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株体外增殖、迁移、侵袭及对MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响并初步探讨其机制.方法:以肝癌MHCC97H细胞株为研究对象,MTT法、Transwell小室实验检测不同浓度大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株迁移、侵袭能力的影响.实时定量PCR检测(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法检测不同浓度大蒜素对MHCC97H细胞株MMP-2、MMP-9、CD24 mRNA表达的影响.结果:MTT显示大蒜素抑制MHCC97H细胞增殖(P0.01),呈现剂量依赖性.Transwell小室实验显示大蒜素抑制MHCC97H细胞的迁移(P0.01),一定范围内呈现剂量依赖性,大蒜素组侵袭细胞较阴性对照组显著减少(P0.01).qRT-PCR检测发现不同浓度大蒜素可以下调MHCC97H细胞MMP-2、MMP-9、CD24的表达,且呈现一定程度剂量依赖性(P0.01).结论:大蒜素对肝癌MHCC97H细胞株的增殖、迁移、侵袭有抑制作用,且在一定范围内呈现出剂量依赖性.其机制可能与抑制其MMP-2、MMP-9、CD24 mRAN的表达有关.     

双U套入荷包捆绑式胰肠吻合术预防术后胰瘘的动物实验

目的：探讨双U套入荷包捆绑式胰肠吻合术在降低胰肠吻合术后胰瘘等并发症发生率中的作用。 方法：采用实验猪建立胰肠吻合手术模型,将实验猪随机分为双U组及套入组,每组5只,分别采用双U套入荷包捆绑式胰肠吻合术和普通套入式胰肠吻合术,术后1周将猪处死,观察胰肠吻合口大体及镜下改变,对比研究两组实验动物术后胰瘘及吻合口出血等并发症的发生率。 结果：两组间手术时间及术中出血量无统计学差异（P>0.05）;与套入组比较,双U组实验猪术后胰瘘及吻合口出血的发生率均降低（P<0.05）。 结论：双U套入荷包捆绑式胰肠吻合术能显著降低胰肠吻合术后胰瘘及出血的发生率,并且简单易行,是一种值得推广的新的胰肠吻合术式。