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1.
骨质疏松研究热点:骨髓间充质干细胞分化命运   总被引:12,自引:11,他引:1       下载免费PDF全文
骨质疏松症是一种常见的代谢性骨病,以骨量减少、骨密度降低和骨微结构破坏为特征,容易发生脆性骨折,其发病率逐年增高.骨质疏松症发病与骨平衡的破坏有关,一方面破骨细胞活性增强、骨吸收加快,另一方面成骨细胞功能衰减、骨形成不足,最终导致净骨量丢失.成骨不足与骨髓间充质干细胞分化方向密切相关.在骨质疏松症患者中,骨髓间充质干细胞向脂肪方向分化增多,向成骨方向分化减少,其分化命运受BMP/Smad、Wnt、Notch、Hedgehog等多条信号通路调控,并涉及转录调控、转录后调控和表观遗传等多种调控机制,是目前研究的热点与焦点.未来研究可集中于寻找决定骨髓间充质干细胞分化方向的关键因子和间充质干细胞移植,为骨质疏松症的治疗提供新思路.  相似文献
2.
RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT—PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),并评价其敏感性和特异性。方法:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3’末端加尾,再用5’带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig—dT引物进行反转录,得到约80nt的cDNA,然后用特异引物进行SYBRGreen实时定量PCR扩增。结果:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3’末端碱基不同的亚型,但对序列中间个别碱基不同的亚型不能鉴别。对15种miRNA在大鼠心、肝和大脑皮层的相对表达的检测验证了该法的可靠性。另外,海马组织中的miRNAs表达与大脑皮层组织有一定差异。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。结论:该法可快速、敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs。  相似文献
3.
鼻咽癌差异表达miRNAs筛选研究   总被引:7,自引:0,他引:7       下载免费PDF全文
 【目的】应用miRNAs芯片筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs,并寻找差异表达miRNAs调控的靶基因,为进一步研究其在鼻咽癌发病机制中的作用打下基础。【方法】运用miRNAs芯片技术筛选原代培养的鼻咽癌细胞差异表达miRNAs,同时运用miRNAs特异的引物组对差异表达的miRNAs进行荧光定量RTPCR验证。运用靶基因预测软件并结合全基因组表达谱芯片结果预测差异表达miRNAs可能调控的靶基因,并利用westernblot技术检测预测的靶基因在原代培养的鼻咽癌细胞中的表达。【结果】miRNAs芯片结果显示,鼻咽癌中miR-203、miR-503、miR-424、miR-141和miR-148a表达下调,而miR-25、miR-195和miR-15a表达上调,其差异表达均在2倍以上;荧光定量RTPCR结果与miRNAs芯片的结果较符合;其中miR-203的预测靶基因为CCNG1和SPARC,Western blot结果显示,其在原代培养的鼻咽癌细胞亦高表达。【结论】miR-203、miR-503、miR-424、miR-141、miR-148a、miR-25、miR-195、miR-15a在原代培养的鼻咽癌细胞与正常鼻咽上皮细胞中存在差异表达;CCNG1和SPARC可能是miR-203调控的靶基因,可能参与了鼻咽癌的发生发展。  相似文献
4.
小鼠肝脏特异的微RNA真核表达载体的构建及鉴定   总被引:7,自引:3,他引:4  
目的利用分子克隆技术,构建微RNA(microRNA,miRNA)真核细胞载体.方法人工合成小鼠肝脏特异的微RNA(miR-122)前体基因序列,并添加酶切位点及polyT转录终止序列,经退火处理后形成双链结构,插入小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体pAVU6 27中,经酶切鉴定和测序证实后,构建成为miR-122真核表达载体(pAVU6 27-mir122).结果合成的基因序列完全正确并成功克隆到真核表达载体pAVU6 27上.结论 miR-122真核表达载体的构建,为进行真核细胞转染及miR-122表达的研究奠定了基础.  相似文献
5.
6.
Ⅱ级膀胱尿路上皮癌microRNA差异表达及意义   总被引:5,自引:4,他引:1  
目的microRNA(miRNA)通过调节原癌基因/抑癌基因或miRNA自身丢失/突变参与肿瘤的发生与形成,其差异表达可作为肿瘤早期诊断、疗效、预后评估的指标,有望成为肿瘤治疗的新靶点。膀胱尿路上皮癌是我国泌尿系恶性肿瘤中最常见的肿瘤,其发病机制目前仍不清楚。文中对Ⅱ级膀胱尿路上皮癌细胞中miRNA的差异表达及意义进行初步探讨。方法取手术切除的新鲜Ⅱ级膀胱尿路上皮癌及正常膀胱黏膜组织各3例保存于液氮中,用Trizol试剂提取总RNA,用Nanodrop及变性琼脂糖凝胶电泳进行RNA检测,用标记酶Hy3^TM荧光基团标记RNA的探针和miRCURY^TM芯片杂交,用GenePix4000B芯片扫描仪及GenePixproV6.0进行图像采集和数据分析,用荧光定量RT—PCR验证。结果Ⅱ级膀胱尿路上皮癌与正常膀胱黏膜上皮组织共有21个差异表达基因,表达上调者12个:hsa—miR-203、hsa—miR-876—3p、hsa—miR-29b-1*、hsa—miR-665、hsa—miR-668、hsa—miR-181b、hcmv—miR—US25—2—5p,hsa—miR-768—3p,hsa—miR-548d-5p、hsa—miR-518c*、hsa—miR-145*,hsa—miR-363*,表达下调者9个:hsa—miR-126、hsa—miR-140—3p、hsa—miR-223、hsa—miR-300、hsa—miR-24—2*、hsa—miR-627、hsa—miR-142—3p、hsa—miR-744、hsa—miR-142—5p随机选择hsa—miR-363*、hsa—miR-627、hsa—miR-768—3p、hsa—miR-3004个基因差异表达的miRNA用RT—PCR验证,与基因芯片结果一致。结论膀胱尿路上皮癌与正常膀胱黏膜组织中存在差异表达的miRNA基因,可能是导致膀胱尿路上皮癌的发生及发展的重要原因。  相似文献
7.
心律失常发病机制研究进展   总被引:5,自引:0,他引:5       下载免费PDF全文
心律失常是心血管疾病常见的临床表现形式,尤其是室性心动过速、心室颤动等恶性心律失常,不但加重原有心脏疾病,还可诱发心源性猝死。目前抗心律失常药物的疗效并不十分理想,总有效率只有30%~60%。人们对心律失常作用机制的认识仍有限,因此,揭示心律失常发生的深层机制,寻找新的作用靶点是抗心律失常研究领域的重点、难点。近年人们发现心房特异性钾离子通道电流IKur、IKAch等参与了心房颤动,这使心房颤动治疗的研究向前推进一步。钙渗漏、缝隙连接蛋白及钙通道自身抗体在心律失常发生中发挥重要作用。这些发现为开发更有效的抗心律失常药物提供了理论基础。近年研究发现,一类调控基因的小分子RNA(microRNA,miRNA)在心血管疾病的发生、发展中起重要作用,特别是对心律失常及其引起的猝死起关键作用。miR-1、miR-133、miR-590等对心肌缺血、心肌梗死伴随的心律失常表现出明显调控作用。miRNA的生物学特性是同时对多个靶点具有调控作用,这使其具有成为理想抗心律失常靶点的潜力,为心律失常及猝死的防治带来希望。  相似文献
8.
小鼠肝脏特异的微RNA在HeLa细胞中的转染与表达   总被引:4,自引:2,他引:2  
目的观察miR-122在HeLa细胞内表达情况.方法将构建的miR-122真核表达质粒pAVU6 27-mir122以电穿孔法转染HeLa细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,通过Northern杂交和点杂交验证miR-122在HeLa细胞中的表达.结果阳性转染细胞与小鼠肝脏细胞Northern杂交及斑点杂交均出现放射自显影,而转染空质粒的HeLa细胞则无放射显影.结论 miR-122在HeLa细胞中获得正确表达.  相似文献
9.
耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中microRNA的分析   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 本研究通检测乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉索耐药株MCF-7/ADR的microRNA的表达差异,探讨microRNA与乳腺癌化疗耐药的关系.方法 MTT法检测MCF-7/ADR相对于其亲本细胞MCF-7的耐药性和耐药倍数;microRNA芯片和RT-PCR的方法比较阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR与其对应的MCF-7乳腺癌细胞株microRNA表达差异.结果 乳腺癌的阿霉素耐药株MCF-7/ADR相对于其亲本细胞系MCF-7对阿霉素的耐药倍数为33.2倍.microRNA芯片的结果显示耐药株MCF-7/ADR与亲本细胞系MCF-7比较有16个microRNA高表达,20个microRNA低表达:RT-PCR的结果进一步证实mir-221、mir222、mir-130a、mir-155在MCF-7/ADR中显著上调.而mir200a、mir-200b、mir-200c、mir-421在MCF-7/ADR中显著下调.结论 MCF-7/ADR与MCF-7的microRNA的表达存在着差异,提示mieroRNA参与乳腺癌化疗耐药,为进一步研究microRNA在乳腺癌耐药机制中的作用打下基础.  相似文献
10.
RNA干扰——一种有力的基因沉默工具   总被引:3,自引:0,他引:3  
彭辉兵  全智华 《医学综述》2007,13(3):177-180
RNA干扰(RNAi)自从1998年被阐明以来,一直是科学研究的一大热点。短短几年,基于此机制建立的技术,在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛应用,已经成为一种有力的基因沉默方法。尤其对非编码RNA中的短干扰RNA与微小RNA的研究日益受到重视。本文从RNAi技术的发展、作用机制及应用等方面进行综述。  相似文献
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