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1.
永生化人成牙本质细胞样细胞系的建立   总被引:20,自引:1,他引:19  
目的:建立永生化人成牙本质细胞系.方法:采用脂质体转染法,将人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因导入原代人成牙本质细胞样细胞.培养液加G418筛选约1mo后,抗性细胞克隆形成,滤纸片法转移、扩增并连续培养.检测转染细胞内hTERT的基因整和和表达,初步分析细胞系的生物学特征.结果:hTERT稳定转染入目的细胞,表达mRNA及其蛋白.转染后共获得5个细胞克隆,克隆5b来源的细胞在体外长期连续培养下生长良好,具有较高碱性磷酸酶活性,在转录水平表达成牙本质细胞特异性标志牙本质涎磷蛋白,细胞核型正常.该细胞系至今传代56代,约6mo,命名为hTERThOd-L结论:建立起永生化人成牙本质细胞样细胞系.  相似文献
2.
建立巴马长寿老人经EBV转染永生细胞株的方法   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的:建立用EBV转化长寿人群外周血淋巴细胞永生细胞株(LCL)的方法。方法:用EBV份百岁以上健康老人,20份89-99岁健康老人及8份66岁以下健康人的血样共36份。采用20%FBS RPM11640培养液,配合环孢菌素A、植物血凝素(PHA),置37℃5%CO2培养箱内培养。结果:成功地获得24份永生细胞株(其中,百岁老人6份,89-99岁老人12份,66岁以下6份)。结论:采血后24-48h之间接种,转化成功率高。转染后2-3周,大部分标本出现细胞分裂、变形,标志着转化成功。超过5周仍无细胞分裂者即发生细胞凋亡。PHA有缓解细胞凋亡的作用,但不能使细胞分裂。污染是引起转染细胞株凋亡的主要因素。严格的无菌操作、保持培养细胞的适当密度、适时换液、打散较大的细胞克隆团是培养LCL的关键。  相似文献
3.
目的 了解多种癌细胞上是否较广泛表达生长抑素 2型受体,同时了解 p53突变与否对生长抑素 2型受体的表达有无影响。方法 用 RT-PCR和克隆的人生长抑素 2型受体 cDNA为探针检测人胃上皮永生细胞、人胃癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、膀胱癌细胞共 10株细胞上该受体 mRNA的表达。结果 发现除 1株胰腺癌细胞外,其余 9个细胞株均表达生长抑素 2型受体。一株胃癌细胞分别转染了野生型和突变型的 p53基因,也同样表达生长抑素 2型受体。 结论 提示生长抑素 2型受体在癌细胞的表达有较大的普遍性,在胃癌细胞中生长抑素 2型受体的表达与 p53是否突变可能无关。  相似文献
4.
海南省黎族永生细胞库的建立   总被引:6,自引:0,他引:6  
采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞同时加环孢菌素A法,建立了海南黎族永生细胞库。该库共含有54株“润黎”永生细胞株,供血者均身体健康,且三代无与不同民族或不同支系通婚史。其中男性占56%,女性占44%,有亲缘关系者仅占13%  相似文献
5.
DNA永生化链和肿瘤干细胞关系的初步研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的:探讨DNA永生化链的分配方式与肿瘤干细胞之间的关系.方法:采用启动和促进两阶段化学诱癌方法在小鼠背部诱导皮肤肿瘤;用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测DNA永生化链在发育期、成年期小鼠皮肤成体干细胞及皮肤肿瘤干细胞中的滞留时间;图像分析DNA含量方法检测肿瘤细胞倍体变化.结果:诱癌4mo后,40只小鼠中有17只背部分别长出1~3个皮肤肿瘤.BrdU阳性细胞变化情况检测显示,24h后发育期、成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞和肿瘤组织的细胞均为阳性,阳性部位为细胞核;60d后发育期标记的小鼠皮肤上皮中仍有少数细胞为阳性,它们主要存在于毛囊的隆突部位(bulge),少数位于皮肤基底层.标记后30d检测成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞,结果均为阴性.标记后30d检测肿瘤组织发现仍有少数细胞BrdU阳性,这些肿瘤细胞主要分布在肿瘤实质组织和间质组织的交界部位;标记后60d检测,肿瘤组织中不再有BrdU阳性细胞.图像分析DNA含量方法发现上述17例小鼠肿瘤都是非整倍体核型.结论:小鼠皮肤成体干细胞存在DNA永生化链,其在有丝分裂过程中发生非随机分配,肿瘤干细胞中可能存在DNA永生化链,其分配方式趋向随机分配.  相似文献
6.
中国海南岛3个黎族主要支系永生细胞系的建立与保存   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的:建立侾黎、杞黎、本地黎3个黎族主要支系的永生细胞库。方法:采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞并加环胞霉素A抑制T淋巴细胞建立永生细胞系。结果:成功地对侾黎、杞黎、本地黎的部分个体建立了永生细胞系。其中侾黎66株,杞黎76株,本地黎54株,共196株。结论:侾黎、杞黎、本地黎永生细胞库的建立使特有的黎族基因组得到系统地、永久地保存,并为分析其遗传学差异奠定了基础。  相似文献
7.
异鼠李素对HeLa细胞端粒酶活性的抑制作用   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的 观察异鼠李素对 He L a细胞生长的抑制和诱导凋亡的作用 ,并探讨端粒酶在此过程中的作用。方法 培养细胞加入异鼠李素 ,通过细胞增殖动力学、流式细胞术及 TRAP- EL IAS法检测异鼠李素对 He L a细胞凋亡及端粒酶活性的影响。结果 异鼠李素处理组细胞生长受到抑制 ,抑制作用均与浓度呈梯度关系 ,其 IC50 为(4 0± 0 .0 8) μg/ m l,端粒酶活性较对照组细胞降低 (P<0 .0 5 )。结论 异鼠李素可通过抑制 He L a细胞端粒酶活性而抑制肿瘤细胞的生长  相似文献
8.
乙型肝炎病毒感染者B淋巴母细胞系的建立   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 在体外建立HBV感染者永生化的B淋巴母细胞系(LCL),并鉴定其HLA-A基因亚型.方法 利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之永生化,用环胞菌素A(Cys A)抑制血液中T淋巴细胞的活性;用PCR-SSP法检测血样本的HLA-A基因亚型.结果 成功建立了HBV感染者的永生细胞株16株,其中急性乙肝4例,慢性乙肝10例,携带者2例.所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%.细胞株的HLA-A基因亚型包括1101、0201、0101、2403等.结论 转化后的LCL保持了良好的稳定性,既可能作为人源单抗的来源,也可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.永生化细胞HLA-A基因亚型的鉴定有可能使其成为异体相应亚型体外特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.  相似文献
9.
永生化软骨细胞体内软骨形成的实验研究   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的 探讨以永生化软骨细胞作为种子细胞构建和形成软骨的可能性。方法 把人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)导入兔髁状突软骨细胞 ,G418筛选 ,挑选阳性克隆扩增培养 ;实验组将扩增培养的转染细胞与细胞支架材料 β 磷酸三钙 ( β TCP)复合 ,对照组将正常软骨细胞与 β TCP复合或单纯 β TCP在体外培育后种植于裸鼠皮下 ,3和 6个月取材进行组织学和免疫化学检测 ,并与对照 1组和对照 2组进行比较。结果 实验组和对照 1组可见复合体包裹软骨样组织 ,对照 2组有少量纤维样组织形成。免疫组化染色显示 ,实验组番红“O”、甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色呈强阳性 ,有明显软骨组织形成 ,与对照组有显著性差异 (P <0 0 1) ,对照 1组染色呈弱阳性 ,对照 2组则为阴性。结论 永生化软骨细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞 ,具有较好的软骨形成能力  相似文献
10.
广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库的建立   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:建立广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库。方法:使用EB病毒转化外周血B淋巴细胞方法。结果:建立了长寿者外周血细胞转化永生细胞株的方法,转化成功率77.4%。建立了65株长寿老人、直系亲属永生细胞株及长寿老人资料库和完整的细胞株档案。结论:广西巴马长寿乡壮族长寿老人永生细胞库的建立为永久保存细胞系及后续研究提供了必要的基础。  相似文献
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