吡那地尔后处理大鼠缺血再灌注损伤心肌线粒体的蛋白质组学研究

 目的: 运用蛋白质组学研究方法探讨吡那地尔后处理对缺血再灌注损伤大鼠心肌的保护作用。方法: 建立Langendorff大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型,随机分为吡那地尔后处理组(Pina组)和缺血再灌注损伤组(I/R组),每组9只。提取心肌线粒体蛋白质行双向凝胶电泳,应用质谱鉴定差异大于2倍的蛋白质点。结果: Pina组与I/R组比较,共发现7个差异蛋白质:Pina组NADH脱氢酶1α亚复合体10亚基(NDUFA10)﹑NADH脱氢酶铁硫蛋白2(NDUFS2)和NADH脱氢酶黄素蛋白2(NDUFV2)表达低于I/R组;Pina组异柠檬酸脱氢酶α亚基(IDHA)和Δ^3,5-Δ^2,4-二烯酰辅酶A异构酶(ECH1)表达高于I/R组;另有2个蛋白质点均被鉴定为ATP合酶δ亚基,一个蛋白质点表达升高,而另一个表达降低。结论:吡那地尔后处理可能抑制了复合体Ⅰ的亚基(NDUFA10﹑NDUFS2和NDUFV2)代偿性增加,但促进了IDHA和ECH1表达并引发了ATP合酶δ亚基发生磷酸化,这些改变可能均与吡那地尔后处理保护心肌的作用有关。     

吡那地尔对压力负荷性心力衰竭大鼠心肌重塑的影响

目的探讨吡那地尔对压力负荷性心力衰竭大鼠心功能及心肌重塑的影响。方法腹主动脉缩窄法建立大鼠压力负荷性心力衰竭模型,40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组（n=10）、手术组（n=20）和吡那地尔组（n=10）。吡那地尔组大鼠从术后4周开始应用KATP开放剂吡那地尔2mg·kg-1·d-1治疗。术后第12周行血流动力学检测动脉收缩压、舒张压,左室内压上升下降最大速率（±dp/dtmax）和左室舒张末压（LVDEP）。酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清B型脑钠肽（BNP）、I型胶原和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP）浓度。处死大鼠后称量心脏质量,计算心脏重量指数（心脏质量/体质量）。HE染色计算心肌纤维直径。结果①手术组大鼠心脏重量指数和心肌纤维直径均明显升高,吡那地尔组均显著降低;②手术组收缩压、舒张压、LVEDP明显升高,吡那地尔组明显降低;±dp/dtmax在手术组明显降低（P〈0.01）。手术组血清BNP水平明显升高,吡那地尔组虽然也降低,但仍高于假手术组（P〈0.01）;③手术组I型胶原和PⅢNP的血清浓度明显大于假手术组。吡那地尔组均明显降低（P〈0.01）。结论吡那地尔可改善大鼠腹主动脉缩窄术后的心脏肥厚和心肌纤维化,延缓心力衰竭的进展。     

含钾通道开放剂的HTK液对大鼠心功能以及线粒体结构和功能的影响

目的 观察含钾通道开放剂的供心保存液对心功能以及能量代谢、线粒体呼吸酶活性及超微结构的影响.方法 将SD大鼠分为HTK组、Pi组、5HD组、1098组和5HD+1098组.切取SD大鼠心脏,建立Langendorff灌注模型,平衡10 min,然后按分组进行如下处理:HTK组心脏以Histidine-Tryptophan-Ketoglutarate液(HTK液)停搏;Pi组心脏以含0.5 mmol/L吡那地尔(Pi)的HTK液停搏;1098组心脏以含0.5 mmol/L Pi和100 μmol/L HMR1098的HTK液停搏;5HD组心脏以含0.5 mmol/L Pi和100 μmol/L五羟葵酸(5HD)的HTK液停搏;5HD+1098组心脏以含0.5 μmol/L Pi、100 μmol/L 5HD和100μmol/L HMR1098的HTK液停搏.停搏后,将心脏置于各组相应的液体(4℃)中保存8 h,然后用含氧的37℃克-亨液(K-H液)再灌注60 min.观察各组平衡末、保存末、再灌注末时的心功能、线粒体呼吸酶活性、心肌ATP含量及心肌细胞线粒体超微结构的改变.结果 Pi组保存末、再灌注末的心功能(心率、左心室舒张末压、左心室发展压和冠状动脉流量)、心肌线粒体呼吸酶(NADH氧化酶、琥珀酸氧化酶、细胞色素C氧化酶)活性及ATP含量均优于其他各组(P<0.01或P<0.05),同时线粒体的结构改变也最轻.结论 含Pi的HTK液能改善大鼠心脏保存效果;Pi对能量状态的维持以及对线粒体结构与功能的保护可能是其心肌保护的重要机制.     

吡那地尔预处理对兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应的影响

目的 评价吡那地尔预处理对兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应的影响.方法 日本大耳白兔56只,随机分为4组:正常对照组(C组,n=8)、缺血再灌注组(I/R组,n=16)、吡那地尔预处理组(P组,n=16)和格列本脲组(G组,n=16).建立离体心脏Langendorff再灌注模型,灌注充氧K-H液,待心率平稳10 min时,C组取心肌组织,测定丙二醛(MDA)、补体C3a、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和细胞核NF-κBp65表达;I/R组继续灌注充氧K-H液40 min;P组灌注充氧K-H液10 min后,灌注10 μmol/L充氧吡那地尔30 min;G组灌注10 μmol/L充氧格列本脲10 min后,再灌注10 μmol/L充氧吡那地尔30min.随后I/R组、P组和G组行全心缺血40 min,再灌注充氧K-H液.I/R组、P组和G组分别于心率平稳10 min、再灌注30、60 min时取8个心脏,测定冠状静脉流出液中肌酸激酶(CK)活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度;再灌注60或120 min时测定心肌组织MDA、补体C3a、ICAM-1及细胞核NF-κBp65表达.结果 P组再灌注期间CK、TNF-α、MDA、补体C3a、ICAM-1和NF-κBp65水平均明显低于其他各组(P＜0.05).结论 吡那地尔预处理可减轻兔心脏缺血再灌注时心肌炎性反应,可能与ATP敏感性钾通道开放有关,从而对心肌产生保护作用.     

吡那地尔联合硝酸甘油对兔缺血再灌注心肌的保护作用

目的 观察吡那地尔联合硝酸甘油对兔缺血再灌注心肌的保护作用。方法 50只家兔随机分为假手术组（SO）、缺血再灌注组(I/R)和硝酸甘油组（NG）、吡那地尔组（PN）、硝酸甘油+吡那地尔组(PN+NG)5组,每组10只。分别于再灌注即刻0（T0）、30（T30）、60（T60）、120min（T120）取静脉血2ml离心后用硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）,羟胺法检测超氧化物歧化酶（SOD）,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）、肌酸激酶（CK）;各组分别于再灌注后30（T30）、60(T60)、90(T90)、150min（T150）采集心室发展峰压（LVSP）等心室内压指标。各组于再灌注结束后原位结扎冠状动脉,伊文思蓝、氯化三苯基四氮唑双染缺血再灌注心肌后使用计算机辅助软件（Image Pro Plus, Media Cybernetics）计算心肌梗死面积。 结果 ①血生化指标：SOD：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均高于I/R组(P＜0.01或P＜0.05),NG+PN组高于NG、PN组(P＜0.01);MDA：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均低于I/R组(P＜0.01或P＜0.05),NG+PN组低于NG、PN组（P＜0.01）;NO：在各时间段SO、NG、PN组和NG+PN组均高于I/R组(P＜0．01或P＜0.05),NG+PN组高于NG、PN组(P＜001)。②心功能指标：LVSP：在各时间点I/R、PN、NG、PN+NG组较SO组明显下降（P＜0.01）;在T150时,I/R组LVSP较NG、NG+PN、PN组下降（P＜0.01）或（P＜0.05）;NG、PN组较NG+PN组下降（P＜0.01）。③心肌酶：CK:在各时间点NG、PN、PN+NG、I/R组较SO组均有显著提高（P＜0.01或P＜0.05）。④心肌梗死面积：再灌注结束后NG、PN、NG+PN组与I/R组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）,其中NG+PN组较NG、PN组缩小（P＜0.01）。结论 硝酸甘油、吡那地尔具有明显的抗兔心肌缺血再灌注药理性预适应的心肌保护作用,合用优于单用。     

盐酸埃他卡林对正常大鼠肺内动脉平滑肌细胞钾电流的影响

目的　观察盐酸埃他卡林 (Iptakalimhydrochloride ,Ipt)对大鼠动脉平滑肌细胞钾电流的作用。方法　用胶原酶I消化、分离大鼠肺内动脉平滑肌细胞 ,用全细胞记录 (wholecellrecording)技术记录细胞钾电流 ,通过浴槽内给药 ,观察药物对钾电流的影响。结果　以给药前记录钾电流为 10 0 % ,在给予盐酸埃他卡林 1.0、10 0 .0 μmol·L-1后 ,1min记录的钾电流幅度分别为(114 .9± 3.8) % (n =8)和 (114 .0± 3.5 ) % (n =5 ) ,与溶媒对照组 (87.0± 3.5 ) % (n =8)相比 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。在相同条件下给予吡那地尔 (Pinacidil) 1.0 μmol·L-1后 ,钾电流幅度为 (93.6± 4 .1) % (n =8) ,与溶媒对照组相比无显著性差异(P >0 .0 5 ) ;但当吡那地尔浓度增加到 10 0 .0 μmol·L-1时 ,钾电流幅度为 (12 8.1± 13.3) % (n =4 ) ,与溶媒对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　Ipt对动脉平滑肌细胞钾电流有增强作用。     

Mechanisms of pinacidil-induced vasodilatation

The mechanism of the vasodilator effect of pinacidil was examined. Pinacidil (0.1–100 μM) inhibited the increases in cytosolic Ca²⁺ ([Ca²⁺]_i) and muscle tension due to norepinephrine in rat aorta. In contrast, a Ca²⁺ channel blocker, verapamil, inhibited the norepinephrine-stimulated [Ca²⁺]_i more strongly than the contraction. Higher concentrations of pinacidil (3–100 μM) inhibited the verapamil-insensitive portion of the contraction and [Ca²⁺]_i. An inhibitor of ATP-sensitive K⁺ channels, glibenclamide, antagonized the inhibitory effect of low concentrations ( 10 pM) of pinacidol. Pinacidil did not change the contraction induced by Ca²⁺ in vascular smooth muscle permeabilized with Staphylococcus aureus -toxin. Norepinephrine (in the presence of GTP), 12-deoxyphorbol 13-isobutyrate (in the absence of GTP), and treatment with GTP_γS potentiated the contraction of permeabilized smooth muscle induced by the addition of Ca²⁺. Pinacidil (100 μM) inhibited the potentiation due to GTP_γS or noepinephrine but not to phorbol ester. These results suggest that pinacidil has dual effects on vascular smooth muscle contraction. At lower concentrations (>0.1 μM), it decreases [Ca²⁺]_i, possibly by activating ATP-sensitive K+ channels. At higher concentrations (> 3 μM), it may additionally inhibit the receptor-mediated, GTP-binding protein-coupled phosphatidyl inositol turnover.     

匹那地尔对大鼠缺血心肌钙调控的作用

目的 :探讨大鼠缺血心肌再灌注 (I- R)损伤的钙调控机制及匹那地尔对心肌 I- R损伤的保护作用机理。方法 :取 SD大鼠 ,心室肌细胞酶解分离 ,心肌细胞静息 1～ 2 h后随机分为 4组 :对照组、高钾停搏液组、匹那地尔强化组、格列苯脲拮抗组。 4组细胞在 2 4℃下保存 2 h后 ,复氧、复灌 2 0 min同时测定 [Ca2 + ]i 瞬态变化、肌浆网内贮钙释放功能。结果 :经匹那地尔强化处理的心肌细胞在 I- R过程中 [Ca2 + ]i 瞬态变化恢复率明显高于高钾停搏液组 (90 .2 7%～ 95 .5 7% vs6 7.0 5 %～ 80 .11% ,P<0 .0 1)。肌浆网内贮钙释放能力 (173.15 %± 2 6 .0 1% )明显高于高钾停搏液组 (112 .0 0 %± 16 .93% ) (P<0 .0 1)。经匹那地尔强化处理的心肌细胞在咖啡因诱导的钙释放后 ,胞内钙离子浓度从高水平回复到舒张末静息水平的时间为 (3.2 0± 0 .71) ms,显著短于高钾停搏液组 (3.93± 0 .4 6 ) ms(P<0 .0 5 )和对照组 (4 .6 8± 0 .77) ms(P<0 .0 1)。结论 :匹那地尔通过肌浆网和细胞膜 Na+ /Ca2 +交换体功能来调节钙瞬态变化 ,减少细胞内钙超载使心肌细胞在 I- R过程中保持较好的钙调控功能。     

钾通道开放剂Pinacidil及其类似物的合成

不同烷基取代的吡啶氰胍类化合物均具一定降压活性,Pinacidil是这类药物的代表,为一新型的降压药物。我们设计并合成了10个3-吡啶取代的类似物(均未见文献报道),并通过元素分析,MS,~1HNMR和IR确定了它们的结构。初步的药理试验表明,大部分化合物均有一定的降压活性,深入的药理工作正在进行之中。     

Effect of a New Vasodilator,Pinacidil (P 1134), on Potassium,Noradrenaline and Serotonin Induced Contractions in Rabbit Vascular Tissues

Abstract: Ring preparations of rabbit aorta were contracted by potassium (127 mM). Pinacidil (P 1134), a new vasodilator (2.3×10^?5 M), the calcium antagonists verapamil (3.4×10^?7 M), nifedipine (3.4×10^?9 M) and hydralazine (1.9×10⁴ M) relaxed the preparation by 50%. 50% relaxation of noradrenaline-contracted tissues was obtained with pinacidil, 6.8×10^?5 M, verapamil, 2.4×10^?4 M and hydralazine, 1.9×10^?3 M. At 2×10^?7 M concentration nifedipine was almost inactive. In ring preparations of rabbit aorta exposed to calcium-free medium and then depolarized with potassium (127 mM), pinacidil, 5×10^?5 M and nifedipine, 10^?8 M significantly inhibited the contractions by cumulative addition of calcium. Hydralazine, 10^?3 M had no effect. Noradrenaline-induced contractions in calcium-free medium or in presence of increasing amounts of calcium were significantly inhibited by nifedipine, 10^?8 M and hydralazine, 10^?3 M. Pinacidil, 10^?4 M had no effect. Pinacidil, 1.3×10^?5 M and verapamil, 2.0×10^?5 M inhibited by 50% the serotonin-induced increase of perfusion pressure of isolated rabbit ear artery. The noradrenaline effect in this preparation were 50% inhibited by pinacidil, 2.4×10^?4 M and by verapamil, 8.8×10^?5 M. Hydralazine, 10^?3 M exerted minor inhibitory effect. It is suggested that interference with calcium influx contributes to the vasodilator activity of pinacidil.