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目的:建立稳定转染人宫颈癌癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)siRNA真核表达质粒的人胰腺癌PANC1细胞株,探讨siRNA干扰HCCR的表达后对人胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法:通过脂质体转染法将含HCCRsiRNA的真核表达质粒pGCsi-HCCR稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1,抗生素G418筛选获得稳转细胞株;Western blot检测PANC1细胞中HCCR的表达,同时检测肿瘤相关基因p53蛋白表达的变化;流式细胞仪检测PANC1细胞的细胞周期和凋亡率变化;MTT比色法检测siRNA干扰后对PANC1细胞增殖能力的影响:Transwell侵袭实验观察siRNA干扰后对PANC1细胞侵袭能力的影响.结果:Western blot证实siRNA稳转组的PANC1细胞株和空载体稳转组比较HCCR蛋白表达水平下调,稳转细胞株建立成功.siRNA稳转组p53蛋白表达下降.siRNA稳转组的S期细胞数目减少而G0/G1期细胞数目增加,细胞凋亡增加.MTT结果显示siRNA稳转组1和稳转组2细胞吸光度分别为空载体组细胞的0.65倍和0.68倍,细胞增殖能力下降.Transwell侵袭实验显示siRNA稳转组细胞和空载体组细胞穿膜数分别为24.4±9.9和49.1±15.4(P<0.01),稳转组细胞侵袭能力下降.结论:siRNA干扰HCCR的表达后能抑制胰腺癌PANC1细胞增殖和侵袭,促进其凋亡. 相似文献
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目的构建人宫颈癌致癌基因HCCR-1167-360片段的重组质粒,在原核细胞中表达并鉴定。方法从培养的人肝癌细胞株HepG2中提取总RNA,经RT-PCR扩增出HCCR-1167-360的cDNA片段,将其克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,将测序正确的HCCR-1167-360基因连接到pET30a(+)表达载体中,IPTG诱导在BL21中进行表达,用SDS-PAGE检测表达产物。采用初步纯化和割胶纯化方法,获得较纯的重组蛋白,采用弗氏佐剂方法免疫兔子,收获多克隆抗体,用Wastern blot鉴定重组蛋白的免疫原性。结果经测序证明获得了HCCR-1167-360基因片段。SDS-PAGE分析,HCCR-1167-360在BL21中获得表达,其相对分子质量为26kD左右,主要以包涵体形式存在。免疫兔子获得了HCCR-1167-360多克隆抗体,经Wastern blot检测结果表明获得了特异性的多克隆抗体。结论获得具有抗原性的HCCR-1167-360原核表达蛋白。 相似文献
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人HCCR蛋白表达载体的构建、表达及其蛋白纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:构建人HCCR蛋白表达载体,并探讨其体外表达及表达产物的纯化。方法:培养人肝癌细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pMBP-C,转化到大肠杆菌Top10F′中,进行诱导表达。表达产物通过Ni-NTA螯合层析进行纯化。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,Westernblot和电喷雾电离串联飞行时间质谱(ESI-TOFMS)鉴定表达产物。结果:构建的表达载体经限制性内切酶酶切分析和DNA测序,证明所构建的质粒含有HCCR基因。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白,这种蛋白不存在于诱导后的空载体表达产物中,表达产物经Westernblot和蛋白质谱鉴定含有HCCR蛋白的部分肽段。结论:成功构建了HCCR蛋白表达载体并进行体外表达及纯化。 相似文献
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目的探讨血清乙型肝炎病毒表面抗原浓度与人宫颈癌基因蛋白及甲胎蛋白的相关性。方法收集100例健康体检者和400例HBsAg阳性患者的血清,根据HBsAg浓度分为A、B、C、D四组。采用ELISA检测HCCR和HBsAg,化学发光法检测AFP。结果不同HBsAg浓度组与对照组HCCR、AFP比较,差异均有统计学意义(P<0.05);HBsAg浓度越高,血清中HCCR、AFP水平越高,且HCCR与AFP成正相关。结论随着HBsAg浓度的升高,血清中HCCR与AFP水平逐渐增高,且HCCR与AFP成正相关。 相似文献
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人宫颈癌基因在胃癌中的表达及其意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)在人胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其与临床病理特征的关系,初步评价HCCR在胃癌发生中的作用及其意义,为寻找胃癌新的诊断标志物另辟新径.方法 采用Western blot方法检测SGC-7901、BGC-823胃癌细胞系中HCCR蛋白表达;采用免疫组化法检测30例胃癌患者的癌组织和10例癌旁正常组织中HCCR蛋白表达.结果 HCCR蛋白在两种不同分化程度的胃癌细胞株中均有阳性表达;胃癌组织中HCCR阳性表达率为73.3%(22/30),其表达位于细胞的胞膜和胞质,10例癌旁正常组织均为阴性表达,两者差异具有统计学意义(P<0.01).HCCR的表达与胃癌患者的年龄、性别、浸润深度、组织分型、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移均无显著相关性(P>0.05).结论 HCCR与胃癌的发生密切相关,可能是反映早期胃癌发生的重要生物学指标之一. 相似文献
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目的探讨Pokemon、TIP30和人宫颈癌基因-1(HCCR-1)在直肠癌组织中的表达及预后的关系。方法纳入100例2016年6月至2018年6月本院收治的直肠癌患者,收集术中切取的100份直肠癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学方法检测Pokemon、TIP30及HCCR-1蛋白的表达水平。比较Pokemon、TIP30及HCCR-1不同表达水平患者临床资料的差异。对患者进行随访2年,采用多元Logistic回归分析影响直肠癌患者预后生存的危险因素,绘制Kaplan-Meier生存曲线,研究Pokemon、TIP30及HCCR-1蛋白表达情况对直肠癌患者预后生存的影响。结果直肠癌组织中Pokemon、HCCR-1蛋白表达水平显著高于癌旁组织,而TIP30蛋白表达水平显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);年龄、性别、局部浸润程度与直肠癌患者组织Pokemon、TIP30及HCCR-1蛋白表达无相关(P>0.05),但Dukes分期、淋巴结转移与Pokemon、HCCR-1蛋白表达呈正相关,而组织分化程度与TIP30蛋白表达呈负相关(P<0.05);100例直肠癌患者2年生存率为43.00%(43/100)。Dukes分期、淋巴结转移、分化程度、Pokemon高表达、TIP30低表达及HCCR-1高表达为影响直肠癌患者预后生存的独立危险因素(P<0.05)。Pokemon、HCCR-1蛋白低表达组平均生存时间显著长于高表达组,TIP30蛋白高表达组平均生存时间显著长于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Pokemon、HCCR-1、TIP30与在直肠癌患者组织中密切相关,可作为预测直肠癌患者预后的分子标志物和肿瘤治疗的潜在靶点。 相似文献
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目的:检查胃癌组织及癌旁组织中HCCR、pERK及pELK1的表达,探讨之间的相关性。方法通过免疫组化方法检测60例胃癌及癌旁组织中HCCR、pERK及pELK1的表达情况。结果 HCCR、pERK及pELK1在胃癌组织中的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、73.3%(44/60)及71.7%(43/60),均高于其在癌旁组织中的表达,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 HCCR、pERK及 pELK1三者之间具有一定的协调表达率,在肿瘤组织中表达明显增高,可用来作为胃癌临床免疫组化的辅助指标。 相似文献
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目的:克隆HCCR-2基因、原核表达并鉴定。方法:从培养的人骨肉瘤细胞SOSP-9607中提取总RNA,经RT-PCR获得HCCR-2基因。将该基因克隆到pGEM-T-Easy克隆载体中,测序、鉴定。将测序正确的HCCR-2基因亚克隆到pET-28a( )表达载体中,构建HCCR-2表达载体,IPTG诱导表达1~5h,做SDS-PAGE分析,鉴定HCCR-2蛋白的表达。结果:DNA测序证明,获得了HCCR-2基因,其序列与GenBank中报道序列完全一致。SDS-PAGE分析表明,HCCR-2蛋白获得高效表达,其相对分子质量为39kDa,表达量约占菌体总蛋白的25%。结论:HCCR-2基因的克隆和表达均获得了成功,为进一步探讨HCCR基因在骨肉瘤诊治中应用奠定了基础。 相似文献