hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义研究

［摘要］　目的　探讨hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法　选择2021年9月至2022年3月广州医科大学附属第五医院甲乳外科收治的乳腺癌患者43例（乳腺癌组）,乳腺良性肿瘤患者54例（良性肿瘤组）,健康体检者45名（健康对照组）。采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测其血清hsa_circ_0001785的相对表达量,并进行三组间比较。分析hsa_circ_0001785表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的关联性。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析hsa_circ_0001785诊断乳腺癌的效能。结果　乳腺癌组血清hsa_circ_0001785表达水平显著高于良性肿瘤组和健康对照组（P<0.05）,良性肿瘤组和健康对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。ROC曲线分析结果显示,血清hsa_circ_0001785具有诊断乳腺癌的应用价值（AUC=0.780,P<0.05）,且诊断效能优于癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）。乳腺癌患者血清hsa_circ_0001785的表达水平与其年龄、肿瘤类型、TNM分期、淋巴结受累、远处转移、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人类表皮生长因子受体2（HER2）均无显著关联（P>0.05）。结论　hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中高表达,有作为乳腺癌诊断分子标志物的潜力。     

Hsa_circ_0008957靶MiRNA预测及其表达载体构建

目的构建Ⅰ型胶原蛋白结构基因COL1A2的靶向circRNA hsa_circ_0008957其靶向miRNA的功能。方法采用circbase软件,获取hsa_circ_0008957序列,采用PCR进行circRNA克隆,通过同源重组接入circRNA表达载体pCD2.1。重组载体pCD2.1-hCOL1A2_circ_0008957通过PCR、双酶切、Sanger测序进行验证。利用circBANK,circinteractome网站进行hsa_circ_0008957靶miRNA及其功能预测。结果pCD2.1-hCOL1A2-circ-0008957重组载体构建成功。Hsa_circ_0008957预测出该circRNA不具有蛋白编码功能,其靶miRNA hsa_miR_1305,hsa_miR_140-3p,hsa_miR_421,hsa_miR_548c_3p和hsa_miR_628-3p与成骨相关,预测hsa_circ_0008957可能通过这些miRNA参与成骨分化。结论Hsa_circ_0008957通过miR-1305、miR-140-3p、miR_421、miR_548c_3p和miR_628_3p参与成骨分化,且预测COL1A2靶向miRNA与17种miRNA取交集,得出hsa_miR_618,该miRNA与肿瘤疾病相关,为后续在细胞水平上进一步验证hsa_circ_0008957的调节功能奠定了基础。     

环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）、迁移、细胞周期和自噬的影响。 方法 取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度（0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^－1）雷帕霉素组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。 结果 PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）;与GES-1细胞比较, MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）。与空白组比较,0.25和0.50 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L^－1雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L^－1雷帕霉素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.05）,hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期细胞百分率降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率降低（P<0.05）,细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率降低（P<0.01）,S期细胞百分率升高（P<0.05）,G₂期细胞百分率升高（P<0.05）,E-钙黏蛋白表达水平降低（P<0.05）,Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高（P<0.05）。 结论 胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程。     

Hsa_circ_0054633 association of C peptide is related to IL‐17 and TNF‐α in patients with diabetes mellitus receiving insulin treatment

BackgroundChronic inflammation damaged the islet and resulted in dysfunction of T2D. Circular RNA is stable and better for biomarker in many diseases. Here, we aimed to identify potential circular RNA hsa_circ_0054633 that can be a biomarkers for the effects of insulin therapy in T2D.MethodsIn this retrospective case‐control study, patients were from Li Huili Hospital, Ningbo, China, from February 10, 2019, to August 15, 2019. We included 47 healthy adults, 46 new‐onset T2D with insulin resistance, and 51 patients with insulin therapy. Serum inflammation factors were tested by ELISA assays. We selected hsa_circ_0054633 as a candidate biomarker and measured its concentration in serum by qRT‐PCR. The Pearson correlation test was used to evaluate the correlation between this circRNA and clinical variables.ResultsClinical data indicated that serum C peptide was increased in T2D treatment with insulin. Serum hsa_circ_0054633 was decreased in insulin treatment group. Hsa_circ_0054633 was negative correlated with C peptide (r = −0.2841, p = 0.0433,). IL‐1 and IL‐6, IL‐17, and TNF‐α were higher in T2D patients and decreased after insulin treatment, only IL‐17 and TNF‐α showed a positive correlation to hsa_circ_0054633 (r = 0.4825, p < 0.0001, and r = 0.6190, p < 0.0001). The area under ROC curve was 0.7432, 0.5839, and 0.7573 for Hsa_circ_0054633, C peptide, and their combination.ConclusionHsa_circ_0054633 level was lower in T2D with insulin treatment than untreated and was a negative correlation with C peptide, and positively correlated with IL‐17 and TNF‐α, suggesting that hsa_circ_0054633 may be a potential early indicator of insulin treatment effect to improve inflammation condition.     

沉默环状RNA hsa_circ_0011021表达对宫颈癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

【摘要】 目的 探讨环状RNA（circRNA）hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和细胞株中的表达变化及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 选取河南科技大学第一附属医院就诊的15例宫颈癌患者,取15对宫颈癌组织和癌旁组织。qRT PCR实验检测hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌癌旁组织（Hela和SiHa）细胞中的相对表达水平;CCK 8和克隆形成实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞活性和克隆形成能力的影响;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测沉默hsa_circ_0011021对Hela细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）;hsa_circ_0011021在Hela和SiHa细胞中的相对表达水平明显高于人永生化表皮细胞HaCaT（P＜0.05）。在Hela细胞沉默hsa_circ_0011021,Hela细胞的活性和克隆形成能力显著降低,迁移距离明显减少,侵袭能力也明显下降（P＜0.05）。结论 hsa_circ_0011021在宫颈癌组织和宫颈癌细胞（Hela和SiHa）中的表达水平明显升高;沉默hsa_circ_0011021显著抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和侵袭。     

沉默环状RNA hsa_circ_0000591表达对肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的探讨环状RNA hsa_circ_0000591在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织以及肝癌细胞系中的表达,及其对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法收集2014—2018年广西医科大学附属肿瘤医院手术切除的84例HCC组织及其相应癌旁正常组织标本,采用qRT-PCR检测hsa_circ_0000591的表达,并分析其与预后的关系。将hsa_circ_0000591沉默慢病毒及阴性对照慢病毒感染肝癌Hep3B细胞,记为siRNA组和NC组。采用CCK-8实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果qRT-PCR检测结果显示,hsa_circ_0000591在HCC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.001),在肝癌细胞系Li-7、HepG2、Hep3B、Huh7及人体正常肝细胞系HL-7702中的表达差异有统计学意义(P<0.05),其中在Hep3B细胞中的表达量高于其余肝癌细胞系及正常肝细胞系HL-7702(均P<0.05)。与NC组比较,沉默hsa_circ_0000591后肝癌Hep3B细胞中的hsa_circ_0000591表达下调(P<0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力降低(P<0.05)。结论hsa_circ_0000591在肝癌中表达上调,沉默hsa_circ_0000591可抑制肝癌细胞增殖和迁移,hsa_circ_0000591可能是肝癌潜在的分子靶点。