宫颈癌组织AKT和P-AKT表达与LMVD相关性及其对新辅助化疗效果预测意义

目的 宫颈癌新辅助化疗(neoadjuvant chemotherapy,NACT)的疗效一直存在争议,PI3K/AKT通路在肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭及抗凋亡都起到举足轻重的作用.本研究探讨NACT对宫颈鳞状细胞癌AKT通路中AKT及P-AKT的表达对肿瘤微淋巴管生成的影响,并分析其变化与NACT临床疗效的关系.方法 采用免疫组化SP法分别检测2011-03-01-2016-03-31滨州医学院附属医院收治的47例 ⅠB2~ⅡB期宫颈鳞癌患者行NACT前后AKT和P-AKT的表达情况及肿瘤微淋巴管密度(lymphatic microvessel density,LMvD)的变化.结果 免疫组化检测结果显示,NACT前AK和P-AKT的阳性率分别为93.6%和72.3%,化疗后阳性率分别为44.7%和36.2%,NACT前后比较,AKT和P-AKT表达差异有统计学意义,P<0.001.化疗前宫颈鳞癌组织中LMvD计数为20.87±3.31,化疗后宫颈鳞癌组织中LMvD计数为16.47±3.44,化疗后宫颈鳞癌组织中LMvD明显降低,t=6.32,P<0.001.化疗前宫颈鳞癌AKT阳性的LMvD为21.14±3.19,高于阴性组(17.00±3.00).Spearman相关分析显示,化疗前后LMvD的表达(rs=0.39,P=0.007)与化疗前后P-AKT的表达(rs=0.66,P<0.001)均呈正相关.化疗后LMvD与化疗后AKT的表达呈正相关,rs=0.58,P<0.001.淋巴结转移与化疗前后LMvD均呈正相关(rs=0.44,P<0.001;rs=0.36,P=0.013).淋巴结转移的患者化疗前化疗后LMvD均高于淋巴结未转移者.结论 化疗前P-AKT的表达及化疗后AKT和P-AKT的表达与肿瘤微淋巴管生成呈正相关,LMvD与淋巴结的转移呈正相关,化疗前P-AKT的表达有可能作为预测宫颈癌新辅助化疗疗效的指标.     

慢性间歇低氧对大鼠糖代谢及肝脏 TRB3、P-AKT 表达的影响

目的：通过建立慢性间歇低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,观察CIH 对大鼠糖代谢的影响以及肝脏胰岛素相关信号通路 Tribbles 同源蛋白3(TRB3)、磷酸化蛋白激酶 B (P-AKT)的变化。方法将40只健康雄性 SD 大鼠随机分为5组,每组8只。正常对照组(NC组)、慢性间歇 低 氧 2 周 组(CIH2组)、慢 性 间 歇 低 氧 4 周 组(CIH4组)、慢性间歇低氧6周组(CIH6组)、慢性间歇低氧8周组(CIH8组),实验组每天给予8 h 间歇低氧处理。实验结束后检测5组大鼠空腹血糖,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测空腹胰岛素,用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)系统评价胰岛素抵抗。采用 HE 染色观察各组肝脏组织形态变化,SABC 法免疫组织化学试剂盒检测大鼠肝细胞 TRB3蛋白以及胰岛素信号通路中关键激酶蛋白激酶 B (AKT)磷酸化水平蛋白的表达,以平均灰度值表示 TRB3、P-AKT 的蛋白表达量。结果随着间歇低氧暴露时间延长,各组与 NC 组比较,其空腹血糖水平(F =116.185,P <0.05)、胰岛素水平(F =45.189,P <0.05)、HOMA-IR (F =110.876,P <0.05)、TRB3蛋白表达水平(F =11 5.253,P <0.05)升高,而 P-AKT 蛋 白 表 达 水 平(F =99.553,P <0.05) 降 低,且以 CIH8组 最 为 显 著 (P <0.05)。Pearson 相关分析显示： HMOA-IR 与 TRB3平均灰度值呈负相关(r =-0.828,P <0.05),与P-AKT平均灰度值呈正相关(r =0.903,P <0.05)。结论 CIH 可导致大鼠肝细胞受损,糖代谢异常,发生胰岛素抵抗,并随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。CIH 使肝脏中 TRB3蛋白表达增加,P-AKT 显著降低,且与 HOMA-IR 具有明显的相关性,TRB3的激活可能在 CIH 所致的糖代谢异常中起重要作用。     

他克莫司对大鼠肝脏组织蛋白磷酸酶2A和P-AKT表达的影响

目的 通过观察他克莫司对大鼠血糖、胰岛素水平、肝脏组织蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT表达的影响,进一步探究他克莫司导致血糖升高的机制。方法 将60只雄性SD大鼠（89.83?.44g）随机均分为他克莫司组和对照组,他克莫司组（n=40）,每日空腹（禁食水8小时）灌胃给药,剂量为4mg/kg?d;对照组（n=20）,每日空腹灌胃给予等量生理盐水,每月测量大鼠体重、空腹血糖, 5个月后处死大鼠,心脏穿刺取血,;取胰腺组织和肝脏组织,测大鼠血清胰岛素水平,行胰腺组织病理组织学观察,并对肝脏行组织处理和免疫组织化学技术检测肝细胞浆质中蛋白磷酸酶2A和磷酸化AKT的表达。结果 用药2个月后,他克莫司组大鼠的血糖水平明显高于对照组（P＜0.05）,他克莫司组大鼠的胰岛素分泌指数、胰岛素敏感指数和均明显低于对照组（P＜0.05）;胰岛素抵抗指数明显增高（P＜0.05）。他克莫司组大鼠与对照组相比,其肝细胞浆质内PP2A表达明显增加,磷酸化的AKT表达明显减少。结论 他克莫司导致胰岛细胞坏死,胰岛细胞数量减少,胰岛素的分泌降低、胰岛素敏感性下降、胰岛素抵抗增加,从而导致大鼠血糖升高。他克莫司增加大鼠肝脏组织PP2A的表达,减少肝脏组织磷酸化的AKT的表达,可能通过PI3K/AKT信号转导途径参与胰岛细胞凋亡和胰岛素抵抗,引起血糖的升高。     

拉帕替尼联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响

目的探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼联合顺铂(DDP)对人卵巢腺癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用以及对磷酸AKT蛋白表达的影响。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT方法检测不同浓度拉帕替尼、DDP单用或者合用对细胞增殖活力的改变;用流式细胞仪进行细胞周期分析;用流式细胞仪检测SKOV3应用拉帕替尼前后磷酸化AKT(P-AKT)蛋白的表达。结果拉帕替尼及顺铂单独使用即对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞有增殖抑制作用,不同浓度的拉帕替尼与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制作用较单药组增强(P<0.05),与对照组相比有统计学意义(P<0.05);应用拉帕替尼前后P-AKT蛋白的表达有显著不同(P<0.05)。结论拉帕替尼联合顺铂可显著抑制SKOV3细胞株的增殖,其作用可能与P-AKT的表达有关,为其在卵巢癌上的应用提供了新的靶点和一定的理论基础。     

PP2Ac在人不同类型肺癌组织和肺癌细胞中的表达

目的研究PP2Ac在人不同类型肺癌组织和肺癌细胞中的表达．方法用免疫组化方法从组织水平上观测临床获取人不同类型肺癌标本组织的PP2Ac蛋白表达；用Westernblot分子生物学方法从细胞水平上测定两种人肺癌细胞株（YTLMC-90和GLC-82）的PP2Ac和p-AKT蛋白表达．结果免疫组化结果显示：在人肺鳞癌、腺癌和小细胞肺癌三种肺癌组织中的PP2Ac蛋白表达与肺癌患者的性别、年龄和肿瘤分化程度均无明显相关性（P〉0．05）；在人肺鳞癌组织和小细胞肺癌组织细胞浆中均未见有PP2Ac蛋白表达，但在其间质有阳性表达；在人肺腺癌组织中PP2Ac蛋白呈阴性表达，而p-AKT蛋白却呈现强阳性表达．Westemblot结果表明：在人正常肺组织细胞中PP2Ac蛋白呈正常表达；YTI．MC-90细胞中PP2Ac蛋白较人正常肺组织表达稍弱，而在GLC-82细胞中表达明显减弱，甚至缺失；在人正常肺组织细胞中p-AKT蛋白呈低表达，给予GLC-82细胞加入PP2A抑制剂OA（岗田酸），在6h、12h、24h的不同时间点，p-AKT蛋白的表达均较未加OA组明显增强，PP2Ac和p-AKT蛋白表达呈反相关．结论PP2Ae可能参与肺癌的发生，其表达水平可能与肺癌细胞病理类型有关．AKT的活化（P-AKT）可能与肺癌的发生发展密切相关．     

P-AKT、FASN蛋白与骨肉瘤的相关性研究

目的探讨骨肉瘤组织中P-AKT及FASN中的表达情况及其与预后的关系。方法采用免疫组织化学方法及Western blot法检测P-AKT、FASN在50例骨巨细胞瘤组织及50例骨肉瘤组织中的表达,并分别分析其与预后的关系。结果免疫组织化学结果显示,P-AKT在骨巨细胞瘤中的阳性表达率为62.00%,显著低于其在骨肉瘤中的表达80%。FASN在骨巨细胞瘤中的阳性表达率为26%,显著低于其在骨肉瘤中的表达62%(P0.05)。Western blot检测结果与免疫组织化学结果一致。直线相关分析显示,P-AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关,FASN的表达与软组织浸润相关;直线相关显示,P-AKT及FASN的表达呈显著正相关。结论P-AKT的表达与软组织浸润及转移密切相关,FASN的表达与软组织浸润相关,且均在骨肉瘤中表达上调,提示两种基因可能与骨肉瘤的发生发展有关。     

PTEN与P-AKT在胃癌中的表达及意义

目的：检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）与磷酸化丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶B（P．AKT）在胃癌和癌旁组织中的表达,探讨它们在胃癌发生、发展中的作用。方法：应用免疫组织化学EliVision法,检测68例胃癌及其癌旁组织中PTEN和P—AKT蛋白表达水平,同时对68例胃癌和癌旁组织采用反转录一聚合酶链反应检测其中PTENmRNA的表达。结果：PTEN蛋白在胃癌组织中表达低于癌旁组织（P〈0．01）,P—AKT蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织（P〈0．01）,两者呈负相关关系（P〈0．05）。胃癌组织中PTEN蛋白的表达在性别和年龄间差异均无统计学意义（P〉0．05）,但在分化程度、肿瘤大小、临床分期和淋巴结转移表达差异均有统计意义（P〈0．01）。胃癌组织中P—AKT蛋白表达在性别、年龄和肿瘤大小间差异均无统计学意义（P〉0．05）,但在分化程度、临床分期和淋巴结转移间表达差异均有统计学意义（P〈0．05）。胃癌组织PTENmRNA的半定量表达明显低于癌旁组织PTENmRNA的半定量表达（P〈0．01）。结论：PTEN基因在胃癌组织中低表达,癌旁组织蛋白表达也明显高于胃癌组织,P—AKT蛋白在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,两者在胃癌中的表达呈负相关。     

葛根素对PI3K/AKT通路介导PASMCS凋亡的影响

探讨葛根素(puerarin,Pue)对缺氧抑制的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的影响,并研究细胞外信号PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导PASMCs凋亡的过程。以血清饥饿组(SD组)为对照组,通过噻唑蓝比色法(MTT)、Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和蛋白免疫印迹法检测Pue对大鼠PASMCs凋亡情况的影响。采用蛋白免疫印记法检测PI3K/AKT通路是否参与了Pue诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡的进程中。结果显示,①常氧条件下Pue对PASMCs细胞凋亡无影响,缺氧可抑制PASMCs凋亡,常氧及缺氧条件下Pue对TNF-α表达无影响。Pue可以逆转缺氧诱导的Bcl-2(P<0.01)表达上调以及Bax(P<0.01)表达下调。②常氧情况下Pue对P-AKT的表达没有影响,LY294002与Pue均可抑制缺氧诱导的Bcl-2,P-AKT表达上调以及Bax表达下调,与缺氧单独加Pue或缺氧单独加入LY294002对比,缺氧+Pue+LY294002组Bcl-2,Bax,P-AKT表达变化更显著。结果表明,Pue可诱导缺氧抑制的PASMCs凋亡,并且可能是通过PI3K/AKT通路调控的。     

P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：分析磷酸化的血管内皮生长因子受体3（P-VEGFR-3）、磷酸化的蛋白激酶（P-AKT）、磷酸化的血小板源性生长因子α受体（P-PDGFR-α）及淋巴内皮标记物D2-40在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及子宫内膜炎症性疾病中的蛋白表达差异,以探讨其临床检测价值。方法对有淋巴结转移的子宫内膜癌、无淋巴结转移的子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及子宫内膜炎症性疾病患者的石蜡组织标本各25例进行免疫组织化学染色,显微镜下观察P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达情况。应用SPSS16.0统计学软件分析各组之间的差异性,等级资料和率的比较分别采用Riddit分析及Fisher检验。结果有淋巴结转移的子宫内膜癌组织P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达率和阳性表达程度均明显高于无淋巴转移的子宫内膜癌组织,且无淋巴转移的子宫内膜癌组织P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40的阳性表达率和阳性表达程度均明显高于子宫内膜不典型增生组织,各指标的组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,但子宫内膜不典型增生和炎症性疾病组织之间各指标比较差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 P-VEGFR-3、P-AKT、P-PDGFR-α及D2-40与子宫内膜癌的发生及淋巴结转移密切相关,临床上可作为其发病和预后的评估指标。