P4对双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的：研究P4对双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立双氧水诱导SH-SY5Y细胞凋亡的模型,给予P4进行干预。应用Hoechst染色,测定细胞凋亡率。结果10uM的双氧水24 h可以使SH-SY5Y细胞凋亡率达到(56.33±13.17)%。然而,给予P4后,SH-SY5Y细胞的凋亡率明显减低,P4加双氧水组与双氧水组对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论P4对SH-SY5Y细胞的凋亡有保护作用。     

Persistence of side population cells with high drug efflux capacity in pancreatic cancer

AIM： To investigate the persistence of side population （SP） cells in pancreatic cancer and their role and mechanism in the drug resistance. METHODS： The presentation of side population cells in pancreatic cancer cell line PANC-1 and its proportion change when cultured with Gemcitabine, was detected by Hoechst 33342 staining and FACS analysis. The expression of ABCB1 and ABCG2 was detected by real- time PCR in either SP cells or non-SP cells. RESULTS： SP cells do exist in PANC-1, with a median of 3.3% and a range of 2.1-8.7%. After cultured with Gemcitabine for 3 d, the proportion of SP cells increased significantly （3.8% ± 1.9%, 10.7% ± 3.7%, t = 4.616, P = 0.001 〈 0.05）. ABCB1 and ABCG2 expressed at higher concentrations in SP as compared with non-SP cells （ABCB1： 1.15 ± 0.72, 5.82 ± 1.16, t = 10.839, P = 0.000 〈 0.05; ABCG2： 1.16 ± 0.75, 5.48 ± 0.94, t = 11.305, P = 0.000 〈 0.05）, which may contribute to the efflux of fluorescent staining and drug resistance. CONCLUSION： SP cells with inherently high resistance to chemotherapeutic agents do exist in pancreatic cancers, which may be candidate cancer stem cells contributing to the relapse of the tumor.     

Microvascular endothelial cell death and rarefaction in the glucocorticoid-induced hypertensive rat

OBJECTIVE: The objective was to quantify and to describe microvascular endothelial cell death in glucocorticoid-induced hypertension. Microvascular rarefaction, which has been shown in human and animal hypertension, may result from increased endothelial cell apoptosis. METHODS: Wistar rats were administered the synthetic glucocorticoid dexamethasone (0.5 mg/kg b.w. per day, i.m.) for 5 days and were compared with a group of control rats treated with the vehicle. In vivo microvascular endothelial cell death was quantified by propidium iodide fluorescent labeling in the mesentery. Normal nuclear DNA (labeled with Hoechst 33342) and DNA with apoptotic characteristics in muscle endothelium (labeled with ethidium bromide) were visualized using confocal imaging. Microvessel length density was measured by using a fluorescein isothyocyanate-labeled lectin technique. RESULTS: The dexamethasone-treated rats exhibit approximately a 10% increase in cell death along the mesenteric arteriolar and venular endothelium compared with controls. Confocal analysis of cremaster muscle in dexamethasone-treated rats demonstrated nuclear fragmentation and decreased nuclear volumes in dying endothelial cells, which are consistent with an apoptotic process. The capillary length density in cremaster muscle was decreased on average by 16% in the hypertensive rats. CONCLUSIONS: These results suggest capillary structural rarefaction by an increased rate of apoptotic endothelial cell death in glucocorticoid-induced hypertension.     

有氧训练对阿尔茨海默病模型大鼠海马区细胞凋亡的影响

目的观察有氧训练对阿尔茨海默病（Alzheimer）模型大鼠海马区细胞凋亡的影响。方法侧脑室注射β淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）制备认知功能障碍的AD鼠动物模型。模型制备成功后给予四周的有氧训练,Morris水迷宫试验检测大鼠的认知功能,Hoechst染色检测海马区细胞凋亡情况,以确定有氧训练对细胞存活的影响。结果①同对照组相比,AD鼠海马区Hoechst＋阳性细胞显著增多（P〈0.05）。②同未接受有氧训练组相比,有氧训练组鼠Hoechst＋阳性细胞显著减少（P〈0.05）。结论 Aβ能损害细胞存活,有氧训练能阻止Aβ对细胞存活的损害。     

不同浓度葡萄糖对大鼠大脑皮层神经元凋亡的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对大鼠大脑皮层神经元凋亡的影响。方法取新生1 d内SD大鼠的大脑皮层,皮层神经元经原代培养,通过胰蛋白酶消化法获取单细胞悬液,免疫荧光染色鉴定神经元纯度,然后随机分为正常组(葡萄糖浓度为25 mmol.L-1)及50、75、100 mmol.L-1葡萄糖组,Hoechst染色检测细胞凋亡,噻唑蓝比色法检测各组神经元活性。结果与正常组和50 mmol.L-1葡萄糖组相比,75、100 mmol.L-1葡萄糖组大鼠大脑皮层神经元凋亡率明显升高(P<0.01),活性显著下降(P<0.01);且100 mmol.L-1葡萄糖组大鼠大脑皮层神经元凋亡率高于75 mmol.L-1葡萄糖组(P<0.01),大鼠大脑皮层神经元活性低于75 mmol.L-1葡萄糖组(P<0.01)。结论高浓度的葡萄糖可引起大鼠大脑皮层神经元的凋亡,且神经元的凋亡情况呈剂量依赖关系。     

鹅绒藤中的黄酮苷类诱导肿瘤细胞凋亡的研究

目的观察不同浓度的鹅绒藤中黄酮苷类单体化合物山奈酚-7-O-α-L-鼠李糖苷（Monomer Compounds-Ⅴ,MC-Ⅴ）诱导肿瘤细胞凋亡的形态学变化及其凋亡率的检出。方法用浓度50、100和200μg·mL-1的MC-Ⅴ作用人宫颈癌Hela细胞、人胃癌MGC-803细胞和小鼠淋巴瘤YAC-1细胞48h和72h后,采用细胞凋亡荧光Hoechst33342/PI双染方法,在荧光显微镜下观察肿瘤细胞在加MC-Ⅴ后的形态变化过程,并计算三种肿瘤细胞的凋亡率。结果镜下可见正常对照组细胞质染色均匀,形态规则,呈均匀微弱蓝光;所有MC-Ⅴ作用的肿瘤细胞核固缩,染色质凝集,随着浓度的增加和作用时间的延长,细胞膜损坏加剧;在MC-Ⅴ作用的三种肿瘤细胞中,作用于Hela细胞,染色质边集化,部分染色质裂断;作用于MGC-803细胞,染色质部分高度凝集,核碎裂、边集化严重,呈现不均一的荧光显色结构;作用于YAC-1细胞,细胞核固缩凝集成小团块状结构。三种肿瘤细胞的凋亡率均随MC-Ⅴ浓度的增高及作用时间的延长而增大。结论MC-Ⅴ可以诱导不同的肿瘤细胞显示不同的凋亡形态,并呈时间和剂量依赖性,提示其作用于肿瘤细胞的作用机制不同。     

20（S）-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用

目的：研究20（S）-原人参二醇（PPD）对人胚肾293细胞（HEK-293细胞）生长抑制作用。方法：采用台盼蓝染色和噻唑蓝（MTT）法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果：PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度（IC50）为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论：PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。     

Huh7细胞中边缘群细胞分选及其增殖分裂能力的研究

目的:探讨Huh7细胞中边缘群细胞的分选及边缘群细胞在增殖及分裂能力方面与非边缘群细胞的差异,为肝癌的治疗探索新的思路。方法:采用流式细胞仪分选Huh7细胞中的边缘群细胞和非边缘群细胞,用荧光显微镜观察其胞内Hoechst33342荧光染色强度差异;以半定量RT-PCR测定ABCG2 mRNA表达水平的差异;应用免疫荧光染色检测ABCG2蛋白表达的差异并观察其增殖和不对称分裂能力的差异。结果:非维拉帕米处理组边缘群细胞比例约为2.22%,经维拉帕米阻断后边缘群细胞比例减少至0.74%;边缘群细胞中Hoechst33342的荧光强度明显较非边缘群细胞弱,在边缘群细胞中ABCG2 mRNA表达水平是非边缘群细胞的4.32倍(P<0.01),增殖能力是非边缘群细胞的2.7倍(P<0.01),且边缘群细胞能产生ABCG2(+)和ABCG2(-)子代细胞,而非边缘群细胞只能产生ABCG2(-)子代细胞。结论:Huh7细胞中存在少量边缘群细胞(2.22%),其增殖能力较非边缘群细胞强且具有不对称分裂能力(自我更新和定向分化),具有肿瘤干细胞的特性;因此边缘群细胞分选可以作为肿瘤干细胞分离的一种方法,并且在肿瘤的耐药和进展...     

卵巢癌侧群细胞流式分选方法的建立及探讨

目的:探讨分选卵巢癌细胞株SKOV3中的侧群(side population,SP)细胞的荧光染料Hoechst33342的最佳染色浓度及SKOV3的最适细胞密度.方法:制备SKOV3细胞悬液,以荧光染料Hoechst33342和7-AAD染色,维拉帕米拮抗对照,选择不同浓度的Hoechst33342(2.5,3,4,5,6 mg/L)孵育1×106个/mL SKOV3细胞90 min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例;选取不同细胞密度的SKOV3细胞悬液(6×105,7×105,8×105,9×105,1×106个/mL),3 mg/L的Hoechst33342孵育90 min,流式细胞仪检测SP细胞比例及活细胞比例.结果:通过Hoechst33342蓝光和红光双参数图,SP细胞位于左下角两种荧光均很弱的区域.Hoechst33342浓度不变时,SP细胞比例随细胞密度的增加而升高;SKOV3细胞密度不变时,SP细胞比例及细胞活性随hoechst33342浓度升高而降低.卵巢癌SKOV3细胞株在细胞密度为8×105个/mL,加入终浓度为3 mg/L的Hoechst33342,37℃水浴90 min,为最佳染色条件,此时SP细胞比例为(1.12±0.104)％,且细胞保持良好的活性.结论:人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞,Hoechst33342浓度及SKOV3细胞密度是影响SP细胞比例及细胞活性的重要因素.